Name: Выделение геномной ДНК из хвостов мышей (Видео) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-29T00:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 26 s
Description: Узнайте метод выделения геномной ДНК из хвостов 10-дневных мышат для генетического анализа. Этот подход помогает исследователям избежать загрязнения образцов и идентифицировать особей.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol style="margin-top: 0in"><li> Вырезать хвост штук (3 мм) и отметьте уши. </li><li> Добавить 720 мкл STE и 30 мкл протеиназы К (10 мг / мл акций). </li><li> Инкубировать при 55 ° С на блоке отопления и вихревые каждый час в течение 3 часов при максимальной скорости в течение 10 секунд. </li><li> Деактивировать протеиназы К при 70 ° С в течение 5 минут. </li><li> Quench на льду в течение 5 минут. </li><li> Центрифуга хвост ДНК в течение 10 минут на полной скорости. </li><li> Декантировать в новую пробирку, содержащую 720 мкл изопропанола. &nbsp; </li><li> Осадок ДНК путем обращения трубки или вортексе. </li><li> Спином вниз ДНК в течение 5 минут на полной скорости. Удалить супернатант. </li><li> Вымойте гранул с 70% этанола. </li><li> Спином вниз геномной ДНК 5 минут на полной скорости. Удалить супернатант. </li><li> Разрешить ДНК, чтобы высохнуть в течение 1-2 минут. </li><li> Ресуспендируют ДНК в 100-200 л м в зависимости от размера гранул. </li><li> Место трубке при 55 ° С в течение 1 часа для облегчения растворения ДНК. &nbsp; </li></ol>

<table><tbody><tr><td>STE</td><td>Буфер</td><td></td><td></td><td>100 mM Tris; pH 8.5 /5 mM EDTA /0.2% SDS /200 mM NaCl / в H2O</td></tr><tr><td>TE</td><td>Буфер</td><td></td><td></td><td>100 mM Tris; pH 5.0 /1 mM EDTA /10 mM NaCl</td></tr></tbody></table>

Выделение геномной ДНК из хвостов мышей

Isolation of Genomic DNA from Mouse Tails

Перед нами десятидневный мышонок; я проведу биопсию хвоста, после чего выделю геномную ДНК из полученного образца. Для этого я отсеку небольшой фрагмент хвоста длиной примерно 3 мм, помещу его в пробирку Эппендорфа и поставлю пробирку на сухой лед. Чтобы избежать перекрестного загрязнения образцов разных мышей, я обычно помечаю на лезвии бритвы место последнего разреза.Таким образом, при работе со следующей мышью я обязательно буду использовать чистый сегмент лезвия бритвы для взятия следующей биопсии хвоста. Чтобы различать разных мышей в одном помёте, вам понадобится способ их идентификации. Одним из таких способов является пробивание отверстия в ушах с помощью пробойника для ушей, который показан здесь.Осторожно возьмите мышь за загривок, переверните ее и зажмите хвост пальцами. Возьмите прокол для ушной раковины в другую руку и сделайте быстрый надрез в ухе мыши. Видите, как безболезненно это прошло?Теперь вы видите, что в этих пробирках Эппендорфа находятся фрагменты хвоста, и сейчас я добавлю растворы, которые помогут их перевариванию. Сначала я добавлю 720 µL раствора STE, а затем добавлю 30 µL протеиназа К. Вот так выглядит фрагмент хвоста, который мы отрезали перед началом переваривания.Теперь я помещу фрагменты хвоста в термоблок, нагретый до 55 °C. Во многих протоколах требуется постоянное перемешивание на качалке при 55 °C, но в моем случае это будет не нужно, так как я буду перемешивать фрагменты хвоста на вортексе. Теперь я буду вортексировать фрагмент хвоста в течение двух секунд.Раз, два. Итак, после вортексирования посмотрим, что осталось в пробирке Eppendorf; видно, что фрагмент хвоста полностью растворился. Активируйте протеиназу К при 70 °C в течение пяти минут. Остановите реакцию, поместив пробирку на лед на пять минут.Центрифугируйте части хвостовых отделов в микроцентрифуге в течение 10 минут на максимальной скорости. Максимальная скорость данной микроцентрифуги составляет 13 000 об/мин. Пока хвосты пищеварительного тракта центрифугируются, промаркируйте несколько пробирок Epinor и наполните их 750 µL изопропанола.После центрифугирования переваривных хвостов волосы и непереваренный материал образуют осадок на дне пробирки. Декантируйте раствор, содержащий переваренный материал, STE и протеиназу K, в пробирку с изопропанолом. ДНК начнет выпадать из раствора, приобретая призрачный и перистый вид; этот пузырек, плавающий в растворе, и представляет собой геномную ДНК, выделенную из хвоста мыши. После смешивания изопропанола и раствора STE геномная ДНК выпадет в осадок и будет выглядеть как маленький комочек. Центрифугируйте осажденную геномную ДНК в течение пяти минут на максимальной скорости в микроцентрифуге.В нижней части пробирки виден осадок геномной ДНК. Теперь я аспирирую раствор из пробирки, оставив только осадок геномной ДНК. При аспирации каждой следующей пробирки я буду менять наконечник.Поместите кончик этого аспиратора на кончик пробирки. После аспирирования STE и изопропанола я добавлю один миллилитр 70% ethanol для промывки осадка геномной ДНК. Поскольку осадок геномной ДНК обычно прилипает к стенке микроцентрифужной пробирки, и его трудно отделить для тщательной промывки в 70% ethanol, вам потребуется потереть пробирку о стойку для микроцентрифужных пробирок, которая у меня здесь.Это можно сделать следующим образом. Вот как выглядит геномная ДНК после осаждения и промывки 70% этанолом. Я снова центрифугирую её на максимальной скорости в течение пяти минут, а затем аспирирую 70% этанол; центрифугируйте осадки геномной ДНК после их промывки.Центрифугируйте в 70% этаноле в течение пяти минут на максимальной скорости, затем аспирируйте 70% этанол и дайте ДНК высохнуть в течение пяти минут. Посмотрите на осадок геномной ДНК на дне пробирки; он должен стать максимально сухим. Таким образом, я высушил осадки геномной ДНК из мышиных хвостов, и теперь я добавлю 100 µL 40 mM Трис (pH 8).Таким образом, я выдерживаю геномную ДНК при 50 °C, чтобы она перешла в раствор быстрее, чем при комнатной температуре. Примерно через час при 50 °C я либо заморожу её, либо помещу при 4 °C до начала проведения ПЦР-реакций, чтобы определить, какие мыши являются положительными по моему трансгену.

isolation-of-genomic-dna-from-mouse-tails

Research

JoVE Journal

Biology

Биология

Полный генотипирование образцов хвоста мыши, в том числе переваривания ткани и ПЦР отсчета, это делается в полтора часа, используя Сигмы SYBR экстракт зеленого-N-Amp тканей ПЦР комплект.

Быстрое Генотипирование Мышь ткани с помощью Сигмы Извлечение-N-Amp тканей PCR Kit

Мы демонстрируем иммунопреципитации хроматина (чип) метод идентификации факторных взаимодействий в тканях специфических генов во время или после наступления тканеспецифические экспрессии генов в тканях мышей в зачаточном состоянии. Этот протокол должен быть широко применяется для изучения тканеспецифические активации генов, как это происходит во время нормального эмбрионального развития.

Хроматин Иммунопреципитация Пробирной для тканеспецифические Гены использованием ранней стадии эмбрионы мыши

Мы представляем неинвазивный подход выборки, чтобы эффективно собирать образцы волос от неуловимого мелких млекопитающих, как показано на американских пищуха. Мы продемонстрировать полезность этого метода извлечения ДНК из проб волос и усиления несколько типов молекулярных маркеров, широко используется в исследованиях по экологии сохранение дикой природы.

Неинвазивный метод отбора проб волос для получения высоких ДНК Качество от Неуловимый мелких млекопитающих

В этом видео мы демонстрируем процедуру обрезания хвоста на мышиной модели для сбора периферической крови. Собранная кровь впоследствии подвергается центрифугированию для отделения плазмы, которая может быть использована для дальнейших экспериментов.

Процедура обрезки хвоста мыши для забора периферической крови и выделения плазмы

Опишем простой и быстрый экспериментальную процедуру для генерации первичных фибробластов из ушей и хвостов мышей. Процедура не требует специальной подготовки животных и может быть использован для генерации фибробластов культур от ушей, хранящихся при комнатной температуре в течение 10 дней.

Создание первичного фибробластов Культуры с уха мыши и хвост тканей

Микроинъекция ооцитов мыши обычно используется как для классического трансгенеза ( т. Е. Для случайной интеграции трансгенов), так и для CRISPR-опосредованного гена. В этом протоколе рассматриваются последние разработки в области микроинъекции с особым акцентом на стратегии контроля качества и генотипирования.

Генерация генетически модифицированных мышей посредством микроинъекции ооцитов

Мы описываем подробный протокол для assay лямбда выбрать мутации cII в культивируемых клеток трансгенных грызунов или соответствующих животных, лечение с агентом химические/физические интерес. Такой подход широко использовался для тестирования мутагенность канцерогенов в mammalian клетках.

Лямбда выбрать cII мутации системы обнаружения

Здесь мы представляем протокол быстро изолировать высокого качества ядер из свежих или замороженных ткани для вниз по течению массивно параллельной последовательности РНК. Мы включать моющих средств механические и гипотонической механические ткани нарушения и ячейки лизис вариантов, оба из которых могут быть использованы для изоляции ядер.

Изоляция взрослых спинной ядра для массивно параллельной сингл ядро РНК последовательности

Настоящий протокол описывает одну мутацию M213L в Gja1, которая сохраняет полноразмерную генерацию Connexin43, но предотвращает трансляцию меньшей изоформы GJA1-20k с внутренней трансляцией.

Удаление внутреннего трансляционного стартового участка из мРНК при сохранении экспрессии полноразмерного белка

Этот протокол обеспечивает простой, экономически эффективный метод выделения ДНК для анализа изменений микробиоты кишечника мышей во время развития аутоиммунного заболевания.

Анализ динамики фекальной микробиоты у мышей, склонных к волчанке, с использованием простого, экономически эффективного метода выделения ДНК

Мы разработали межвидовой сравнительный подход к онкогеномике, использующий геномный анализ и функциональный геномный скрининг для выявления и сравнения терапевтических мишеней в опухолях, возникающих на генетически модифицированных мышиных моделях, и соответствующего типа опухоли человека.

Генетическое профилирование и скрининг отсева на уровне генома для выявления терапевтических мишеней в мышиных моделях злокачественной опухоли оболочки периферических нервов

Узнайте метод выделения геномной ДНК из хвостов 10-дневных мышат для генетического анализа. Этот подход помогает исследователям избежать загрязнения образцов и идентифицировать особей.

Выделение геномной ДНК из хвостов мышей

Больше видео