ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Buckingham, M., Montarras, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Skeletal+muscle+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Genet+Dev%22%5BJournal%5D)">Skeletal muscle stem cells.</a> Curr Opin Genet Dev. 18, 330-336 (2008).</li>
<li>Relaix, F., Marcelle, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscle+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Muscle stem cells.</a> Curr Opin Cell Biol. 21, 748-753 (2009).</li>
<li>Joe, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscle+injury+activates+resident+fibro%2Fadipogenic+progenitors+that+facilitate+myogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Muscle injury activates resident fibro/adipogenic progenitors that facilitate myogenesis.</a> Nat Cell Biol. 12, 153-163 (2010).</li>
<li>Natarajan, A., Lemos, D. R., Rossi, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fibro%2Fadipogenic+progenitors%3A+A+double-edged+sword+in+skeletal+muscle+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Cycle%22%5BJournal%5D)">Fibro/adipogenic progenitors: A double-edged sword in skeletal muscle regeneration.</a> Cell Cycle. 9, (2010).</li>
<li>Sherwood, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+adult+mouse+myogenic+progenitors%3A+functional+heterogeneity+of+cells+within+and+engrafting+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Isolation of adult mouse myogenic progenitors: functional heterogeneity of cells within and engrafting skeletal muscle.</a> Cell. 119, 543-554 (2004).</li>
<li>Sacco, A., Doyonnas, R., Kraft, P., Vitorovic, S., Blau, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-renewal+and+expansion+of+single+transplanted+muscle+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Self-renewal and expansion of single transplanted muscle stem cells.</a> Nature. , (2008).</li>
<li>Montarras, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+isolation+of+satellite+cells+for+skeletal+muscle+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Direct isolation of satellite cells for skeletal muscle regeneration.</a> Science. 309, 2064-2067 (2005).</li>
</ol>

Нет конфликта интересов объявлены.

Целью этого протокола является разумный баланс между высокой урожайностью и высокой жизнеспособности очищенные клетки. Наиболее важным шагом в обеспечении того, чтобы здоровые клетки восстанавливаются является, как ожидается, ферментативной диссоциации начиная ткани. Обработка ткани должны быть особенно нежными, которое трудно доказать или оценить даже в аудиовизуальном формате. Другим ключевым фактором является длина процедуры. Больше времени требуется, чтобы перейти от донора до реципиента животное, тем ниже жизнеспособность и поэтому приживления эффективности. В случае возникновения вопроса о жизнеспособности, что не сразу ответил, глядя на частоте П. И. положительным событием в очищенных образцов ячейки после сортировки, мы полагаем, что анализ предельного разбавления для измерения clonogenicity осуществляется 3. Типичные виды из неповрежденной мышцы обычно выход у 1 из 15-20 клеток, способных инициировать миогенной или фиброзно / адипогенной колоний в пробирке. Хотя по существу, 100% от колонии инициированы депутатами содержат дифференцированные myotubes, только около одной трети колоний получены из ФАП содержат жировых клеток в дополнение к гладкой мускулатуре актина положительные миофибробластов.

<table border="1"><tbody><tr><th> Название реагента </th><th> Компания </th><th> Номер в каталоге </th><th> Комментарии </th></tr><tr><td> Коллагеназы II </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> C-6885, </td><td> 500 ед / мл </td></tr><tr><td> Коллагеназа D </td><td> Roche </td><td> 11088882001 </td><td> 1,5 Ед / мл </td></tr><tr><td> Свернуть II </td><td> Roche </td><td> 04942078001 </td><td> 2,4 Ед / мл </td></tr><tr><td> ячейки фильтра </td><td> BD </td><td> 352340 </td><td> 40 мкм </td></tr><tr><td> Труба с сотовыми фильтр </td><td> BD </td><td> 352235 </td><td> 40 мкм </td></tr><tr><td> Hoechst33342 </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> B2261 </td><td> 2-5 мкг / мл </td></tr><tr><td> CD31-FITC </td><td> Ebiosciences </td><td> 11-0311-85 </td><td> Клон 390 </td></tr><tr><td> CD45-FITC </td><td> Домашний </td><td></td><td> Клон I3 / 2 </td></tr><tr><td> SCA1-PECY7 </td><td> Ebiosciences </td><td> 25-5981-82 </td><td> Клон D7 </td></tr><tr><td> α-7 интегрин APC </td><td> Домашний </td><td> Запрос с Росси лаборатории </td><td> R2F2 </td></tr></tbody></table>

Очистка прародителей из скелетных мышц

Purification of Progenitors from Skeletal Muscle

Скелетная мышца состоит из нескольких популяций предшественников различных эмбрионального происхождения и потенциала развития. Миогенный прародителей, как правило, проживающих в &quot;спутниковые позиции ячейки&quot; между мембраной myofiber плазмы и ламинин богатых базальной мембраны, что ensheaths это, говорят сами за себя обновление клеток, которые являются исключительно привержены миогенной 1,2 линии. Мы недавно описал второго класса судна связанные прародителей, которые могут генерировать миофибробластов и белых адипоцитов, который реагирует на повреждения за счет эффективного ввода пролиферацию и обеспечивает трофическую поддержку миогенной клеток в процессе регенерации тканей 3,4. Один из самых надежных тестов, чтобы определить области развития и регенеративный потенциал данной популяции клеток зависит от их изоляции и трансплантации 5-7. С этой целью мы оптимизировали протоколов для их очистки с помощью проточной цитометрии из ферментативно диссоциированных мышцы, которые мы будем наброски в этой статье. Популяций полученные с помощью этого метода будет содержать либо миогенной или фиброзно / адипогенной колониеобразующих клеток: никаких других типов клеток, которые способны расширять в пробирке или выживания в естественных условиях доставки. Однако, когда эти группы населения используются сразу после сортировки для молекулярного анализа (например, QRT-PCR) необходимо иметь в виду, что только что сортируются подмножества может содержать и другие загрязнения клетки, которые не имеют возможности формирования колоний или прививка получателей.

Метод ферментативной диссоциации, маркировка поверхности и очистки с помощью проточной цитометрии фиброзно / адипогенной и миогенной прародителей из мышиных скелетных мышцах.

Скелетные мышцы содержат несколько популяций предшественников различного эмбрионального происхождения и дифференцировочного потенциала. Миогенные предшественники, обычно локализующиеся...

purification-of-progenitors-from-skeletal-muscle

Research

JoVE Journal

Biology

Биология

Выделение и культура чистой популяции покоящихся сателлитных клеток, мышц стволовых клеток населения, имеет важное значение для понимания мышечной биологии стволовых клеток и регенерации, а также трансплантации стволовых клеток для лечения в мышечной дистрофии и других дегенеративных заболеваний.

Изоляция, культура, и трансплантация мышечных сателлитных клеток

Кровеносные сосуды в пределах скелетных мышц портовых нескольких мульти-клона населения предшественников человека, которые идеально подходят для восстановительных приложений. Этот метод изоляции позволяет одновременно очистку трех мультипотентными клеточных популяций предшественником соответственно из трех структурных слоев кровеносных сосудов: миогенные эндотелиальных клеток из интиме, Перициты от СМИ, и адвентициальные клеток от адвентиции.

Выделение кровеносных сосудов, полученных мультипотентные прекурсоров от человека скелетных мышц

Здесь мы опишем протокол на основе эпигенетической перепрограммирования человеческих эмбриональных стволовых клеток (ЭСК) к генерации гомогенную популяцию скелетных мышечных клеток-предшественников, которые в разрешающих условиях культивирования образуют трехмерные кластеры сократительных мышечных волокон (myospheres), которые воспроизводят биологические особенности человека скелетные мышцы.

Генерация Myospheres Из ЭСК эпигенетическими Перепрограммирование

В пробирке культуры системы оказались незаменимым для понимания позвоночных миогенеза. Однако многое еще предстоит узнать о nonmammalian развития скелетных мышц и роста, особенно в базальных таксонов. Эффективный и надежный протокол для выделения взрослых стволовых клеток этой ткани, миогенных клеток-предшественников (ПДК), и поддержание их самообновление, пролиферацию и дифференциацию в первичной настройке культуры позволяет для идентификации консервативных и расходящихся регуляторных...

Подготовка первичной Миогенный предшественников Cell / миобластов культур от базальной позвоночных линий

Основными типами адгезивных клеток, полученными из мышц человека, являются миогенные клетки и фибробласты. Здесь клеточные популяции обогащаются с помощью магнитно-активируемой сортировки клеток на основе антигена CD56. Последующее иммуномечение специфическими антителами и использование методов анализа изображений позволяет количественно оценить цитоплазматические и ядерные характеристики в отдельных клетках.

Выделение и количественный Иммуноцитохимическая Характеристика первичных Миогенные клеток и фибробластов из человеческих скелетных мышц

Этот протокол описывает надежный, воспроизводимый и простой метод выделения и культивирования клеток-предшественников миобластов из скелетных мышц взрослых и пожилых людей. Мышцы, используемые здесь, включают в себя ноги и мышцы ног. Такой подход делает возможным выделение обогащенного населения первичных миобластов для функциональных исследований.

Подготовка и культура Миогенный прогениторных клеток / Первичные миобластов из скелетной мышце взрослых и выдержана Людей

Здесь мы опишем методологию получения чистой популяции человеческих миобластов из мышечной ткани взрослого человека. Эти клетки используются для изучения дифференцировки скелетных мышц in vitro и, в частности, для изучения белков, участвующих в передаче сигналов Ca 2+ .

Выделение человеческих миобластов, оценка миогенной дифференциации и контроль потребления кальция в магазине

Мы представляем методы изоляции, культивирования, характеристики и дифференциации клеток-прародителей мышц человека (HMPCs), полученных из скелетной мышечной биопсии ткани.  hMPCs, полученные и характеризуемые с помощью этих методов, могут быть использованы для последующего решения вопросов, связанных с исследованиями, связанными с миогенезом человека и регенерацией скелетных мышц.

Изоляция, Культура, Характеристика и Дифференциация клеток-прародителей мышц человека от процедуры биопсии скелетных мышц

Точная идентификация фибро-адипогенных клеток-предшественников (FAPs) и мышечных стволовых клеток (MuSC) имеет решающее значение для изучения их биологической функции в физиологических и патологических состояниях. Этот протокол содержит рекомендации по выделению, очистке и культивированию ФАПов и MUSC из мышц взрослых мышей.

FACS-изоляция и культура фибро-адипогенных предшественников и мышечных стволовых клеток из невозмутимых и поврежденных скелетных мышц мыши

Этот протокол описывает выделение мышечных стволовых клеток и фиброзно-адипогенных предшественников из отдельных скелетных мышц у мышей. Протокол включает в себя рассечение одной мышцы, выделение стволовых клеток путем сортировки клеток, активированных флуоресценцией, оценку чистоты путем иммунофлуоресцентного окрашивания и количественное измерение входа в S-фазу с помощью анализа включения 5-этинил-2'-дезоксиуридина.

Выделение популяций стволовых клеток в состоянии покоя из отдельных скелетных мышц

Этот протокол предусматривает стандартизированный метод изоляции и обогащения первичных миобластов из скелетных мышей взрослых и неонатальных мышей через диссоциацию тканей, последовательную фильтрацию, преплирование и определённые условия культуры, что позволяет создавать и поддерживать культуры миобластов, полученных из сателлитных клеток, для экспериментальных применений.

Выделение сателлитных клеток скелетных мышц для исследований миогенеза in vitro

Узнайте метод выделения миогенных и адипогенных прародительских клеток из скелетных мышц мышей с помощью ферментативного расщепления и сортировки FACS. Этот подход позволяет исследовать регенерацию тканей и разработку терапии мышечной дистрофии.

Очистка прародителей из скелетных мышц

Больше видео