Опорно-двигательного опробование, обучение и память Дефицит Drosophila Модели нейродегенерации

Поведение тесты для измерения опорно-двигательной функции, обучения и памяти, способности в

Общая цель процедуры состоит в том, чтобы сначала изучить обучение и память у взрослого Эссо Мелана Гастера, чтобы определить, страдают ли мухи от двигательного дефицита. Они проверяются на отрицательные гео налоги. Затем проверяется положительное поведение фототактики путем помещения мух в Т-образный лабиринт и регистрации задержки для движения к излюбленной освещенной камере.

Мухи с положительным фототаксисом затем привыкают ассоциировать освещенную камеру с горьким вкусом хинина. В конечном счете, мух проверяют, насколько хорошо они связывают аверсивный стимул с освещенной камерой, обеспечивающей измерение обучаемости и памяти. Ола, добро пожаловать в X lab.

Сегодня мы продемонстрируем вам два широко используемых поведенческих анализа для изучения нейродегенерации и дрозофилы. Во-первых, мы покажем вам аверсивный анализ подавления фототаксиса, продемонстрированный вам Вилом Фредо Сала, студентом нашей лаборатории, и мной, за которым последует анализ отрицательных геоналогов, продемонстрированный вам кайваном, аспирантом нашей лаборатории. Поддерживайте отпугивание мух на стандартной среде дрожжей с агаровой патокой кукурузной муки при температуре 25 градусов Цельсия в течение 12-часового цикла светлой темноты.

В день окклюзии сортируйте девственных мух на группы по 20 штук. Девственных мух можно узнать по светлому цвету и темному зеленоватому пятну, расположенному на нижней стороне брюшка. Мух следует перекладывать в свежий флакон каждые три дня, а мух-сестер следует использовать для минимизации различий, возникающих из-за генетического фона.

От 10 до 20 групп на каждый генотип или лечение должны быть проверены в исследовании GEO Taxes. Для начала отсортируйте самку и самца мух на группы по 10 особей. Эти мухи следует тестировать отдельно.

Так как на поведение существенно влияет пол. Подождите не менее одного часа после анестезии, прежде чем приступать к анестезии, чтобы убедиться, что двигательная активность не нарушена. Как только мухи будут идеально подготовлены, совместите отверстия двух пустых полистирольных флаконов, соединив их вертикально на нижнем флаконе.

Отмерьте восемь сантиметров от низа и нарисуйте круг по окружности. Теперь, когда аппарат собран, переложите группу из 10 мух в нижний флакон. Немедленно соедините флаконы и акклиматизируйте мух в течение одной минуты перед тестированием.

После того, как мухи сядут, аккуратно постучите ими по дну флакона и измерьте количество мух, которые поднимаются выше восьмисантиметровой отметки на 10 секунд. Количество мух на группу, прошедших эту отметку, записывается в процентах от общего числа мух. Повторите эту процедуру 10 раз на группу, давая мухам отдохнуть в течение одной минуты между попытками.

За шесть часов до проведения анализа PS самку сажают в полистирольные флаконы, содержащие смоченную в воде фильтровальную бумагу. Этот шаг гарантирует, что мухи будут голодать и станут более восприимчивыми к отвратительному вкусу. В этом анализе раствор хинина служит аверсивным стимулом.

Приготовьте рабочий раствор одного микромоляра из 0,1 молярного запаса. Т-образный лабиринт состоит из центральной колонны с люком и двух боковых камер, темной камеры и освещенной камеры. На отметке в два миллиметра с помощью ручной пилы отрежьте закрытый конец двух пластиковых центрифужных трубок объемом 15 миллилитров, установите переходники для разъемов на каждом конце и загерметизируйте соединение параформом.

Оберните одну трубку алюминиевой фольгой для обслуживания темной камеры. Соберите TMA, прикрутив светлые и темные камеры с каждой стороны центральной колонны. Закрыв люк посередине, завершите установку, подключив источник света к адаптеру световой камеры непосредственно Перед проведением анализа переложите каждую муху из группы из 10 человек в пустую 15-миллилитровую центрифужную пробирку и слегка закройте крышкой, чтобы предотвратить побег.

Далее откручиваем темную камеру от ТМА. Перенесите одну муху в трубку и сразу же вставьте ее обратно в лабиринт. Выключите свет в комнате и включите красную лампу.

Дайте мухе акклиматизироваться в темной камере в течение 30 секунд, а затем медленно включите источник света, освещающий освещенную камеру. Когда огонь зажжется, откройте люк, разделяющий две комнаты. Если муха подходит к освещенной камере в течение 10 секунд, она считается положительно фототактикой и готова к тренировке.

Отсутствие такой реакции указывает на проблему со зрительной системой и требует исключения из анализа. Как только положительный фототаксис подтвердится, верните муху обратно в темную камеру, закройте люк и выключите свет во время 32-го периода отдыха. Приготовьте аверсивный стимул, поместив фильтровальную бумагу в освещенную камеру и налив на нее пипеткой один миллилитр раствора хинина.

Убедитесь, что вся фильтровальная бумага полностью влажная с помощью аверсивных раздражителей. Чтобы начать кондиционирование, медленно откройте люк и включите свет. Позвольте мухе войти в камеру с ароматом хинина.

Через минуту верните муху обратно в темную камеру. Повторите эту процедуру девять раз, в общей сложности 10 попыток кондиционирования. Как правило, во время полета типа избегайте освещенной камеры после трех-пяти тренировочных испытаний сразу после тренировки.

Проведите пять испытательных испытаний. Если обученная муха не выходит на свет камеры в течение 10 секунд, это записывается как проход. Регистрируется и обозначается процент успешно сдавших экзамены в течение пяти последовательных испытаний.

ПК ноль. После обучения и первоначальной записи нулевого уровня на ПК каждую муху помещают обратно в исходную пронумерованную папку с едой и оставляют в сторону на шесть часов. Через шесть часов после тренировки проведите пять дополнительных тестовых испытаний, как было продемонстрировано ранее, этот процент успешно сдавших экзамен представляет собой шестой ПК и является мерой кратковременной памяти.

В отрицательном анализе геоналогов количество мух, пересекающих восьмисантиметровую отметку, преобразуется в проценты и представляется как скорость прохождения восхождения. Более 10 испытаний, как видно здесь справа, 10-дневный самец или самка пролетает над сцеживанием. Тау человека имеют значительный локомоторный дефицит по сравнению с GFP по сравнению с экспрессирующими мухами слева.

Эффективность теста на подавление аверсивного фототаксиса представлена средним процентом пройденных результатов или процентом успешных попыток предотвращения. В общих испытаниях мухи, экспрессирующие тау, показанные здесь справа, бледнеют, чтобы ассоциировать свет с горьким вкусом по сравнению с контрольной группой слева, как сразу после тренировки, так и при тестировании, через шесть часов. После просмотра этого видео у вас должно сложиться хорошее понимание того, как учиться обучению и памяти и мухам амиго.

И помните, что все дело в вас.