ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Мы благодарим Айлин Родан за критическое прочтение рукописи, и члены лаборатории за полезные обсуждения. Это исследование поддержано НИЗ, R01AA019526.

1. Создание экспозиции камеры <ol><li> Вырезать флакон плагин в половине использованием лезвия бритвы. Вместо этого можно использовать ватные шарики. </li><li> Нажмите половину флакона вилку, или ватным тампоном, на дно флакона пищи, чтобы сделать гладкую поверхность, что мухи не будут застревать дюйма </li><li> Если сделать несколько камер воздействия, убедитесь, что плагин флакон и пищевой занимать такой же объем в каждой камере. Отпечаток на стороне флакона может способствовать этому. </li></ol> 2. Разоблачение мух <ol><li> Соберите 8 мухи одного пола, возраста 1-5 дней, за день до воздействия на регулярные флаконах пищу без дрожжей. </li><li> Этикетка их в код, например, что экспериментатор знал о фактической генотип / штамм используется. </li><li> Передача восемь летит в экспозиции камеры, нажав. Не анестезию. </li><li> Добавить небольшое количество пищевой краситель, например, кислоты синий 9, до 200 доказательство этанол, чтобы сделать ее хорошо видно. </li><li> Пальто дно флакона вилку, или ватным тампоном, 0,5 мл этанола. </li><li> Вставьте вилку в этаноле воздействия флаконе. Убедитесь, что алкоголь, направленным на флаконе, а не к стенке флакона. </li><li> Начало таймер, отсчитывающий вверх. </li></ol> 3. Запись этанол-индуцированной интоксикации <ol><li> Каждую минуту после того, запускается таймер, нажмите экспозиции камеры на скамейке, чтобы поразить мух и наблюдать за ними в течение десяти секунд. </li><li> Запись числа стационарных мух за каждую минуту. Мухи являются стационарными, если они не могут выйти их спинами, остаются в одном месте, или быстро вибрируют крылья в течение всего десяти секунд наблюдения периода. Последний мух считается стационарным, поскольку подавляющее большинство этих мух стационарных между периодами быстрого движения крыла. Мухи не являются стационарными, если они могут сойти спиной и уйти и / или до флакона стене. </li><li> Экспозиции суда заканчивается, когда 4 или больше мух, отражаются как стационарные. </li><li> Отменить мух и выпускать воздух из экспозиции камеры для дальнейшего использования. </li></ol> 4. Определить время до 50% седации Время до 50% седации (ST50) является время после начала воздействия этанола, когда четыре из восьми мухи остаются неподвижными. Это определяется следующим образом: Либо: на первой минуте измерения, когда ровно четыре мухи являются стационарными. Или: если менее чем за четыре мухи (Y1) являются стационарными в одной временной точке (минута X), и более чем в четыре (Y2) на следующей точке измерения времени (минута X +1), то линейно интерполировать ST50 по формуле: ST50 = (4 - Y1) / (Y2 - Y1) + X 5. Повторите воздействия для определения допуска Разоблачение мух <ol><li> Определите ST50 (вес) для дикого типа контрольного штамма использовали в своем эксперименте. </li><li> Expose экспериментальных групп мух к этанолу, как описано выше. </li><li> Мера их ST50 (1), но продолжают разоблачать пока не дойдете до времени 2x ST50 (вес). </li><li> Трансфер снова летит в пустой флакон пищи, и удерживайте в течение 4 часов. </li><li> Повторно выставить мух, и определить, ST50 (2) воздействия 2. </li></ol> Определение толерантности Рассчитать толерантности в% (ST50 (2) / ST50 (1) - 1) x100. 6. Представитель Результаты: На рисунке вы видите, некоторые репрезентативные результаты были получены с 6-8 флаконов мух на генотип и дозы. Если стандартная ошибка существенно больше, то систематические проблема действительно произошло. Убедитесь, что этанол лица в экспозиции камеры, и что камеры того же объема. <img src="/files/ftp_upload/2541/2541fig1.jpg" alt="Рисунок 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Рисунок 1"> Рисунок 1. Дозовой кривой дикого типа мухи подвергается увеличение доли этанола. Восемь флаконов мух были выставлены на дозу и секс. Мужские и женские мухи показывают те же ST50 при каждой дозе (р&gt; 0,22, 2-полосная ANOVA), в то время ST50 через дозах значительно уменьшается с увеличением дозы этанола (р &lt;0,001). Обратите внимание, что летит из переполненных бутылки может быть существенно меньше, чем у здоровых бутылки, и эта разница размеров может повлиять ST50. Семенной каждую бутылку с 15-20 женщин укладки в течение 1-2 дней, чтобы получить оптимальную плотность личиночной за бутылку. <img src="/files/ftp_upload/2541/2541fig2.jpg" alt="Рисунок 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Рисунок 2"> Рисунок 2. Разоблачение мухи либо этанол 90%, или 100% воспроизводит ранее описанных этанола сопротивление, вызванное белый rabbit1 mutation2 (р &lt;0,001, 2-полосная ANOVA). <img src="/files/ftp_upload/2541/2541fig3.jpg" alt="Рисунок 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Рисунок 3"> Рисунок 3. Повторите экспозиции до 100% этанол, расположенных на 4-часовой интервал восстановления, приводит к значительному увеличению ST50 после второго облучения (р &lt;0,001, парные т-Тест). Обратите внимание, что мухи были выставлены в течение 24 минут во время первой экспозиции (соответствующий два раза превышающую их наивны ST50). Экспозиции для более короткий промежуток времени (12 минут) не вызывало значительное увеличение ST50 при повторном воздействии (данные не приведены).

<ol><li>Bainton, R. J., Tsai, L. T. -Y., Singh, C. S., Moore, M. S. Curr. Biol. 10, 187-194 (2000).</li>
<li>Rothenfluh, A., Threlkeld, R. J., Bainton, R. J., Tsai, L. T. -Y. Cell. 127, 199-211 (2006).</li>
<li>Devineni, A. V., Heberlein, U. Curr. Biol. 19, 2126-2132 (2009).</li>
<li>Scholz, H., Ramond, J., Singh, C. S., Heberlein, U. Neuron. 28, 261-271 (2000).</li>
<li>Allen, M. J., Godenschwege, T. A., Tanouye, M. A., Phelan, P. Semin. Cell Dev. Biol. 17, 31-41 (2006).</li>
<li>Feany, M. B., Bender, W. W. Nature. 404, 394-398 (2000).</li>
</ol>

Нет конфликта интересов объявлены.

В этой презентации, мы наметили простой способ определения этанола вызванной интоксикацией на основе предыдущих анализов описывается Бейнтон и соавт. 2000 1, и Rothenfluh и соавт. 2006 2. Так как алкоголь-индуцированного седация коррелирует с употреблением алкоголя предпочтение 3, этот анализ имеет важное значение для изучения нарушений употребления алкоголя. Анализа, описанного основана на испуга вызванного отрицательными geotaxis, и как алкоголь влияет на подверженность этой врожденной реакции. Перед началом экспозиции, убедиться, что все мухи показывают, нормальная реакция на такого испуга, то есть после нажатия вниз летит в пищу флаконе, все они должны подняться со дна в течение 10 секунд времени наблюдения. Примеры мух сократив отрицательные geotaxis включают взрыва чувствительных к захвату мутантов 5 и передвижения с дефицитом мухи вызвано дегенерацией дофаминовых нейронов 6. Хотя описанные анализа относительно проста, двух переменных заслуги наибольшего внимания для обеспечения воспроизводимых результатов. Во-первых, все экспозиции флаконы должны быть того же объема. Это включает в себя то, чтобы дне флакона содержит тот же объем пищи + флакон плагин / ватным тампоном, а также вставки этанол содержащие плагин же расстояние для каждого флакона. Совершенно пустой флакон можно использовать для этого теста, но это приводит к более ST50 значения, снижая пропускную способность анализа. Этот анализ также подходит для определения суммы толерантности мухи на разработку повторить воздействие этанола. Число переменных должны быть рассмотрены при выполнении повторить экспозиций. Во-первых, между воздействием интервал здесь описан как 4 часа. Эта переменная может быть изменена, но мы рекомендуем составлять не менее 2 часов, чтобы обеспечить оформление этанола из первой экспозиции. Смотрите Scholz и соавт. 2000 4 для кинетики этанола развития толерантности и распада. Вторая переменная, чтобы рассмотреть, является длительность первой экспозиции. Это, очевидно, должен быть одинаковым для контроля и экспериментальных мух. Однако, это не может привести к таким же количеством этанола доставляется на оба эти штаммы летать. Sedated мухи поглощать больше этанола, чем активные мухи 2, поэтому напряжение, успокаивает ранее, может получать более высокую дозу, чем позже, седативные напряжения, и таким образом развивать больше терпимости в связи с более высокой начальной дозы. Мы настоятельно предостеречь читателя при сравнении развития толерантности штаммов, которые показывают различия в начальных ST50 (1). Анализ описанных здесь является полезным инструментом в легко и воспроизводимо определения мухи поведенческих реакций на алкоголь.

<table><tbody><tr><td>Флаконы для экспозиции</td><td>www.flystuff.com</td><td>32-116</td><td></td></tr><tr><td>Заглушки</td><td>www.flystuff.com</td><td>49-102</td><td></td></tr><tr><td>Acid Blue 9</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>861146</td><td></td></tr></tbody></table>

Простой способ определения этанола Чувствительность в Мухи

A Simple Way to Measure Ethanol Sensitivity in Flies

Малые дозы этанола причиной мухи, чтобы стать гиперактивными, в то время как высокие дозы седативных. Чувствительность к этанолу вызванных торможение данного штамма летать коррелирует с этанолом предпочтения, что штамм с, и, следовательно, седативные препараты, весьма актуальной мерой для изучения генетики алкоголя ответы и питья. Мы продемонстрируем простой способ предоставления летит в этанол и измерить его опьяняющий эффект. Анализа мы описываем может определить, обостренная чувствительность, а также этанол терпимости индуцированных повторить экспозицию. Она не требует установки технически участвуют, и поэтому могут быть применены в любой лаборатории с основными инструментами культуры летать.

Простой анализ для измерения седативные эффекты этанола на<em&gt; Drosophila</em&gt; Мухи, основанный на потерю рефлекса, описывается.

Низкие дозы этанола вызывают гиперактивность у мух, в то время как высокие дозы оказывают седативный эффект. Чувствительность конкретного штамма мух к седации, вызванной этанолом...

Здравствуйте, меня зовут Томас Мэйплс, я из лаборатории доктора Адриана Ротенфлю на кафедре психиатрии Медицинского центра Юго-Западного Техасского университета в Далласе. Сегодня я продемонстрирую простую процедуру определения чувствительности мух к седации этанолом. Данный анализ основан на потере мухами право запрашиваемого рефлекса и способности к передвижению после воздействия этанола.Данный метод может быть использован для определения различий в чувствительности к алкоголю между различными штаммами drosophila и мутантами. Мы также можем использовать этот анализ для индукции толерантности у мух, под которой понимается снижение реакции на алкоголь после повторного воздействия. Приступим.Для данного эксперимента вам понадобятся следующие пробирки. Возьмите восемь плодовых мушек, собранных за один или два дня до начала работы. Экспозицию можно проводить как с самцами, так и с самками.Однако в каждом флаконе должен находиться только один пол. Пустой флакон с кормом, в котором нет мух, лезвие, две пробки для флаконов из хлопкоподобного материала. Если у вас нет таких пробок, можно использовать ватные шарики, микропипетку на 1000 µL с наконечниками, 200-процентный этанол с добавлением пищевого красителя, который можно приобрести в любом продуктовом магазине, и таймер.Первым делом необходимо изготовить камеру для экспозиции, в которой мы будем подвергать мух воздействию этанола и отслеживать их подвижность. Для создания такой камеры сначала разрежьте пробку от флакона пополам с помощью лезвия бритвы. Затем вставьте одну из половинок на дно флакона, чтобы она закрыла корм.Это создает ровную нелипкую поверхность, по которой могут передвигаться мухи. Если вы используете ватный тампон, аккуратно прижмите его, стараясь сделать поверхность максимально гладкой, чтобы мухи не застревали в волокнах ваты. При создании нескольких камер убедитесь, что корм и пробка виалы занимают одинаковый объем в каждой камере.Это гарантирует, что мухи в каждой камере подвергаются воздействию этанола в одинаковом объеме. С опытом можно легко подвергнуть воздействию три виала с мухами параллельно. После подготовки камер для экспозиции можно приступать к воздействию этанола на мух.Сначала перенесите флакон с восемью мухами в экспозиционную камеру, герметично закрыв камеру пробкой от флакона, в котором изначально находились мухи. Затем пипеткой нанесите 500 µL окрашенного этанола выбранной вами концентрации на один конец ватной пробки для флакона. После этого замените пробку экспозиционной камеры на пробку, смоченную этанолом, вставив конец, покрытый этанолом, внутрь камеры.Сразу после помещения пробки, покрытой этанолом, в экспозиционную камеру запустите таймер. Краситель в этаноле помогает убедиться, что этанол обращен в сторону экспозиционной камеры, а не к стенке флакона. Это особенно важно при использовании ватных тампонов вместо специальных пробок (buzz plugs), так как любая сторона ватного тампона может быть обращена внутрь флакона.В данном эксперименте мы используем 100% спирт, который диффундирует в камеру экспозиции, где мухи вдыхают его из воздуха. Каждую минуту после добавления в камеру экспозиции пробки, покрытой этанолом, мы будем подсчитывать количество мух, ставших неподвижными, что означает их неспособность перевернуться и передвигаться. Чем дольше мухи остаются мобильными, тем выше их устойчивость в каждом одномнутном интервале.Спровоцируйте движение мух, постучав по камере о лабораторный стол, чтобы убедиться, что все способные к передвижению особи начали двигаться. Наблюдайте за мухами в течение 10 секунд после постукивания в каждом одноминутном интервале, чтобы дать им время начать движение или перевернуться. Зафиксируйте, сколько из восьми мух остаются неподвижными в начале эксперимента.Большинство мух после испуга быстро забегают вверх по стенке флакона. После примерно шести минут воздействия 100% этанола они начинают двигаться вяло, а к 12-й минуте — иногда беспорядочно. Большинство мух становятся неподвижными, теряя способность ходить или перевернуться, если они оказались на спине.К мобильным мухам следует относить только тех особей, которые способны самостоятельно перевернуться и передвигаться. Мухи, которые просто шевелят ногами или крыльями на месте, должны считаться неподвижными. Особей, которые на протяжении всего периода наблюдения остаются на спине, также следует считать неподвижными, так как неспособность перевернуться является признаком интоксикации. Мухи, которые интенсивно вибрируют крыльями в течение всего десятисекундного периода наблюдения, также должны считаться неподвижными, даже если они перемещаются. Подавляющее большинство таких мух остаются стационарными в перерывах между периодами быстрого движения крыльев.Таким образом, мухи, способные перевернуться и передвигаться, считаются мобильными; мухи, которые не могут перевернуться, шевелят ногами и крыльями на месте или быстро вибрируют крыльями, считаются стационарными. Применяя эти правила, мы видим, что с увеличением времени воздействия паров этанола всё большее количество мух дикого типа переходит в стационарное состояние. Показателем, используемым в данном анализе для количественной оценки чувствительности к этанолу, является медианное время седации или MST.Мы определяем MST как количество минут воздействия этанола, необходимое для того, чтобы четыре из восьми мух в камере экспозиции стали неподвижными. Это значение легко определить, если ровно четыре мухи остаются неподвижными в определенный период наблюдения. Например, если ровно четыре мухи неподвижны после 11 минут воздействия, то MST составляет 11.Если ровно через 11 минут воздействия четыре мухи остаются неподвижными, и через 12 минут ситуация не меняется, то за основу берется первое значение, так как именно в это время мухи впервые достигают своего ST. Если в определенный период наблюдения четыре мухи не являются неподвижными, необходимо провести линейную интерполяцию времени, при котором четыре мухи стали неподвижными. Например, если количество неподвижных мух скачкообразно увеличивается с трех до пяти в интервале между девятой и 10 минутами воздействия, графически можно определить, что MST составляет 9.5. Следующие данные, полученные с помощью этого анализа, показывают, что данный дизайн эксперимента является точным способом измерения чувствительности к этанолу.В следующих экспериментах использовалось от шести до восьми флаконов (N), что указано на столбцах. MST самцов мух дикого типа, подвергнутых воздействию 100% Ethanol, составляет примерно 11 минут с низкой стандартной ошибкой. Междневная вариабельность низка и в большинстве случаев статистически незначима, однако мы все равно рекомендуем измерять экспериментальные и контрольные группы параллельно в один и тот же день.Также отметим, что мухи, подвергавшиеся воздействию в день A и день B, не являются одними и теми же особями. Это сибсы, представляющие одну и ту же генетическую линию; у самцов и самок мух, подвергавшихся воздействию 100% Ethanol, не наблюдалось различий в MST. Тем не менее, мы рекомендуем использовать особей только одного пола.При воздействии на самцов и самок мух возрастающих доз этанола мы получаем четкую кривую дозозависимого ответа, которая демонстрирует статистически значимое снижение MST в зависимости от увеличения концентрации этанола. Данный анализ также воспроизводит ранее опубликованные фенотипы, измеренные с помощью более сложной установки для испарения этанола: мухи с мутацией right rabbit one показали значительное увеличение MST. Это увеличение наблюдалось как при 100%, так и при 90% этанола.С помощью данного анализа мы также можем индуцировать и измерить толерантность к этанолу у мух. Толерантностью определяется снижение реакции на алкоголь после предварительного воздействия алкоголя для индуцирования толерантности. Поместите пробирку с мухами в среду с этанолом примерно на время, в два раза превышающее их MST.Например, мы подвергаем самцов дикого типа из стока Berlin воздействию 100% ethanol в течение 24 минут. После этого осторожно переместите восемь мух обратно в виалу с кормом, где они должны находиться в состоянии восстановления в течение четырех часов. Зафиксируйте исходное MST мух на виале, затем, по прошествии четырех часов восстановления, снова подвергните тех же самых мух воздействию той же дозы ethanol и зафиксируйте их второе MST.Как видно на этом графике, MST при втором воздействии этанола значительно выше, чем MST при первом воздействии, что указывает на развитие у мух толерантности к седативному действию этанола. Показатель толерантности рассчитывается путем деления второго значения MST для данной группы мух в виале на первое значение MST для тех же мух с последующим вычитанием единицы; полученное значение выражается в процентах толерантности, что в нашем случае составляет около 50%. Спасибо за просмотр и удачи в проведении вашего эксперимента.

a-simple-way-to-measure-ethanol-sensitivity-in-flies

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Нейронауки

Drosophila стала значительным модельной системы для рассечения клеточные и молекулярные основы поведенческих ответов на алкоголь. Здесь мы приводим протокол для сбора данных чувствительности алкоголя в циркадных контексте, который может быть с легкостью применить для других экспериментов и хорошо подходит для студентов исследований.

Flybar: Администрирование Алкоголь в мух

Простые анализы для измерения чувствительности к этанолу и быстрой толерантности у дрозофил облегчают использование этого модельного организма для исследования этих важных поведенческих свойств, связанных с этанолом. В данной работе описывается относительно простой, масштабируемый анализ для измерения чувствительности к этанолу и быстрой переносимости у мух.

Недорогой, масштабируемая Поведенческая Анализ для измерения этанола седации Чувствительность и быстрый толерантности в<em&gt; Drosophila</em

C. elegans является полезной моделью для изучения воздействия этанола на поведение. Мы представляем поведенческий анализ, который количественно оценивает влияние этанола на скорость локомоции ползающих червей; как первоначальную чувствительность, так и развитие острой функциональной толерантности к этанолу можно измерить с помощью этого анализа.

Анализ по измерению влияния этанола на локомоции Скорость<em&gt; Caenorhabditis Элеганс</em

Мы опишем протокол для индукции полезным и nonrewarding опыт в плодовых мух (дрозофилы) с использованием добровольного потребления этанола в качестве меры для изменения в награду государств.

Простой способ измерить изменения в Reward обращаемость за помощью<em&gt; Дрозофилы</em

Анализ CApillary FEeder (CAFE) - это простой, недорогой и высоконадежный метод исследования механизмов, лежащих в основе потребления пищи. Используемый с очень универсальным генетическим модельным организмом Drosophila melanogaster, он предоставляет мощное средство для получения нового понимания регуляторных механизмов потребления пищи.

Капиллярных фидерных Анализ мер по обеспечению продовольственной приема внутрь<em&gt; Дрозофилы</em

Современные методы измерения чувствительности к алкоголю в Дрозофиле предназначены для тестирования групп мух. Мы представляем простой, недорогой, высокопроизводительный анализ для оценки чувствительности седации алкоголя в большом количестве одиночных мух. Метод не требует специализированных инструментов и может быть выполнен в любой лаборатории с использованием общих материалов.

Высокопроизводительный метод измерения времени седации алкоголя индивидуальной дрозофилы меланогастер

Анализ Flypub измеряет поведение, которое плодовая муха Drosophila melanogaster отображает под влиянием этанола. Анализ может быть легко освоен экспериментаторами на всех уровнях и применен к различным испаряемым стимулам, облегчая злоупотребление психоактивными веществами и исследования наркомании.

Flypub для изучения этанола индуцированной поведенческой дистормогии и сенсибилизации

Вермишель и Capellini Обработка Испытания передней лапой ловкость воспользоваться естественной склонности грызунов манипулировать продукты питания использованием умелые лапы и цифры движений. Животные видеозаписи при работе с короткой нити сырого сухих макарон. Замедленное воспроизведение видео движения позволяет количественное передней лапой коррективы.

Вермишель и тесты Capellini Обращение: Простые количественные показатели ловкие функции передней лапы у крыс и мышей

Мыши и крысы, из-за их врожденной осторожности, первоначально медленно много новых пищевых продуктов, особенно в романе место. Это hyponeophagia легко измеряется в лаборатории, даже несмотря на лабораторных животных гораздо менее тревожными, чем их дикие...

Hyponeophagia: Мера Тревога в мышь

Метод для определения времени хода концентрации этанола в головном мозге крыс во время оперантного этанола самоуправления описано. Газовый хроматограф с пламенно-ионизационного детектора используется для количественного этанола в диализате образцы, поскольку она имеет чувствительность, необходимые для небольших объемов, которые генерируются.

Микродиализ этанола в течение оперантного этанола самоуправления и определение этанола методом газовой хроматографии

Узнайте простой метод определения чувствительности к этанолу у Drosophila melanogaster с помощью теста потери рефлекса выпрямления. Этот подход позволяет количественно оценить алкогольную седацию и толерантность у различных штаммов мух.

Простой способ определения этанола Чувствительность в Мухи

Больше видео