Прижизненные микроскопия пахового лимфатического узла

Общая цель этой процедуры заключается в визуализации и оценке артериального питания паховых лимфатических узлов in vivo. Это достигается путем создания кожного лоскута путем тщательного рассечения кожи на паховой области мыши, охватывающей паховый лимфатический узел. Затем соединительная ткань, покрывающая область лимфатических узлов, отделяется.

Далее необходимо удалить окружающую жировую ткань, чтобы обнажить питательную артериальную сосудистую сеть лимфатического узла. Наконец, изменения в сосудистой сети лимфатических узлов визуализируются и оцениваются с помощью прижизненной микроскопии, хотя препаратом, который вы увидите сегодня, является микроциркуляция паховых лимфатических узлов. Таким образом, хирургические методы могут быть использованы для других препаратов, таких как скептические мышцы, а также мозг.

Как правило, при выполнении этой техники новые люди испытывают трудности по двум основным причинам. Во-первых, вы имеете дело с живым животным, а во-вторых, поскольку вы проводите операцию на очень маленькой площади, любые нарушения в самом сосуде или в окружающей области могут оказать негативное влияние, что нанесет ущерб эксперименту, который вы хотите провести. Визуальная демонстрация этой техники имеет решающее значение для успеха.

Существует ряд сложных шагов, которые не очень хорошо переводятся из текста в фактическое выполнение техники. Важно это увидеть, чтобы сделать это правильно. С большим успехом.

Сначала мышь обезболивают, а операционную область бреют. Пожалуйста, ознакомьтесь с рукописью текста для получения подробной информации. Затем мышь можно поместить на прозрачную хирургическую доску в положении лежа на спине.

Прикрепите мышь к доске, прикрепив каждую подушечку лапы за день до эксперимента, смешайте гарду 180 4 в соответствии с инструкцией производителя. Затем, используя стандартную одноразовую чашку Петри в качестве формы, вылейте смесь на глубину около четверти дюйма и дайте ей застыть в течение ночи. Снимите защитный кожух с чашки Петри и поместите ее на операционную доску.

Поместите бритую мышь, находящуюся под наркозом, под зондом для препарирования. Сделайте разрез по средней линии вдоль вентральной поверхности брюшной полости с помощью щипцов номер пять из нержавеющей стали и прямых лезвий, пружинных ножниц. Затем продолжайте разрез по средней линии по диагонали в сторону конечностей и отводите кожу в сторону массивного позвоночного столба.

Как только лин станет хорошо виден, прикрепите втянутую кожу с помощью булавок от насекомых из нержавеющей стали и щипцов с эпоксидным покрытием из нержавеющей стали к сигаре. 180 4 тумбы. Добавьте в эту область физиологический раствор или ПСС.

Далее снимите тонкий слой соединительной ткани, покрывающий область вокруг лн. С помощью щипцов аккуратно подхватывают небольшие кусочки соединительной ткани и рассекают в сторону от лн. С помощью пружинных ножниц затем очистите жировую ткань, покрывающую и окружающую ЛН, пока микрососудистое русло не обнажится.

На этом этапе важно быть осторожным, чтобы никогда не контактировать с интересующей сосудистой сетью хирургическими инструментами и не травмировать сосуды, прикладывая к ним слишком большое усилие при манипуляциях с окружающими их тканями. Жир лучше всего удаляется от кожного сала, ослабляя соединительную ткань, удерживая жировую ткань вместе щипцами, а затем аккуратно удаляя жировую ткань до тех пор, пока поле зрения не станет чистым. После удаления соединительной и жировой тканей можно визуализировать основной артериальный сегмент, прилегающий к ВН, и прилегающее к вену покрытие.

После того, как исследуемый сегмент сосуда будет экспонирован под препарирующим эндоскопом, закрепите препарат на внутрижизненном микроскопе. Настройте линии суперфузии и всасывания. Во время этой части процедуры важно, чтобы обнаженная ткань всегда оставалась суперсросшейся с раствором Equilibrated PSS.

Суперфузия ПСС происходит под действием силы тяжести. Подавайте из начального резервуара в водяную рубашку с подогревом резервуара, который перфузируется 5% углекислым балансом азота, затем вниз по капельной линии со скоростью 10 миллилитров в минуту. Следует использовать всасывающую линию, чтобы продолжать вытягивать суперсинтезированный PSS из препарата, поместив его в нижнюю часть кожного лоскута, затем следует проверить температуру циркулирующей водяной бани и скорость суперсинтеза PSS и отрегулировать для достижения оптимальной температуры около 36 градусов Цельсия.

Во время подготовки дайте сосудистой сети сбалансироваться с PSS в течение не менее 60 минут. Следите за тем, чтобы животное не переохладилось с помощью ректального термометра и подав ему наружную тепловую лампу. Пока PSS выравнивается, количественно определите диаметр сосуда.

Использование видеоштангенциркулей в нескольких временных точках для обеспечения стабилизированной стабилизации сосуда определяется как размер диаметра, остающийся неизменным в пределах пяти микрометров в течение 20 минут. Измерения диаметра записываются на компьютере с помощью программного обеспечения для составления графиков. После периода равновесия оцените состояние сосуда с помощью специфического агониста гладкой мускулатуры, такого как фенилэфрин, как показано здесь с фенилэфрином.

Добавьте агонист в сюзе. Восемь агонистов должны быть оценены на каждом журнале, увеличивая кумулятивную концентрацию агониста по мере ее добавления к судьбе SUP между приемами каждого агониста. Фаза промывки с использованием PSS должна выполняться в течение 30 минут или до тех пор, пока сосуд не вернется к диаметру покоя.

Вот репрезентативные результаты паховой лунки после периода равновесия. Кормление артерии физиологическим раствором дает четкое изображение, которое позволяет идентифицировать как питательную артерию, обозначенную здесь красной стрелкой, так и жильную, обозначенную зеленой стрелкой, которая снабжает паховый лимфатический узел. На графике показан типичный вазоактивный ответ паховой Lnfe артериальной артерии на кумулятивное добавление SUP слитого фенилэфрина к физиологическому раствору.

При концентрации от 10 до минус девяти моляров до 10 до минус пяти моляров наличие сильной вазоконстрикции указывает на нормальную функцию гладких мышц в артериальной системе. На этом графике показана типичная вазоактивная реакция на кумулятивное добавление флифицированного ацетилхолина к физиологическому раствору. Показано от концентрации 10 до минус девяти моляров до 10 до минус пяти моляров.

Наличие устойчивой вазодилатации указывает на нормальную функцию эндотелия, присутствующую в артериальной системе. При попытке такой подготовки одним из ключевых моментов, о которых следует помнить, является сведение к минимуму помех судну и окружающей территории, чтобы добиться максимального успеха. После этой процедуры могут быть введены другие методы, такие как флуоресценция, для изучения других клеточных функций, таких как клеточный транспорт.

После разработки этого метода он проложил путь к переходу иммунологии и сосудистой биологии в новую область сосудистой иммунологии.