Оценка сигнализации Свойства эктодермальная эпителия Во время черепно-лицевых развития

Общая цель этой процедуры заключается в создании химерных эмбрионов путем трансплантации эктодермы от донорских эмбрионов на развивающуюся верхнюю челюсть куриных эмбрионов. Это достигается путем предварительного удаления донорской дермы для трансплантации. Затем участок хозяина подготавливают к приживлению.

Заключительным этапом процедуры является размещение донорской ткани на месте хозяина и фиксация трансплантата на месте. В конечном счете, могут быть получены результаты, которые показывают исключительное приживление донорской эктодермы, а с помощью молекулярного и морфологического анализа можно определить функцию донорской дермы. Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы биологии развития, такие как определение роли различных тканей во время морфогенеза.

Демонстрировать процедуру будет доктор Диана, старший исследователь нашей лаборатории. Перед началом этой процедуры подготовьте среду и убедитесь, что все необходимые растворы доступны и имеют правильную температуру. Затем, надев достаточную защиту для глаз, потяните микрокапиллярные трубки до тонкой точки над спиртовым пламенем.

Чтобы сделать стеклянные штифты, затачивайте вольфрамовые иглы, держа их в пламени пропановой горелки. Начните извлечение донорского эмбриона из скорлупы, поместив кусок ленты на конец яйцеклетки. Затем с помощью кончика иглы для рассечения создайте небольшое отверстие в центре ленты.

Вставьте в отверстие шприц объемом 10 миллилитров и иглу для подкожных инъекций 18 калибра, а также удалите один миллилитр альбумина из яйца. Затем с помощью иглы для рассечения сделайте небольшое отверстие в верхней части скорлупы. Поместите второй кусок скотча, чтобы закрыть это отверстие.

Прорежьте в яйце круглое отверстие с помощью двух пар щипцов. Возьмите эмбрион и положите его в миску с ледяным PBS для мытья. После того, как головка эмбриона была удалена, поместите ее в чашку для культуры тканей, содержащую DMEM комнатной температуры, не содержащую сыворотки.

Поместите чашку под препарирующий микроскоп, удерживая голову щипцами. Используйте пружинные ножницы, чтобы грубо рассечь верхнюю челюсть и лагон от остальной части головы. Затем с помощью держателя лезвия с острым лезвием бритвы обрежьте лобный носовой отросток от верхней челюсти.

С помощью пипетки перенесите фронтонный носовой отросток в 30-миллиметровую чашку Петри, содержащую достаточный объем дисса в PBS, и инкубируйте на льду в течение 20 минут. По истечении времени инкубации аспирируйте раствор диспа, не повреждая ткани. Затем полностью покройте ткани DMEM, содержащим 1% BSA.

Чтобы остановить пищеварение, перенесите ткань в новую чашку для культуры. Затем работа под препарирующим микроскопом. Удерживайте ткань незаточенной вольфрамовой иглой с помощью заточенной вольфрамовой иглы.

Отделите эктодерму, отделив ее от других тканей. После подготовки храните ткань трансплантата в DMEM с BSA на льду до тех пор, пока хозяин не будет готов к трансплантации. Используя ранее продемонстрированный способ, создаем окошко в курином яйце.

Поместите яйцеклетку, содержащую эмбрион, под препарирующий микроскоп с помощью двух пар щипцов. Возьмитесь за мембрану IGN и амнион и осторожно разорвите, чтобы сделать отверстие и обнажить эмбрион хозяина. Поверните голову, поместив пару щипцов на правый глаз и оказывая давление, удерживая голову неподвижно.

С помощью язычков и иглы удалите дерму хозяина для размещения трансплантата. Добавьте два микролитра нейтрального красного в чашку Петри, содержащую подготовленные графты. С помощью стеклянной пипетки перенесите трансплантат к хозяину.

Поместите трансплантат в положение, чтобы заменить удаленную эктодерму. Вставьте стеклянный штифт в каждый угол пересаженной ткани, чтобы закрепить трансплантат на месте после приживления. Плотно закройте окно скотчем.

Верните эмбрион в инкубатор до необходимой стадии развития для анализа, на этом изображении показана ткань URA цыпленка перепела, которая была окрашена специфическим антителом к Q-C-P-N-A перепелиному специфическому антителу. Пересаженная ткань располагается между двумя стрелками. Здесь нет никаких доказательств окрашивания QCPN в ткани meen kind из зеркала колокольчика цыплята мыши. Опять же, трансплантированная ткань расположена между двумя стрелками в гибридизации C two с одобренной специфической для знака B two повторяющейся последовательностью.

При зеркальном отражении генов первого класса показано, что экспрессия знака В-2 ограничена омом, содержащим трансплантат, показанный здесь как изображение курицы перепела: зеркало, которое было окрашено трихромом, окрашивается трихромом, придает коллагену и кости синий цвет. Удвоение скелета верхней челюсти видно, как показано стрелкой. На этом изображении показано зеркало колокольчика цыплята мыши, которое снова было окрашено в трихром

Наблюдается дублирование скелета верхней челюсти. На этом изображении показана радиоактивная гибридизация в C two нормальной экспрессии BMP seven в мехе эмбриона цыпленка, показанного здесь, это ткань зеркала колокольчика цыплята мыши. Можно видеть, что экспрессия BMP seven индуцируется в механизме, прилегающем к трансплантату, как указано стрелкой.

После просмотра этого видео у вас должно сложиться хорошее представление о том, как манипулировать эмбрионами цыплят, чтобы оценить механизмы, регулирующие развитие переднего и носового отростка.