Name: Эффективное полиэтиленгликоля (ПЭГ) Опосредованное Преобразование Мосс Physcomitrella patens /em (Видео) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-04-19T13:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 54 s
Description: Узнайте эффективную трансформацию протопластов мха Physcomitrella patens с помощью ПЭГ. Этот метод позволяет исследователям изучать функции генов и проводить генетические эксперименты.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Л. В. поддерживается NSF (IOS 1002837)

1. Создание Протопласты <ol><li> Добавить 9 мл 8% маннита в чашке Петри. </li><li> Используя лопаточку, поставить на 7 дней старый мох от 2-3 PPNH4 пластин 5 - в чашке Петри содержащие маннит. </li><li> Добавьте 3 мл 2% Driselase (Sigma D9515-25G) на чашки Петри. </li><li> Инкубировать чашки Петри при комнатной температуре с осторожном встряхивании в течение 1 часа. </li><li> Фильтры протопластов суспензии через 100 мкм сетки (BD Сокол 352 350). </li><li> Спиновые фильтруется подвески на 250 г в течение 5 минут. Удалить супернатант. </li><li> Повторное приостановить протопластов очень нежно с 500 мкл 8% маннита. </li><li> Добавить 9,5 мл 8% маннита в пробирку. Убедитесь, что протопласты полностью приостановлено. </li><li> Повторите фильтрации и повторного взвешивания шагов (1.6, 1.7 и 1.8) еще два раза. </li><li> Возьмите 10 мкл протопластов решения и считайте протопластов в гемоцитометра. </li><li> Умножьте количество протопластов в 16 квадратных области, 10000, чтобы получить количество протопластов на мл (см. Рисунок 1). </li></ol> 2. Преобразование <ol><li> Спиновые протопластов подвески на 250 г в течение 5 минут. Удалить супернатант. </li><li> Повторное приостановить протопластов в растворе ММГ при концентрации 1,6 млн. протопластов / мл. </li><li> Инкубируйте протопластов суспензии при комнатной температуре в течение 20 минут. </li><li> Добавить 600 мкл протопластов суспензии в пробирку, содержащие 60 мкг ДНК. Вихревые трубки мягко. </li><li> Добавить 700 мкл PEG / Ca раствора в протопластов / ДНК смеси. Вихревые трубки мягко, пока вся смесь является однородной. </li><li> Выдержите смесь при комнатной температуре в течение 30 минут. </li><li> В течение этого периода ожидания, крышки ПРМ-Б пластин с целлофан (80 мм диаметр круга, А. А. Упаковка Limited, Великобритания); позволяют целлофан для увлажнения на поверхности пластины, по крайней мере 5 мин. </li><li> С помощью шпателя, удалить пузырьки воздуха в ловушке между целлофан и пластины. </li><li> Развести смесь с 3 мл W5 решение. </li><li> Спиновые смеси на 250 г в течение 5 минут. Удалить супернатант. </li><li> Повторное приостановить протопластов в топленом 2 мл PRM-T (перед добавлением к протопластов это решение может быть жидким при 42 ° С). Plate 1 мл повторно приостановить протопластов в ПРМ-Б пластина покрывается целлофан. Оберните пластин с микропоры (3M, здравоохранение). Держите пластин при 25 ° С в ростовой камере. </li><li> Кроме того, протопластов может быть повторно приостановлено в 1 мл жидкой среды, покрытия и покрытия 0,5 мл на ПРМ-Б пластины, покрытой целлофаном. Это позволяет ускорить регенерацию, но количество растений регенерирующим ниже. </li><li> Рост камере установлен на 16 час. свет и 8 часов. темно цикла. </li><li> Перемещение целлофановых на на свежем пластины выбора через 4 дня после преобразования. </li></ol> 3. Представитель Результаты: Пример преобразования показан на рисунке 2. ДНК используется в этом примере была суперспиральной 7,8 кб плазмиды проведения кассету гигромицину устойчивостью. Количество протопластов покрытием был сокращен до 50% на фотографии. Фотографии были сделаны через две недели после растения были перенесены на выбор пластин. Эффективность трансформации не зависит от концентрации ДНК до 60 мкг. Более высокие концентрации ДНК наносят ущерб эффективности преобразования. Данные показали, что этот метод обеспечивает последовательное результат в широком диапазоне ДНК количествах. Этот метод может также генерировать стабильные трансформанты эффективно, как показано в таблице 1, мы можем получить около 4 стабильные трансформанты на микрограмм линеаризованной ДНК, что значительно выше, чем сообщалось ранее 14. Мы также проверили влияние теплового шока на эффективность трансформации путем преобразования суперспиральной плазмиды проведения ген флуоресцентного белка в качестве маркера. Теплового шока было проведено через 10 минут после комнате температуры инкубации (в пределах Шаг 2.6) путем инкубирования смеси в 45 ° С водяной бане в течение 3 минут. Смесь выдерживают на водяной бане комнатной температуры сразу после теплового шока в течение 17 мин. Результаты были записаны 22 часов после преобразования. Отношения трансформантов с и без теплового шока, были очень похожи (~ 25%), но мы наблюдали негативное влияние теплового шока на жизнеспособность протопластов (данные не приведены). <img src="/files/ftp_upload/2560/2560fig1.jpg" alt="Рисунок 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Рисунок 1"> Рисунок 1. Посмотреть протопластов в гемоцитометра. Разделе необходимо для протопластов подсчета обозначается красным квадратом. Обратите внимание на 16 квадратов, необходимых для подсчета протопластов (см. 1.11), изображение показывает количество протопластов 24 (240 000 клеток / мл). <img src="/files/ftp_upload/2560/2560fig2.jpg" alt="Рисунок 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Рисунок 2"> Рисунок 2. Картинки из 18 дневных переходных трансформантов. Протопласты были трансформируется с указанным количеством суперспиральной плазмиды. : 15μg; B: 30μg; C: 60μg; D: 120μg. <table border="1"><tbody><tr><td> Количество ДНК (мкг) </td><td> Эффективность (tranformants / мкг ДНК) </td></tr><tr><td> 15, суперспиральной плазмиды </td><td> 120 ± 24 </td></tr><tr><td> 30, суперспиральной плазмиды </td><td> 145 ± 54 </td></tr><tr><td> 60, суперспиральной плазмиды </td><td> 121 ± 60 </td></tr><tr><td> 120, суперспиральной плазмиды </td><td> 71 ± 38 </td></tr><tr><td> 60, линеаризованной плазмиды </td><td> 4 ± 1 </td></tr></tbody></table> Таблица 1. Преобразование эффективности в различных количествах ДНК.

<ol><li>Abel, S., Theologis, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transient+transformation+of+Arabidopsis+leaf+protoplasts%3A+a+versatile+experimental+system+to+study+gene+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+J%22%5BJournal%5D)">Transient transformation of Arabidopsis leaf protoplasts: a versatile experimental system to study gene expression.</a> Plant J. 5, 421-427 (1994).</li>
<li>Wood, A. J., Oliver, M. J., Cove, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bryophytes+as+model+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Bryologist%22%5BJournal%5D)">Bryophytes as model systems.</a> Bryologist. 103, 128-133 (2000).</li>
<li>Schaefer, D. G., Zrÿd, J. -P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+gene+targeting+in+the+moss+Physcomitrella+patens%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+J%22%5BJournal%5D)">Efficient gene targeting in the moss Physcomitrella patens.</a> Plant J. 11, 1195-1206 (1997).</li>
<li>Schaefer, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+targeting+in+Physcomitrella+patens%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Plant+Biol%22%5BJournal%5D)">Gene targeting in Physcomitrella patens.</a> Curr. Opin. Plant Biol. 4, 143-150 (2001).</li>
<li>Kamisugi, Y., Cuming, A. C., Cove, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parameters+determining+the+efficiency+of+gene+targeting+in+the+moss+Physcomitrella+patens%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">Parameters determining the efficiency of gene targeting in the moss Physcomitrella patens.</a> Nucleic Acids Res. 33, e173-e173 (2005).</li>
<li>Cove, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+moss+Physcomitrella+patens%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Genet%22%5BJournal%5D)">The moss Physcomitrella patens.</a> Annu. Rev. Genet. 39, 339-358 (2005).</li>
<li>Kamisugi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mechanism+of+gene+targeting+in+Physcomitrella+patens%3A+homologous+recombination%2C+concatenation+and+multiple+integration%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">The mechanism of gene targeting in Physcomitrella patens: homologous recombination, concatenation and multiple integration.</a> Nucleic Acids Res. 34, 6205-6215 (2006).</li>
<li>Vidali, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+formin-mediated+actin-filament+elongation+is+essential+for+polarized+plant+cell+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Rapid formin-mediated actin-filament elongation is essential for polarized plant cell growth.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. , (2009).</li>
<li>Sawahel, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transfer+of+foreign+DNA+into+Physcomitrella+protonemal+tissue+by+using+the+gene+gun%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Transfer of foreign DNA into Physcomitrella protonemal tissue by using the gene gun.</a> Plant Mol. Biol. 10, 315-316 (1992).</li>
<li>Schaefer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stable+transformation+of+the+moss+Physcomitrella+patens%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Gen.+Genet%22%5BJournal%5D)">Stable transformation of the moss Physcomitrella patens.</a> Mol. Gen. Genet. 226, 418-424 (1991).</li>
<li>Cho, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Particle+bombardment+mediated+transformation+and+GFP+expression+in+the+moss+Physcomitrella+patens%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Cells%22%5BJournal%5D)">Particle bombardment mediated transformation and GFP expression in the moss Physcomitrella patens.</a> Mol. Cells. 9, 14-19 (1999).</li>
<li>Ashton, N. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+bryophyte+Physcomitrella+patens+replicates+extrachromosomal+transgenic+elements%5BTitle%5D)+AND+%22New+Phytol%22%5BJournal%5D)">The bryophyte Physcomitrella patens replicates extrachromosomal transgenic elements.</a> New Phytol. 146, 391-402 (2000).</li>
<li>Hohe, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+improved+and+highly+standardized+transformation+procedure+allows+efficient+production+of+single+and+multiple+targeted+gene-knockouts+in+a+moss%2C+Physcomitrella+patens%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Genet%22%5BJournal%5D)">An improved and highly standardized transformation procedure allows efficient production of single and multiple targeted gene-knockouts in a moss, Physcomitrella patens.</a> Curr. Genet. 44, 339-347 (2004).</li>
<li>Vidali, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Profilin+is+essential+for+tip+growth+in+the+moss+Physcomitrella+patens%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Cell%22%5BJournal%5D)">Profilin is essential for tip growth in the moss Physcomitrella patens.</a> Plant Cell. 19, 3705-3722 (2007).</li>
</ol>

Нет конфликта интересов объявлены.

Метод позволяет представленные здесь просты и последовательны ДНК превращение в Physcomitrella протопластов patens. Этот метод был первоначально разработан для Arabidopsis 1, но здесь мы продемонстрировали, что он хорошо работает с протопластов Physcomitrella patens, проще и различные растения. Поэтому этот метод может быть применен к другим видам растений с незначительными изменениями. Возможные изменения для оптимизации включают протопластов концентрация в ММГ, время инкубации в растворе ММГ и PEG / Ca. Мы решили использовать 60 мкг ДНК в наших рутинных экспериментов, так как количество трансформантов линейно возрастает с концентрацией ДНК до этого момента (табл. 1). Мы могли бы получить примерно 7000 трансформантов переходных или 200 стабильных трансформантов на одном 60 мкг ДНК трансформации, что позволяет для дальнейшего обследования и анализа большого числа растений. Преобразовано протопластов может быть либо распространяются с жидкой средой покрытие или PRM-T. Хотя эффективность регенерации ниже при жидкой среде покрытия используется, мы выбираем этот метод, когда протопластов были преобразованы с суперспиральной плазмид. Как показали в таблице 1, преобразования сделано с суперспиральной плазмидной ДНК генерировать много трансформантов и, таким образом, мы можем получить большое количество растений с жидкой средой обшивки. Кроме того, распространение протопластов с жидкой средой покрытие позволяет ускорить регенерацию, что очень важно для экспериментов с участием переходных фенотипов, таких как RNAi сбить экспериментов 9,15. Кроме того отсутствие верхней агар позволяет легко изоляции завод по иммунной и RT-PCR 9,15.

<table border="1"><tbody><tr><td> Название реагента </td><td> Ингредиент </td></tr><tr><td> PPNH 4 </td><td> 1,84 мМ KH 2 PO 4 3,4 мМ Ca (NO 3) 2 1 мМ MgSO 4 2,72 ммоль диаммония тартрат 54 мкМ FeSO 4 .7 H 2 O 9,93 мкМ H 3 BO 3 1,97 мкМ MnCl 2 0,4 H 2 O 0,23 мкМ CoCl 2 0,6 H 2 O 0,19 мкМ ZnSO 4. 7H 2 O 0,22 мкм CuSO 4. 5H 2 O 0,10 мкМ Na 2 MoO 4 · 2H 2 O 0,168 мкМ К. И. Добавить 0,7% агар на твердой среде. </td></tr><tr><td> PRM-B </td><td> PPNH 4 с 6% маннита и 0,8% агара. Добавьте 10 мл 1М CaCl 2 до 1 л до заливки плиты. </td></tr><tr><td> PRM-T </td><td> PPNH 4 с 6% маннита и 0,6% агара. Добавить 0,5 мл 1М CaCl 2 до 50 мл перед использованием. </td></tr><tr><td> Покрытие жидкой среде </td><td> PPNH 4 с 8,5% маннита без агара. Добавить 0,5 мл 1М CaCl 2 до 50 мл перед использованием. </td></tr><tr><td> 2% Driselase </td><td> Добавить 4 г Driselase (Sigma D9515-25G) до 200 мл на 8% маннита. Движение на медленном огне 30 мин. при комнатной температуре, инкубировать 30 мин. при 4 ° С, и перемешать на медленном огне 5 мин. при комнатной температуре. Спиновые 2500 г в течение 10 мин, отбросить гранул. Фильтр с 0,22 мкм, и хранить замороженные в 10 мл аликвоты. Оттепель в ванну с водой комнатной температуры перед использованием. </td></tr><tr><td> ММГ </td><td> 0,4 М маннитол 15 мМ MgCl 2 4 мМ MES (рН 5,7) </td></tr><tr><td> PEG / Ca </td><td> 4 г PEG4000 3 мл H 2 O 2,5 мл 0,8 М маннитол 1 мл 1М CaCl 2 </td></tr><tr><td> W5 </td><td> 154 мМ NaCl 125 мМ CaCl 2 5 мМ KCl 2 мМ MES (рН 5,7) </td></tr></tbody></table>

Эффективное полиэтиленгликоля (ПЭГ) Опосредованное Преобразование Мосс physcomitrella patens</em

Efficient Polyethylene Glycol (PEG) Mediated Transformation of the Moss Physcomitrella patens

Простой и эффективный способ превратить Physcomitrella pantens протопластов описано. Этот метод адаптирован из протоколов для Physocmitrella protonemal протопласта и Arabidopsis трансформация протопластов мезофилла 1. Из-за его способности пройти эффективный митотической гомологичной рекомбинации, Physcomitrella patens стала важной модельной системой в последние годы 2. Эта способность позволяет высоких частот генов таргетинга 3-9, которые не видели в других растениях, таких как модель Arabidopsis. Чтобы воспользоваться всеми преимуществами этой системы, нам нужна эффективная и простой метод доставки ДНК в клетки мха. Наиболее распространенные способы, чтобы преобразовать эту мох бомбардировки частицами 10 и PEG-опосредованного поглощения ДНК 11. Хотя бомбардировки частицами может привести к высокой эффективности преобразования 12, ген пушки не доступны для многих лабораторий и протокол трудно стандартизировать. С другой стороны, ПЭГ опосредованной трансформации не требует специализированного оборудования, и может быть выполнена в любой лаборатории со стерильной капотом. Здесь мы покажем, простой и очень эффективный метод для трансформации протопластов мха. Этот метод может генерировать более 120 переходных трансформантов на микрограмм ДНК, что является улучшением по сравнению с наиболее эффективный протокол сообщалось ранее 13. Из-за своей простоты, эффективности и воспроизводимости, этот метод может быть применен к проектов, требующих большого числа трансформантов, а также для рутинных преобразований.

Простой и эффективный метод для преобразования<em&gt; Physcomitrella pantens</em&gt; Протопластов описано. Этот метод адаптирован из протоколов<em&gt; Physocmitrella</em&gt; Protonemal протопластов и<em&gt; Arabidopsis</em&gt; Мезофильных протопластов преобразования<sup&gt; 1</sup&gt;.

Эффективное полиэтиленгликоля (ПЭГ) Опосредованное Преобразование Мосс Physcomitrella patens</em

Описан простой и эффективный метод трансформации протопластов Physcomitrella patens. Данный метод адаптирован на основе протоколов для Physcomitrella ...

Общая цель данной процедуры — трансформация протопластов SCO Metre. Это достигается путем первоначального переваривания растений с помощью Drizly. Затем протопласты промывают маннитом для удаления Drizly, после чего их инкубируют с ДНК и ПЭГ.Наконец, трансформированные протопласты распределяют по планшетам и инкубируют. В итоге можно получить результаты, которые с помощью флуоресцентной микроскопии покажут экспрессию флуоресцентно меченных белков в трансформированных протопластах. Процедуру продемонстрирует Y lu, постдок из моей лаборатории.Основным преимуществом данного метода является его эффективность и стабильное получение протопластов, экспрессирующих интересующий белок. Для выделения протопластов мха начните с добавления 9 мл 8% маннитола в чашку Петри с помощью шпателя. Поместите мох возрастом от пяти до семи дней с двух-трех чашек с PP NH₄ в маннитол. Рецепты данного и дополнительных реагентов приведены в прилагаемом письменном протоколе. Затем добавьте 3 мл 2% дризли и инкубируйте при комнатной температуре в условиях осторожного встряхивания в течение одного часа.Профильтруйте смесь через сетку с размером ячеек 100 micron, чтобы получить однородную суспензию зеленого цвета. Затем центрифугируйте фильтрат при 250 G в течение пяти минут. Очень осторожно слейте супернатант.Ресуспендируйте протопласты в 500 µL 8% маннитола. Затем добавьте еще 9,5 mL 8% маннитола. Убедитесь, что протопласты полностью суспендированы.Повторите этапы промывки еще два раза, снова центрифугируя раствор при 250 G в течение пяти минут. Удалите супернатант и повторно суспендируйте протопласты, сначала в 500 microliters.Затем добавьте 9,5 мл 8% маннитола и определите количество протопластов в 10 мкл суспензии с помощью гемоцитометра для последующей трансформации изолированных протопластов ДНК. Сначала центрифугируйте смесь протопластов при 250 G в течение пяти минут.Удалите супернатант и ресуспендируйте протопласты в растворе MMG до концентрации 1,6 миллиона на миллилитр. Инкубируйте суспензию при комнатной температуре в течение 20 минут. Затем добавьте 600 мкл раствора протопластов в культуральную пробирку, содержащую 60 мкг ДНК. Перемешайте.Осторожно добавьте 700 µL раствора ПЭГ с кальцием и перемешайте. Тщательно инкубируйте образец при комнатной температуре в течение 30 минут в этот период ожидания. Накройте планшеты PRMB целлофаном.Затем разбавьте суспензию тремя миллилитрами раствора W5 и центрифугируйте при 250 G в течение пяти минут. Для удаления ПЭГ ресуспендируйте протопласты в двух миллилитрах PRMT; высейте по одному миллилитру на каждую чашку с PRMB, накрыв их целлофаном. Храните чашки при 25 °C в климатической камере.Наконец, через четыре дня после трансформации перенесите целлофан на свежие селекционные среды. На данном рисунке показан пример 18-дневных растений, регенерированных из протопластов, трансформированных 15 мкг суперскрученной плазмидной DNA, несущей кассету устойчивости к гигромицину. В данном случае в протопласты были трансформированы 30 мкг той же суперскрученной плазмидной DNA.В данный образец было трансформировано 60 micrograms плазмидной ДНК. Наконец, эти растения были регенерированы из протопластов, трансформированных 120 micrograms той же суперскрученной плазмидной ДНК, содержащей кассету устойчивости к гигромицину. Эффективность трансформации не зависит от концентрации ДНК до 60 micrograms.Однако более высокие концентрации ДНК препятствуют успешному выполнению данной процедуры. Данные показывают, что этот метод обеспечивает стабильные результаты в широком диапазоне количества ДНК за один семестр. При правильном выполнении данная методика занимает три часа.После выполнения данной процедуры можно применить дополнительные методы, такие как транзиентная РНК-интерференция (RNAi) и нокаут генов, чтобы получить ответы на дополнительные вопросы о функциях генов.

efficient-polyethylene-glycol-peg-mediated-transformation-moss

Research

JoVE Journal

Biology

Биология

Протокол описывает экспрессии белка использованием метилотрофных...

Экспрессия рекомбинантных белков в метилотрофных дрожжей Pichia pastoris</em

В этой статье описывается генетической трансформации одноклеточных морских...

Геномная Трансформация Picoeukaryote<em&gt; Ostreococcus Тельца</em

Методология с высокой пропускной способностью, автоматизированное, табачных протопластов производство и преобразование описано. Роботизированная система позволяет массово-параллельной экспрессии генов и открытие в модельной системе BY-2, которая должна быть переводимым не-модельных культур.

Роботизированной платформы для высокой пропускной способности выделения протопластов и трансформации

Мы описываем надежную стратегию замены генов генетически манипулировать головне гриба Ustilago maydis. Этот протокол объясняет, как генерировать делеционных мутантов для исследования инфекции фенотипы. Он может быть расширен , чтобы модифицировать гены любым желаемым способом, например, путем добавления последовательность , кодирующую флуоресцентный белок тег.

Генетическая Манипуляция растений Возбудитель<em&gt; Ustilago maydis</em&gt; По изучению Грибковые биологии и растений микробных взаимодействий

Мы разработали простой и эффективный протокол для приготовления большого количества сои протопласта для изучения сложных механизмов регулирования и сигнализации в живых клетках.

Простой метод для изоляции протопласта сои и приложения для анализа переходных ген выражение

Agrobacterium опосредованной преобразования с помощью метода цветочные цинкования успешно может использоваться для создания стабильной трансгенных линий модели extremophyte Schrenkiella parvula. Мы представляем протокол изменения от того для Arabidopsis thaliana, учитывая различные роста привычки и физиологические характеристики extremophyte.

Роста и Agrobacterium опосредованной цветочно цинкования трансформации Extremophyte Schrenkiella parvula

Здесь мы представляем высокопроизводительный протокол для временной трансфектации миллионов протопластов кукурузы для тестирования больших библиотек плазмид в клетках мезофилла кукурузы.

Масштабируемая трансфекция протопластов мезофилла кукурузы

В этом протоколе описывается использование Agrobacterium tumefaciens-опосредованной трансформации (АМТ) для интеграции интересующего гена (генов) в ядерный геном зеленой микроводоросли Chlorella vulgaris, что приводит к производству стабильных трансформентов.

Agrobacterium tumefaciens-опосредованная генная инженерия зеленых микроводорослей, Chlorella vulgaris

Мы представляем простой, эффективный и воспроизводимый протокол для трансформации Phytophthora palmivora, опосредованной агробактериями, который также применим к P. capsici.

Упрощённый метод трансформации Phytophthora palmivora с помощью агробактерий

Рост некоторых сортов льна под питательных результаты стресс в геномных вариаций в подмножество генома и фенотипической изменчивости. Комплекс вставки на конкретном участке связано с ростом в различных питательных режимов и с изменениями в экспрессии генов, вокруг этого сайта.

Экологически индуцированные наследственные изменения в Лен

Узнайте эффективную трансформацию протопластов мха Physcomitrella patens с помощью ПЭГ. Этот метод позволяет исследователям изучать функции генов и проводить генетические эксперименты.

Эффективное полиэтиленгликоля (ПЭГ) Опосредованное Преобразование Мосс Physcomitrella patens

Больше видео