Спинной мозг электрофизиологии II: внеклеточной изготовление электродов Всасывающая

Hi.My зовут Реш Гэри Дори, и я работаю научным сотрудником в лаборатории FAF Института биологических исследований Солка. Сегодня я покажу вам, как изготовить внеклеточные аспираторы двумя методами. Эти электроды можно использовать для электрофизиологической записи моего спинного мозга in vitro.

Используйте спиртовую лампу в качестве источника тепла, чтобы расплавить пластиковую трубку из полиэтилена 90 до желаемой ширины. Держите трубку над зажженным пламенем и снимайте, когда оно начнет плавиться, аккуратно раздвигайте концы, стараясь не сломать середину. Этот процесс показан еще раз.

Снимите трубку, пока она размягчается и плавится, и аккуратно раздвиньте концы. Разрежьте трубку острым лезвием бритвы в точке, соответствующей приблизительной ширине измеряемого образца на толстом конце трубки. Сделайте надрез под углом 45 градусов.

Теперь на толстый конец необходимо установить дикое и уплотнительное кольцо. Вставьте этот конец трубки через шестигранное отверстие ферала. Затем вставьте конец трубки в резиновое уплотнительное кольцо.

Эта установка будет ввинчена в переднюю часть электрода. Отрежьте острым лезвием бритвы небольшой трубки Zeus длиной один сантиметр и осмотрите концы на предмет чистого среза и открытого кабана Отрежьте 10-сантиметровый кусок трубки PE 90 с помощью острого лезвия бритвы. Поместите каплю сварного шва JB на середину маленькой трубки с помощью всасывания через горло.

Втяните маленькую трубку и сварной шов в отверстие большой трубки и дайте этой установке застыть в течение ночи. Хотя это не показано, на толстом конце этой трубки должен быть сделан разрез под углом 45 градусов, а на этот конец следует установить дикое и уплотнительное кольцо. Таким же образом, как показано ранее.

Разберите стандартный всасывающий электрод, открутите ферал с переднего конца электрода и разъем BNC с заднего. Теперь необходимо сделать боковой порт с более низким углом со стороны электродного цилиндра. Нагрейте кусок металла с помощью булочки и конфорки.

Вдавите нагретый металл в имеющееся отверстие сбоку бочки под небольшим углом. Снимите серебряный провод с разъема BNC, потянув за провод в месте его пересечения с разъемом. Замочите разъем BNC в ксилоле на один час, чтобы удалить воск.

Как только воск будет удален, промойте разъем в воде и высушите бумажными полотенцами. Отрежьте отрезок серебряной проволоки длиной 15 сантиметров. Замочите проволоку в хлорке на 15 минут.

Затем промойте и обсушите бумажными полотенцами. Припаяйте серебряный провод к разъему BNC. Вставьте серебряный провод в задний конец цилиндра всасывающего электрода и оставьте достаточно места для того, чтобы разъем BNC оставался в стороне.

Вставьте всасывающую трубку в боковое отверстие примерно на три сантиметра. Введите силиконовый герметик в заднее отверстие всасывающего электрода, не допуская его высыпания из бокового порта, прикрыв его пальцем. Введите герметик примерно на два-три сантиметра в электродный цилиндр.

Если это не удается, плотно вкрутите разъем BNC на место, что будет проталкивать герметик вперед. Дайте герметику застыть в течение ночи. Прикрутите феральную трубку, созданную методом вытягивания или обрезания, к передней части выпрямления электрода.

Трубка поможет облегчить прохождение серебряной проволоки через электрод, теперь все готово. Записывающая установка помещается в клетку Фарадея для уменьшения внешних помех. Наша установка также была размещена на воздушном столе для устранения механических помех.

Электроды установлены на магнитной стойке микроманипуляторов и размещены рядом с записывающей тарелкой. Коаксиальные кабели BNC подключаются к головному каскаду, который подключается к усилителю. Усилитель подключен к адаптеру poly view, который подключен к компьютеру.

Эта установка показана крупным планом. Коаксиальные кабели BNC подключаются к головному столу. Головной каскад подключен к усилителю.

Выход усилителя выходит из клетки Фарадея и подключается к адаптеру Poly View. Адаптер poly view подключается к компьютеру, на котором установлено соответствующее программное обеспечение для записи. Вся установка должна быть правильно заземлена.

Внешнее заземление создается путем соединения клетки Фарадея и воздушного стола с заземлением. Внутреннее заземление создается путем подключения анатомической чашки к головной сцене. Также необходимо заземлить дверцы клетки к основному корпусу.

При правильной настройке теперь можно собирать данные. Благодарим вас за просмотр этого видео и помогаем ему помочь вам в ваших будущих экспериментах.