Асептики лаборатории: Объем переводов с Серологические пипетки и Micropipettors

В данной демонстрации представлены методы асептической работы в лаборатории при переносе объемов жидкостей с использованием серологических пипеток и микропипеток на лабораторном столе. Работа должна проводиться в пределах стерильной зоны, создаваемой пламенем горелки Бунзена. Для конкретной задачи следует выбирать соответствующий инструмент для переноса объема.

Затем используйте их надлежащим образом, не нарушая стерильности, одновременно точно аспирируя жидкости, при этом соблюдая стерильность реагентов и материалов для культивирования. Эти процедуры необходимы для минимизации источников загрязнения и обеспечения точности при проведении базовых экспериментов. На начальном этапе бывает сложно точно настраивать и считывать показания приборов, а также координировать действия с оборудованием и лабораторными материалами, не нарушая стерильности переносимых жидкостей.

Соблюдение правил асептики в лаборатории имеет решающее значение для успеха экспериментов при работе с живыми образцами, поэтому уделите время изучению этих процедур, чтобы они дошли до автоматизма. Во время работы за лабораторным столом доктор Крис Редди, мой координатор лаборатории, продемонстрирует выполнение протоколов. Всегда тщательно мойте руки с антисептическим мылом и теплой водой перед началом любых лабораторных процедур. Сначала смочите руки теплой проточной водой.

Затем нанесите мыло и тщательно распределите его энергичными движениями. Разотрите мыло, создавая трение на всех поверхностях, включая большие пальцы, тыльную сторону пальцев, тыльную сторону кистей и подногтевые пространства. Затем тщательно промойте руки, чтобы удалить остатки мыла, и высушите их с помощью бумажных полотенец из диспенсера.

Наконец, используя чистое бумажное полотенце, выключите кран и очистите рабочую зону лабораторного стола. Затем извлеките из контейнера предварительно смоченную дезинфицирующую салфетку и протрите всю поверхность. Дайте дезинфицирующему средству испариться, используя зажигательную лампу.

Горелка Бунзена. Отрегулируйте пламя так, чтобы в центре образовался синий конус. Разместите все необходимые для процедуры материалы рядом со стерильной зоной лабораторного стола.

Также убедитесь, что все материалы надлежащим образом промаркированы. Существует множество вариантов серологических пипеток: пластиковых или стеклянных, одноразовых или многоразовых, с ограничителем или без него. Пипетки различных размеров калибруются с помощью ограничителей, которые предотвращают переполнение пипетки.

Обратите внимание, что серологические пипетки также калибруются двумя способами. Пипетки TD, отмеченные двойным кольцом в верхней части, откалиброваны таким образом, что объем жидкости в носике не должен выноситься. Здесь это не показано, но пипетки TC необходимо продувать, так как они откалиброваны для выноса всего объема. Используя технику асептики и индивидуально упакованную стерильную пластиковую серологическую пипетку, начните с закрытого конца и осторожно отделите бумагу.

Не снимайте защитный рукав полностью. Защитите только верхнюю часть ручки пипетки (участок вышеgraduation marks), после чего закрепите вспомогательное устройство для пипетирования, такое как резиновая груша или дозатор, на верхнем конце серологической пипетки. Удерживая вспомогательное устройство в одной руке, другой рукой снимите бумажный рукав с пластиковой пипетки.

Для стеклянных серологических пипеток, хранящихся в металлических контейнерах, ослабьте крепление верхней части контейнера и снимите крышку; прокалите открытые края как крышки, так и самого контейнера. Затем положите крышку на бок на продезинфицированный стол. Держите контейнер горизонтально и встряхните его, чтобы верхние части одной или двух пипеток оказались сверху.

Оставьте примерно один дюйм снаружи. Положите канистру на бок и извлеките одну пипетку, не касаясь остальных. Следите за тем, чтобы нижний конец пипетки не соприкасался с руками и нестерильными поверхностями.

Присоедините дозатор для пипеток. Затем поместите нижнюю треть стеклянной пипетки в синий конус пламени горелки Бунзена на одну-три секунды. Теперь снимите крышку с флакона, содержащего стерильную среду.

Удерживайте флакон между безымянным пальцем и ладонью одной руки, управляя дозатором для пипеток большим, указательным и средним пальцами той же руки; другой рукой держите флакон под углом 45 градусов и прокалите его горлышко в пламени горелки Бунзена. Поместите стерильный наконечник пипетки в среду. Затем произведите аспирацию с помощью дозатора, контролируя объем по шкале делений.

Следите за объемом жидкости, набираемой в пипетку, чтобы точно считать значение. Держите пипетку вертикально и смотрите на мениск жидкости строго на уровне глаз. Еще раз прокалите горлышко флакона в пламени горелки Бунзена.

Затем закройте флакон крышкой. Отставьте флакон с питательной средой в сторону. Затем возьмите стерильную пробирку и в асептических условиях.

Снимите колпачок, как было описано ранее. Создайте стерильную зону, прокалив ободок пробирки в пламени горелки. Перенесите среду из пипетки в пробирку, контролируя поток образца, чтобы избежать разбрызгивания.

Простерилизуйте ободок пробирки в пламени горелки. Снова закройте пробирку крышкой и отставьте ее в сторону. Теперь снимите 컨트롤лер пипеток, утилизируйте пластиковые пипетки в специальный контейнер для острых предметов, а стеклянные пипетки погрузите в 10% раствор гипохлорита натрия.

Микродозатор позволяет точно измерять и дозировать малые объемы с помощью инструментов разных размеров для конкретных диапазонов объемов. Престерилизованные пробирки и пластиковые наконечники. Также используйте предварительно смоченную дезинфицирующую салфетку для протирки микродозаторов. Примечание.

На дисплее Volter отображаются три числа, которые следует интерпретировать в зависимости от типа микродозатора, точность которого отражается в наименьшем делении. Например, P 20 используется для объемов от 2.0 до 20.0 µL. Верхнее число черного цвета обозначает десятки микролитров.

Второе черное число обозначает объем в микролитрах. Красное число указывает десятые доли микролитра, таким образом, каждое деление соответствует приращению в 0,02 мкл. Сначала поверните регулировочную ручку, чтобы установить объем дозатора, указанный на цифровом вольтметре.

При уменьшении установленного объема на микропипеточном дозаторе медленно поворачивайте колесо до нужной отметки. При увеличении объема поворачивайте колесо до тех пор, пока не пройдете за желаемую отметку на одну треть оборота. Затем медленно поворачивайте колесо в обратную сторону, чтобы достичь требуемого объема.

Всегда используйте стерильные одноразовые пластиковые наконечники. Плотно установите наконечник на конец носика микропипетки. Нажмите и слегка поверните его, чтобы обеспечить герметичность соединения.

Держите микродозатор в вертикальном положении. Обратите внимание, что у микродозатора есть три положения: исходное, первый останов и второй останов.

Нажмите на кнопку поршня из исходного положения до первого стопора, чтобы вытеснить объем воздуха, соответствующий установленному значению. Теперь, удерживая кнопку в положении первого стопора, погрузите наконечник в жидкость. Медленно отпустите кнопку, чтобы аспирировать жидкость в наконечник.

Когда нажимная кнопка вернется в исходное положение, подождите некоторое время, чтобы жидкость втянулась в наконечник. Затем извлеките наконечник из жидкости. Визуально проверьте объем забранной жидкости, убедившись в отсутствии пузырьков воздуха.

Расположите наконечник под углом от 10 до 45 градусов к стенке пробирки, в которую дозируется жидкость. Затем медленно нажмите на кнопку поршня до первого стопора, выдавливая жидкость.

Спустя мгновение нажмите кнопку до второго стопора, чтобы удалить остатки жидкости. Извлеките наконечник из жидкости, затем верните поршень в исходное положение. В завершение выбросьте наконечники в специальный контейнер для острых отходов, нажав кнопку выброса на микропипетке.

Сначала выключите горелку Бунзена. После того как все расходные материалы и реагенты будут убраны, протрите внешние поверхности лабораторной посуды дезинфицирующей салфеткой, прежде чем переместить ее в место хранения. Затем поместите загрязненную стеклянную посуду и опасные отходы в соответствующие контейнеры для утилизации.

Протрите всю рабочую область еще раз, дав дезинфицирующему средству испариться. В завершение тщательно вымойте руки с антисептическим мылом и теплой водой. Без соблюдения правил асептики культуры могут быть контаминированы, что приведет к задержке экспериментов.

Асептический перенос жидкостей с помощью серологических пипеток имеет важное значение при амплификации чистых бактериальных культур, таких как данный препарат e coli объемом 25 миллилитров. Кроме того, серологические пипетки облегчают асептический перенос жидкости в стерильные пробирки. В данном примере демонстрируется различие между чистой и контаминированной культурой e coli при поточном распределении среды по пробиркам.

Иногда требуется высокая точность дозирования объемов. В данном случае перенос среды выполнен неточно. В этом примере показан перенос неправильного объема буфера.

Вместо 12,5 µL студент перенес 125 µL. Хотя значения на волюметре были установлены идентично, для данной задачи был выбран неправильный микродозатор. После просмотра этого видео вы должны получить практические навыки применения правил асептики при выполнении рутинных лабораторных процедур, таких как перенос растворов и культур с использованием серологических пипеток и микродозаторов, без нарушения их стерильности.

Цель состоит в том, чтобы такие меры предосторожности, как обжиг стекла, наконечников дозаторов, культуральных пробирок и колб, а также работа в пределах стерильной зоны на лабораторном столе, стали привычкой при проведении каждого эксперимента. Также крайне важно точно и правильно измерять и дозировать объемы при выполнении экспериментов. Обучение правильному использованию этих инструментов для переноса объемов позволит повысить достоверность результатов экспериментов.