Перенос генов для ишемической сердечной недостаточности в доклинических моделей

Генная терапия. Использование вирусных векторов является одним из наиболее перспективных подходов к лечению кардиологических заболеваний. В этом видео представлены процедуры, которые мы создаем на модели ишемической сердечной недостаточности, а также доставка генов вирусным вектором.

Первым шагом является создание инфаркта миокарда на модели свиньи. Для этого в коронарную артерию вводится коронарный провод, за которым следует окклюзионный баллон. С помощью эндоваскулярного акцента баллон будет надуваться, чтобы полностью окклюзировать коронарную артерию.

В результате создается большой инфаркт в передней области, и у свиней разовьется хроническая сердечная недостаточность. Следующим этапом является инъекция вируса. Вирусные векторы медленно вводятся в коронарную артерию.

Он будет переноситься кровотоком и распределяться в миокард. Вирус попадет в кардиомиоциты, затем в ядро и подаст сигналы для создания белков. Экспрессируемые белки укрепляют работу сердца и повышают общую функцию.

В этом видео мы представляем процедуры генной терапии ишемической сердечной недостаточности с использованием модели свиньи. Сначала мы покажем, как создать миокард в процессе производства в пике, а затем перейдем к демонстрации межкоронарной доставки вирусного вектора. Мы используем эту процедуру для проверки эффективности и безопасности различных переносов генов.

Итак, приступим. Чтобы начать процедуру, свинье вводят анестезию с помощью телазола. Устанавливают внутривенную капельницу в ушную вену, затем интубируют свинью.

Поместите свинью в спинное лежачее положение. Используйте пропофол для общей анестезии во время эксперимента. Чтобы поддерживать артериальное давление, очистите область паха спиртом, а затем йодом.

Накройте участок стерильным листом и подготовьте все стерильно. Проколите бедренную артерию иглой 18 калибра по методу Сельдингера. Когда вы увидите пульсирующий обратный поток, вставьте проволоку, затем поместите тубус после введения тубуса, введите гепарин, чтобы предотвратить образование тромбов во время эксперимента.

Затем приготовьте мешочек с солевым раствором с 75 миллиграммами амиодарона, 20 миллиэквивалентами калия и 20 миллиграммами атропина, и используйте норму 150 миллилитров в час. В это время делается внутримышечная инъекция 75 миллиграммов амиодарона. Введите направляющий катетер в остео левой коронарной артерии и сделайте ангиограмму для проверки анатомии коронарных артерий.

Осторожно введите провод в левую переднюю нисходящую коронарную артерию. Затем проведите баллон по проводу в коронарную артерию. Сделайте ангиограмму, чтобы убедиться в положении воздушного шара.

Еще одна ангиограмма должна быть сделана под другим углом, чтобы проверить положение воздушного шара. Затем постепенно надувайте баллон до трех атм. Сделайте еще одну ангиограмму, чтобы подтвердить окклюзию артерии.

Контролируйте свинью как с помощью артериального давления, так и с помощью электрокардиографии. Время от времени у свиньи впадает фибрилляция желудочков. Как можно скорее дефибриллируйте свинью ударным током постоянного тока.

Если попытка не удалась, сожмите грудную клетку до тех пор, пока кардиовертер не зарядится, и нанесите еще один удар. Наблюдайте в течение 90 минут и сдуйте воздушный шар. Как только артериальное давление и аритмия стабилизируются, снимите оболочку и восстановите свинью.

Введите внутримышечную инъекцию нитроглицерина и фуросемида, а также ночную жидкость, содержащую амиодарон. Приготовьтесь надеть шапочку, маску, очки, халат и перчатки. Свинья готовится таким же образом, как и создание инфаркта миокарда.

Вставьте по одному коронарному проводу в левую внутреннюю нисходящую коронарную артерию и левую огибающую коронарную артерию. Установите катетер в косточку. Возьмите 20 миллилитров артериальной крови, используя 10 миллилитров для инъекции вируса, а остальное для промывки.

Смешайте вирус с 10 миллилитрами крови и разведите ее до 20 миллилитров физиологическим раствором. Затем разведите оставшуюся кровь физиологическим раствором до 20 миллилитров и разделите ее на два шприца. Подсоедините шприц с кровью, смешанной с вирусом, к катетеру, и приготовьтесь к инфузии.

Внутривенное введение нитроглицерина в дозе 20 мкг в минуту начинается через ушную вену, снимается ангиограмма для проверки положения катетера. Затем начните инъекцию вируса со скоростью один миллилитр в минуту, когда в левую коронарную артерию будет введено 15 миллилитров. Смените шприц для промывки и используйте ту же скорость инъекции После инъекции в левую коронарную артерию та же процедура будет выполнена в правую коронарную артерию с использованием оставшихся пяти миллилитров крови, содержащей вирус.

Через месяц после создания инфаркта миокарда у Р развивается сердечная недостаточность с нарушением движения стенок и расширением сердца. Средняя фракция выброса через месяц после инфаркта миокарда в данной модели составляет 36% и значительно ниже, чем у свиней того же размера без инфаркта миокарда. Средний конечный диастолический объем составляет 83 миллилитра, тогда как средний объем контроля составляет 42 миллилитров.

DP DT также был значительно ниже у свиней с инфарктом миокарда. Это поперечные срезы левого желудочка. Через месяц после инфаркта миокарда обнаруживается большой рубец от основания вершины внутренней стенки.

На этом рисунке показано выражение лица шторма. Через месяц после переноса генов с использованием стоматологического ассоциированного вируса была обнаружена значительная экспрессия в области инъекции вируса. Мы только что показали вам, как создать эффект миокарда у свиньи, а также ввести инъекцию коронавируса.

Эта комбинация модели неудачи I и доставки генов является простым и воспроизводимым методом тестирования различных типов генной терапии при траектории заболевания. Спасибо за просмотр и с нами с вашим будущим опытом.