Получение органоидов из опухолей: 3D-модель опухоли in vitro

Измельчите опухолевую ткань на мелкие кусочки. Переложите кусочки в пробирку с буфером для разложения. Коллагеновые волокна, окружающие клетки, разрушаются, разрушая матрикс ткани. Затем измельчите переваренные кусочки и выбросьте большую часть буфера для разложения. Переверните трубку, чтобы разбить шарик.

Теперь решение состоит из скоплений клеток различного размера. Ресуспендируйте клеточные скопления в растворе трипсина и ингибитора ROCK. Трипсин продолжает разрушать опухоль, а ингибитор предотвращает гибель клеток. Через равные промежутки времени пипеткой вводите раствор, чтобы разбить комки и разогнать клетки. Затем ресуспендируют клетки в матричном растворе в соответствующей концентрации.

Поместите капли раствора в культуральную пластину, чтобы образовались матричные купола. Поместите пластины вверх дном в инкубатор и дайте матрице полностью застыть. Затем добавьте питательную среду для клеточных культур и инкубируйте лицевой стороной вверх. Матрица обеспечивает каркас для поддержки трехмерного роста органоида.

После измельчения поместите кусочки опухоли в 15-миллилитровую пробирку с буфером для пищеварения на 1,5-2 часа для переваривания при температуре 37 градусов Цельсия.