Получение органоидов из опухолей: 3D-модель опухоли in vitro

Измельчите опухолевую ткань на мелкие кусочки. Переложите кусочки в пробирку с буфером для разложения. Коллагеновые волокна, окружающие клетки, разрушаются, разрушая матрикс ткани. Затем измельчите переваренные кусочки и выбросьте большую часть буфера для разложения. Переверните трубку, чтобы разбить шарик.

Теперь решение состоит из скоплений клеток различного размера. Ресуспендируйте клеточные скопления в растворе трипсина и ингибитора ROCK. Трипсин продолжает разрушать опухоль, а ингибитор предотвращает гибель клеток. Через равные промежутки времени пипеткой вводите раствор, чтобы разбить комки и разогнать клетки. Затем ресуспендируют клетки в матричном растворе в соответствующей концентрации.

Поместите капли раствора в культуральную пластину, чтобы образовались матричные купола. Поместите пластины вверх дном в инкубатор и дайте матрице полностью застыть. Затем добавьте питательную среду для клеточных культур и инкубируйте лицевой стороной вверх. Матрица обеспечивает каркас для поддержки трехмерного роста органоида.

После измельчения поместите кусочки опухоли в 15-миллилитровую пробирку с буфером для пищеварения на 1,5-2 часа для переваривания при температуре 37 градусов Цельсия. В конце сбраживания осадите переваренную ткань с помощью центрифугирования и выбросьте надосадочную жидкость.

Переверните трубку, чтобы ослабить гранулу ячейки. Ресуспендируйте клетки в 1 миллилитре предварительно подогретого трипсина, дополненного 10 микромолярным ингибитором Y-27632 ROCK, в течение 5 минут при 37 градусах Цельсия.

В конце инкубации разотрите тканевую суспензию пять раз с помощью стандартного наконечника для пипетки P1000. Верните трубку на водяную баню для дополнительной 5-минутной инкубации и растирания.

Для матриксного купольного покрытия вымывают расщепленные клетки в 9 миллилитрах холодной среды, затем собирают клетки центрифугированием. Ресуспендируйте клетки в 1 миллилитр свежей среды для подсчета, а после подсчета снова соберите клетки центрифугированием. Разведите опухолевые клетки в соответствующем объеме матрикса.

Осторожно капните по 200 микролитров раствора матричных клеток в каждую лунку с температурой 55 градусов Цельсия на 6-луночной пластине. Дайте куполам застыть при комнатной температуре в течение 2 минут, прежде чем поместить пластину вверх дном в инкубатор с температурой 37 градусов Цельсия на 20 минут.

Когда купола полностью затвердеют, добавьте в каждую лунку по 2 миллилитра органоидной среды простаты с добавлением андрогена R1881 и ингибитора ROCK. Верните планшет в инкубатор для клеточных культур.

• In vitro tumor models - Methods for studying tumor behavior in lab-controlled conditions.
• PeproTech Noggin - A protein used to regulate cellular processes in tissue culture.
• Tumor model - A method or process used to replicate tumor environment and behavior for scientific studies.
• Cell pellet - Cluster of cells collected at the bottom of a tube after centrifugation.
• ROCK inhibitor organoids - Compounds that prevent cell apoptosis during organoid creation.
• Noggin conditioned media - Media enriched with Noggin protein, used in cellular culture and experiments.
• Cell pellet in tube - Term refers to cells that have been concentrated by centrifugation in a sample tube.

• Introduce In vitro tumor models by defining this as a replicate of tumor behavior (e.g., in vitro tumor models).
• Key Concepts by summarizing principles involved in cell pellet creation (e.g., cell pellet).
• Underlying Mechanisms through visualizing the process of using ROCK inhibitor in organoid creation.
• Connect the process of tumor tissue mincing to the creation of a cell pellet and suspension in a matrix solution.

• What are in vitro tumor models and how to create a cell pellet in lab conditions?
• What role does the PeproTech Noggin play in the tumor model creation?
• How does the ROCK inhibitor assist in the creation of organoids?

• Practical Applications - Tumor models help study cancer growth and potential cures (e.g., in vitro tumor models).
• Industry Impact - Lab studies benefit the healthcare industry and the field of oncology (e.g., ROCK inhibitor organoids).
• Societal Importance - The research contributes to advancements in cancer treatment options (e.g., Noggin conditioned media).
• Link to Scientific Advancements - Understanding tumor behavior facilitates innovative treatment approaches.