Энциклопедия экспериментов JoVE
Исследования рака
0 просмотров • 3:17 мин. • April 30th, 2023
Метод поверхностно-резонансного комбинационного рассеяния или SERRS использует молекулы аналита, несущие репортерный краситель комбинационного рассеяния, которые взаимодействуют с падающим светом и вызывают неупругое рассеяние света.
Начните с инъекционной смеси, содержащей два типа нанозондов - целевые нанозонды, помеченные специфическими антирецепторными антителами, несущими отдельный репортерный краситель, и нецелевые контрольные нанозонды, обладающие другим репортерным красителем. Введите эту суспензию в брюшную полость самки мыши, несущей метастазы рака яичников. Дайте достаточно времени для распределения нанозондов в брюшной полости.
Функциональные нанозонды таргетных антирецепторных антител связываются со своими специфическими рецепторами, сверхэкспрессирующимися на клетках рака яичников, в то время как нецелевые нанозонды неспецифически прилипают к висцеральной поверхности.
Усыпьте мышь и закрепите ее на платформе для визуализации в положении лежа на спине. Хирургическим путем надрезают его брюшную полость и удаляют кишечник, чтобы обнажить брюшинную полость. Представьте себе мышь под рамановским микроспектрофотометром.
При облучении лазерным светом оба типа нанозондов заставляют падающий свет рассеиваться по-разному, каждый из которых генерирует уникальные спектральные сигнатуры. Обработка спектров для определения относительного содержания нанозондов для дифференцировки раковых клеток от висцерального фона.
Для введения нанозонда уменьшите ароматизаторы обоих нанозондов и повторно суспендируйте гранулы в свежем буфере MES в концентрации 600 пикомоляров. Смешайте наночастицы и загрузите по 1 миллилитру полученного раствора в один шприц объемом 1 миллилитров, оснащенный иглой 26 калибра, на каждую мышь и внутрибрюшинно введите весь объем в брюшную полость каждой мыши. Затем аккуратно помассируйте живот, чтобы распределить наночастицы по всей брюшной полости.
По прошествии не менее 25 минут закрепите конечности усыпленного инъекционного животного на хирургической платформе и с помощью зазубренных щипцов и ножниц для рассечения удалите кожу, чтобы обнажить брюшину. Надрезать брюшину. Приложите брюшинные лоскуты к платформе и промойте внутреннюю часть брюшинной полости не менее чем 60 миллилитрами PBS. Затем перенесите платформу на рамановский микроспектрофотометр с вертикальной оптической конфигурацией в моторизованном столике и сделайте изображение брюшной полости с соответствующими параметрами изображения.
Крайне важно, чтобы фокальная плоскость для комбинационного сканирования находилась на поверхности большей части внутренних органов. Если органы находятся не в плоскости, полученный сигнал не принесет пользы.