Энциклопедия экспериментов JoVE
Исследования рака
0 просмотров • 4:27 мин. • April 30th, 2023
Органоиды предстательной железы в первую очередь представляют собой внешний слой базальных эпителиальных клеток и внутренние слои люминальных эпителиальных клеток, расположенных вокруг центрального просвета.
Визуализация целиком позволяет изучать неповрежденные 3D-органоиды, сохраняя при этом их морфологию и гетерогенность. Чтобы начать окрашивание, обработайте органоиды подходящим фиксатором, чтобы зафиксировать их клеточные компоненты на месте, тем самым сохранив их. Промойте образец, чтобы удалить излишки фиксаторов.
Инкубируйте с коктейлем из блокирующего раствора и красителя, окрашивающего ДНК. Белки в блокирующем растворе пассивно связываются с неспецифическими участками клеток и уменьшают любое фоновое окрашивание. В то же время краситель, окрашивающий ДНК, окрашивает ядра клеток.
Добавьте два набора первичных антител, нацеленных на специфические антигены, экспрессируемые двумя составляющими клеточными популяциями. Инкубируйте с двумя различными вторичными антителами, конъюгированными с флуоресцентными красителями, которые связываются с первичными антителами. Промойте образец, чтобы удалить все несвязанные антитела.
Последовательно погружайте окрашенные органоиды в возрастаю
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео