Обогащение фосфопептидов на основе диоксида титана: метод селективного выделения фосфопептидов из пептидной библиотеки

0 views • 3:33 min • April 30th, 2023

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Фосфопептиды представляют собой короткие аминокислотные цепочки, содержащие фосфорилированные остатки серина, треонина или тирозина. Чтобы выделить фосфопептиды из пептидной смеси, начните с взятия шариков диоксида титана в пробирку. Уравновесьте для кондиционирования шариков с помощью подходящего подкисленного связующего буфера, содержащего закалочный агент. Добавьте нужную концентрацию пептидной смеси в кашицу для гранул.

Инкубируйте смесь при непрерывном встряхивании, чтобы бусины не оседали. Кислое состояние способствует образованию фосфатной группы фосфопептидов координатных связей с титановыми шариками. Гасящий агент в буфере уменьшает любое неспецифическое связывание нефосфорилированных пептидов с гранулами, оставляя их в суспензии.

Центрифуга для гранулирования связанных с фосфопептидом шариков, в то время как нефосфорилированные пептиды остаются в надосадочной жидкости. Выбросьте надосадочную жидкость. Перенесите связанные с фосфопептидом шарики в предварительно собранную колонну спинового фильтра. Центрифуга для удаления связывающего буфера и захвата конъюгированных фосфопептидом шариков.

Переложите фильтр в чистую трубку и добавьте раствор, содержащий аммиак. Аммиак превращает суспензию в основную, заставляя фосфопептиды отделяться от гранул. Центрифугируйте сборку для элюирования и сбора несвязанных фосфопептидов. Гранулы диоксида титана остаются в фильтрующем картридже. Высушите фосфопептиды, чтобы удалить любые следы аммиака.

Предварительно подготовьте диоксид титана с 500 микролитрами 100% ACN два раза. Затем смешайте диоксид титана с 500 микролитрами 0,2 М буфера фосфата натрия, pH 7, два раза. Наконец, используйте 300 микролитров уравновешивающего буфера, чтобы промыть бусины три раза. Добавьте 400 микролитров 50% ACN, 0,1% TFA в пробирку с низким уровнем связывания белка. Затем добавьте 84 микролитра молочной кислоты.

Перенесите ресуспендированные фосфопептиды в трубку с низким уровнем связывания белка и инкубируйте их при комнатной температуре с помощью вращателя «конец за концом» в течение 1 часа. После гранулирования шариков используйте 300 микролитров уравновешивающего буфера, чтобы промыть их два раза и открутить. С 300 микролитрами буфера для полоскания промойте шарики два раза. Затем переложите их в фильтр с отжимом 0,2 микрометра.

После отжима перенесите фильтрующий блок в чистую 1,5-миллилитровую трубку с низким связыванием белка и с 200 микролитрами 0,9% аммония в воде дважды разбавьте содержимое. После проверки рН вакуумируйте концентрат элюата до сухости на ночь, чтобы испарить аммиак.

10:27

Подготовка высоко пористый Координационного полимерных покрытий на макропористых полимерных монолитов для повышенного обогащения фосфопептидов

Related Videos

0 Views

08:01

LERLIC-МС / МС для углубленной характеризации и Количественный глутамин и аспарагин Дезамидирование в Shotgun протеомике

Related Videos

0 Views

05:47

Фосфопротеомная стратегия профилирования осмотического стресса Сигнализация в Арабидопсис

Related Videos

0 Views

06:09

Количественная оценка Белки Использование пептидов обогащению иммуноаффинной В сочетании с масс-спектрометрии

Related Videos

0 Views

03:21

Очистка пептидов: метод извлечения пептидов из переваренных белковых лизатов на основе RP-ВЭЖХ

Related Videos

0 Views

04:50

Обогащение фосфопептидами: метод иммунопреципитации на основе антител для отделения специфических фосфорилированных пептидов от сложных пептидных смесей

Related Videos

0 Views

09:30

Phosphopeptide Анализ грызунов придатка яичка сперматозоидов

Related Videos

0 Views

12:23

Phosphopeptide обогащения, в сочетании с Label бесплатно количественного масс-спектрометрии для расследования Phosphoproteome рака простаты

Related Videos

0 Views

11:54

Обнаружение мест убиквитирования белка путем обогащения пептида и масс-спектрометрии

Related Videos

0 Views

12:11

Одновременное обогащение сродства двух постпереводных модификаций для количественной оценки и локализации сайта

Related Videos

0 Views

Last updated: 18 July 2026