Обогащение фосфопептидов на основе диоксида титана: метод селективного выделения фосфопептидов из пептидной библиотеки

Фосфопептиды представляют собой короткие аминокислотные цепочки, содержащие фосфорилированные остатки серина, треонина или тирозина. Чтобы выделить фосфопептиды из пептидной смеси, начните с взятия шариков диоксида титана в пробирку. Уравновесьте для кондиционирования шариков с помощью подходящего подкисленного связующего буфера, содержащего закалочный агент. Добавьте нужную концентрацию пептидной смеси в кашицу для гранул.

Инкубируйте смесь при непрерывном встряхивании, чтобы бусины не оседали. Кислое состояние способствует образованию фосфатной группы фосфопептидов координатных связей с титановыми шариками. Гасящий агент в буфере уменьшает любое неспецифическое связывание нефосфорилированных пептидов с гранулами, оставляя их в суспензии.

Центрифуга для гранулирования связанных с фосфопептидом шариков, в то время как нефосфорилированные пептиды остаются в надосадочной жидкости. Выбросьте надосадочную жидкость. Перенесите связанные с фосфопептидом шарики в предварительно собранную колонну спинового фильтра. Центрифуга для удаления связывающего буфера и захвата конъюгированных фосфопептидом шариков.

Переложите фильтр в чистую трубку и добавьте раствор, содержащий аммиак. Аммиак прев