Windowing куриные яйца целях развития исследований

Добро пожаловать в лабораторию Крамера. Я Мэтт Корн из отделения нейробиологии и поведения Калифорнийского университета в Ирвайне. Сегодня я покажу вам, как подготовить куриные яйца для различных манипуляций, включая размещение бусин, инъекции красителей или исследование in ovo.

Итак, без лишних слов, приступим. Сначала мы очистим яйцо. Это необходимо, так как в инкубаторе может находиться множество посторонних загрязнений.

Мы загерметизируем это лентой. Нам нужно предотвратить попадание мелких частиц в область окна, через которое будет производиться доступ к яйцу, чтобы снизить вероятность гибели эмбриона к моменту его извлечения. Как вы видели в инкубаторе, яйца расположены тупым концом вверх.

Теперь мы аккуратно повернем яйцо на бок. Это позволит нам добиться двух вещей: во-первых, окно окажется прямо перед нами, а во-вторых, эмбрион всплывет наверх, что позволит нам проводить любые необходимые манипуляции.

Теперь я перенесу несколько яиц из штатива, который находился в инкубаторе, в картонный лоток для яиц. Собственно, это та самая деталь, в которой доставляют яйца в коробке. Сегодня мы будем использовать его просто для хранения яиц.

Теперь выбор расположения остается за вами. Мне нравится делать так, потому что я могу получить доступ к любому яйцу в любое время, и они не соприкасаются друг с другом. В случае, если я обнаружу поврежденное яйцо с трещиной и случайно его уроню, между ними будет достаточно свободного пространства.

Теперь я возьму марлевые салфетки, сформирую такую стопку и разделю ее пополам. Я использую 70% alcohol и буду пропитывать салфетки до тех пор, пока нижний слой не станет влажным. Это необходимо, так как я буду использовать всю эту стопку для протирания всех яиц.

Теперь я сниму несколько верхних слоев, обработаю верхнюю часть, но фактически охвачу почти все яйцо. После этого спирт довольно быстро испарится, и мы сможем наклеить ленту. Лента будет хорошо держаться, и к тому времени, как я закончу с одной серией, первое яйцо обычно уже высохнет, и мы сможем перейти к следующему этапу подготовки яиц.

Итак, снова положите это в мусор, и мы готовы перейти к следующему этапу. Теперь, когда все яйца были протерты спиртом, мы можем проделать дренажное отверстие с широкой стороны яйца, в его основании. Это позволит нам извлечь часть альбумина, так как без его удаления эмбрион не будет располагаться правильно.

Мы не можем проводить никаких манипуляций. Поэтому я просто беру лезвие и отрезаю эту пластиковую ленту. Она немного эластична, что очень удобно.

Это не только позволит нам перекрыть отверстие, если оно окажется чуть больше желаемого, но и поможет растянуть материал, когда мы будем полностью закрывать яйцо. Таким образом, область, где будет располагаться окно, будет полностью закрыта. Поэтому я просто отрежу этот фрагмент вот так, оставив полоску шириной примерно в один миллиметр.

Затем из этого я могу вырезать кусочек ленты размером примерно один квадратный миллиметр. После этого я просто помещу его чуть выше и левее даты. Положите его прямо туда, и вы его увидите.

Оно приклеивается очень хорошо. Затем я могу вернуться к уже подготовленной ленте, отрезать еще один миллиметровый кусочек скотча и снова поместить его слева от цифры, которая фактически обозначает верхнюю часть яйца.

Теперь, когда мы повернули его боком, он находится справа. И еще одна деталь здесь. Сейчас я не использую перчатки, так как из-за них эта лента будет прилипать к рукам, а я предварительно вымыл руки.

На данном этапе меня не беспокоит возможность загрязнения активного вещества чем-либо еще. Поэтому я возьму ножницы с острым кончиком, введу их в центр места, где я наклеил ленту, и буду вращать их против часовой стрелки до тех пор, пока лента немного не порвется.

Вы увидите, что там есть небольшое отверстие. Оно не должно быть очень большим, так как, когда мы введем шприц, отверстие расширится. Это делается для того, чтобы не вводить иглу напрямую, пытаясь пробить яйцо, поскольку зачастую это приводит к тому, что вся боковая сторона яйца раскалывается.

Тогда яйцо больше нельзя использовать. Хорошо, теперь я приступлю к сливу содержимого яйца. Сбоку у нас есть небольшое отверстие, и я воспользуюсь этим шприцем объемом 10 мл и иглой с достаточно большим диаметром, чтобы извлечь альбумин.

Теперь мне нужно примерно три или четыре миллилитра, определенно более трех, но не намного больше четырех с половиной или пяти. Это позволит эмбриону, который сейчас находится сверху, немного отделиться от скорлупы. После этого мы сможем приступить к манипуляциям.

Таким образом, вводя иглу под углом 45 градусов, я оказываюсь под желтком. Затем я слегка поворачиваю её вправо, чтобы аккуратно проскользнуть под него; в этот момент можно почувствовать, как кончик иглы касается дна яйца. Теперь я извлеку примерно три или четыре, и они выходят довольно легко.

Я перелью альбумин в отдельный контейнер, и теперь я могу продолжить работу с остальными яйцами. Итак, я продолжу. Как видите, отверстие, которое я сделал для слива, получилось немного больше, чем хотелось бы, но в итоге это не играет роли.

Меня беспокоит то, чтобы при введении иглы я больше не повредил скорлупу. Поэтому я приступлю к этому. Итак, я уже вижу, что в яйце есть небольшая трещина.

Небольшие трещины допустимы, но следует беспокоиться, если они переходят на другую плоскость яйца. В данном случае это произошло, что видно по отверстию.

Оно доходит почти до самого верха. И фактически именно здесь будет располагаться наше окно. Поэтому, к сожалению, это яйцо нам придется утилизировать.

Утилизация этого материала не требует никаких особых мер. Нет необходимости составлять специальный протокол или выполнять какие-либо дополнительные действия. Просто поместите его в контейнер для отходов.

Мы используем эти черные мусорные баки, чтобы пометить их как контейнеры для отходов животного происхождения, но в остальном всё уже подготовлено. Мы можем переходить к следующему яйцу. Итак, теперь, когда мы слили жидкость из всех яиц, можно закрыть сливное отверстие.

Это важно, так как если мы этого не сделаем, внутри инкубатора может произойти значительное испарение остатков альбумина. А высохшее яйцо — это погибшее яйцо. Поэтому мы возьмем кусочек скотча примерно такого же размера, заклеим отверстие, и нам больше не придется обращаться к этому отверстию.

В некоторых случаях, если вы решите попробовать извлечь больше альбумина из яйца после его вскрытия, это отверстие служит своего рода герметичной зоной, в которую можно ввести иглу, не теряя при этом большого количества альбумина. Хорошо. Теперь мы приступим к тому, чтобы закрыть яйца подходящим по размеру кусочком скотча.

Я бы сравнил это с тем, как если бы на воздушный шар наклеили кусочек скотча, прежде чем проколоть его булавкой. Прелесть в том, что шар не лопается; в данном случае кусочек скотча наносится на яйцо. Благодаря этому скорлупа не трескается в нескольких местах, после чего «окно» можно герметизировать. Когда «окно» закрывается, благодаря использованию скотча создается своего рода герметичное уплотнение, и нам не нужно беспокоиться об испарении.

Как видите, размер ленты, вероятно, самый большой из всех, что я нарезал до этого момента, но даже в этом случае я слегка растяну её, приложив небольшое усилие, и помещу её на яйцо. Затем я оберну её сзади, очень осторожно растягивая по яйцу, чтобы не было складок именно в том месте, где будет моё окно. Ленту можно немного поправить.

Оно не настолько сильно прилипает, чтобы об этом беспокоиться. Как только оно зафиксировалось, оно остается на месте. Вы видите, что в этой области я собираюсь вырезать окно.

Итак, теперь, когда все яйца зафиксированы лентой, можно приступать к вырезанию окна в верхней части. Это может быть самым сложным этапом, и зачастую именно на этом шаге теряется большинство яиц. Поэтому я тщательно протру ножницы марлей, смоченной в спирте, а затем высушу их.

Спирт практически высыхает сам по себе, но нельзя допускать его прямого попадания в яйцо. Поэтому я буду делать надрез посередине, там, где наклеена лента, и снова буду совершать вращательные движения по часовой стрелке и против нее, пока не услышу легкий треск. Так я пойму, что лезвие проникло внутрь.

Затем я немного отодвигаю ножницы, чтобы они лежали почти параллельно поверхности яйца. Затем я делаю крошечные надрезы, пока лезвия полностью не войдут внутрь. Когда я опишу примерно полукруг, я вернусь в обратную сторону; я не хочу замыкать круг, так как мне нужно оставить «окно», после чего я смогу просто открыть яйцо.

На данный момент они выглядят примерно так, как я и ожидал: сосудов немного, но вокруг эмбриона наблюдается некоторое количество крови, преимущественно в области аллантоиса, где началось кровотечение и прекратилось сердцебиение. Теперь я просто закрою это, оставлю в таком положении, затем вернусь и закрою окна. И снова, просто прижмите плоско к поверхности и проведите в обратном направлении.

Итак, здесь появились несколько пузырьков, и оказалось, что эмбрион сместился в сторону. Сейчас есть два варианта действий. Если у нас достаточное количество яйцеклеток и нам не принципиально использовать каждую из них, мы можем просто выбросить этот образец.

Или же мы можем закрыть окно и настроить систему так, чтобы эмбрион снова всплыл наверх, в нужное нам место. К моменту начала манипуляций он может оказаться там, где нам необходимо. Если же нет, мы сможем удалить его в этот момент.

Таким образом, я просто расположил его под углом. Часть альбумина вытечет, но это поможет эмбриону вернуться в нужное положение. Итак, теперь, когда все эти окна открыты, нам необходимо убедиться, что они закрыты; мы должны закрыть их перед проведением любых манипуляций.

Затем мы можем снова запечатать яйцо. Однако, если оставить отверстие открытым, желток может вытечь. Если яйцо слегка наклонится, пока вы переносите его из одной комнаты в другую, есть риск, что всё содержимое выпадет наружу.

Таким образом, всё, что я делаю, — это отрезаю еще один кусочек пластиковой ленты длиной, извините, шириной примерно в два или три миллиметра. Я закрепляю его примерно посередине. Если мне удастся притянуть его вниз перед яйцом, лента будет натянута.

И вы видите, как окно прилегает — точно там, где была другая лента, в месте, где мы вырезали окно; на данный момент оно достаточно герметично. Впрочем, через минуту мы приступим к манипуляциям, поэтому абсолютная герметичность не требуется. Таким образом подготавливаются и создаются окна в яйцах.

Желаем вам удачи в проведении экспериментов.