ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Окраска парафиновых срезов <ol><li> DEWAX слайды с Ксилол (Fisher X3 S -4) 3 раза в течение 5 минут каждый (изменение ксилола каждый месяц в зависимости от использования, ксилол является токсичным). Используйте посуду и обложки для 20 слайдов с Фишером реф 08-812-1A и стойки сделаны с учетом этих блюд. 200 мл жидкости за блюдо. </li><li> Гидратов через алкоголь градиент следующим образом (изменение градиента каждые 2 недели): <ul><li> 2x в 100% этанола (Fisher # A406-20) в течение 2 минут каждый </li><li> 2x в 95% этилового спирта в течение 2 минут каждый </li><li> 1x в 70% этилового спирта в течение 2 мин </li><li> 1x в 50% этилового спирта в течение 2 мин </li><li> 1x в 30% этилового спирта в течение 2 мин </li><li> 1x DDH 2 O в течение 2 мин </li></ul></li><li> Замочите в DPBS в течение 5 мин (DPBS = изменение фосфат Дульбеко буферным раствором с Са 2 + и Mg 2 +). </li></ol> Антиген восстановления: <ol><li> Разогреть Na-цитрат буфера (10 мМ, рН 6,5) в микроволновой печи. </li><li> Кук слайды в течение 15 мин в микроволновой печи. Слайды никогда не должна пересыхать так что проверить каждую мин и добавляют Na-цитрат в случае необходимости. </li><li> Дайте остыть при комнатной температуре. </li><li> Блок эндогенной активности пероксидазы с 1% H 2 O 2 в DPBS в течение 20 мин (1,5 мл 30% акций Sigma H-1009 в 50 DPBS мл). </li><li> Замочите в DPBS 3 х 5 мин. </li><li> Блок неспецифических сайтов путем инкубации в течение ночи при +4 ° С в DPBS + 5% бычьего сывороточного альбумина (БСА) + 0,1% азида Na + 5% сыворотки. Примечание: Выбор сыворотки будет зависеть от вида, в которых антитела используются для окрашивания были сделаны. Блок с сывороткой видов, в которых вторичные Ab (конъюгированные с биотином) было сделано. Если этого нет, используйте сыворотки от вида отличается от той, в которой основной Ab было сделано. </li><li> Блок биотин сайты с авидин / биотин блокирующий комплект (Vector лабораторий Каталог # SP-2001): <ul><li> Инкубируйте с авидин D в течение 15 мин. Промыть кратко DPBS. </li><li> Инкубируйте с решением биотина в течение 15 мин. </li></ul></li><li> Инкубируйте в начальной Ab в течение 2 часов при комнатной температуре, в DPBS + 2% BSA + 0,1% NaAzide + 2% сыворотки (то же, для блокировки шаг). </li><li> Замочите в PBS 3 х 5 мин. </li><li> Инкубируйте с вторичным Ab сопряженных с биотином в течение 1 часа при комнатной температуре в DPBS + 2% BSA + 0,1% азида Na + 2% сыворотки (то же, используются для блокировки шаг). </li><li> Подготовка ABC реагента в то же время, поскольку он должен развиваться, по крайней мере 30 минут перед использованием! (См. материалы) </li><li> Подготовка в 50 мл коническую трубку. В 15 DPBS мл (без сыворотки, не азид) добавить 3 капли реагента, перемешать и добавить 3 капли реагента B и перемешать. Не следует помещать бутылки, а ждать капли сформировать самостоятельно. ABC комплект Vectastain PK-6100 от векторного Labs. </li><li> Замочите в DPBS 3 х 5 мин. </li><li> Инкубируйте с реагентом ABC в течение 30-45 минут при комнатной температуре. </li><li> Замочите в DPBS 3 х 5 мин. </li><li> Подготовка субстрата пероксидазы DAB (Vector Labs # SK-4100) в 5 мл DDH 2 O в стеклянном флаконе непосредственно перед использованием (см. материалы) <ul><li> 2 капли буферного раствора акции, перемешать </li><li> 4 капли DAB, смеси (должен стать чуть-коричневый) </li><li> 2 капли Н 2 О 2, перемешать </li></ul></li><li> Оставьте DAB подложки, на вершине горки и следить за коричневой окраски. </li><li> Dip слайды в лед + водопроводную воду, чтобы остановить реакцию. </li><li> Промыть под холодной водопроводной водой в течение 5 мин. </li><li> Контрастирующая с гематоксилин (20 сек; Фишер CS401-D) и промыть в проточной воде, пока вода не выходит ясно. </li><li> Дегидрировать через алкоголь градиент, начиная с 30% этанолом до 100% этилового спирта (2 мин каждый). </li><li> Замочите в ксилоле 3 х 5 мин. </li><li> Установить при помощи Permount (Fisher # SP15-100): поставить некоторые выше раздел о слайда и нажмите медленно на секции с покровным без пузырьков воздуха. Не перемещайте покровное до полного высыхания, которое занимает ~ 24 часов. </li></ol>

<table><tbody><tr><td>Ксилол</td><td>Fisher Scientific</td><td>X3S-4</td><td>Меняйте ксилол каждый месяц в зависимости от интенсивности использования. Ксилол ТОКСИЧЕН.</td></tr><tr><td>100%-й этанол</td><td>Fisher Scientific</td><td>A406-20</td><td>Используйте для создания градиента EtOH.</td></tr><tr><td>ДПФС (дуо-фосфатно-солевой буфер)</td><td></td><td></td><td>Дульбекко&amp;rsquo;модифицированный фосфатно-солевой буфер с добавлением Ca2+ и Mg2+</td></tr><tr><td>Натрий-цитратный буфер</td><td></td><td></td><td>10 мМ, pH 6,5</td></tr><tr><td>H2O2</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H-1009</td><td>30%-й стоковый раствор =&amp;gt; Развести до 1% в DPBS</td></tr><tr><td>Блокирующий раствор</td><td></td><td></td><td>DPBS + 5% бычий сывороточный альбумин (БСА) + 0,1% азида натрия + 5% сыворотки. </td></tr><tr><td>БСА (бычий сывороточный альбумин)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Азид натрия</td><td></td><td></td><td>азид натрия</td></tr><tr><td>набор для блокировки авидина/биотина</td><td>Vector Laboratories</td><td>SP-2001</td><td></td></tr><tr><td>Буфер для антител</td><td></td><td></td><td>DPBS + 2% BSA + 0,1% азида натрия + 2% сыворотки (той же, что использовалась на этапе блокировки)</td></tr><tr><td>набор ABC Vectastain PK-6100</td><td>Vector Laboratories</td><td></td><td></td></tr><tr><td>субстрат пероксидазы DAB</td><td>Vector Laboratories</td><td>SK-4100</td><td></td></tr><tr><td>ддистиллированная H2O</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Гематоксилин</td><td>Fisher Scientific</td><td>CS401-D</td><td>докрашивание</td></tr><tr><td>Закрепитель для микропрепаратов</td><td>Fisher Scientific</td><td>SP15-100</td><td></td></tr><tr><td>Предметные и покровные стекла</td><td></td><td></td><td>стекло</td></tr></tbody></table>

immunohistochemistry: Парафин частей с помощью vectastain abc kit Векторные labs

Immunohistochemistry: Paraffin Sections Using the Vectastain ABC Kit from Vector Labs

Иммуногистохимии (IHC) является ценным техника используется для локализации / визуализации экспрессии белка установлен срез ткани с использованием специфических антител. Есть два метода: прямой и косвенный метод. В этом эксперименте мы будем только описывают использование косвенных окрашивания IHC. Косвенные окрашивания IHC использует весьма специфический первичный и биотин, конъюгированных вторичных антител. Первичные антитела используются для дискретно идентифицировать белки интереса путем связывания с конкретным эпитопом, а вторичные антитела вычесть для неспецифического фона окрашивания и усиливать сигнал, образуя комплексы с первичным антителом. Слайды могут быть либо генерируется из замороженных срезах, или парафин разделы монтируются на стеклах. В этом протоколе, мы обсудим подготовку парафин разделы по депарафинизации, гидратация использованием алкоголя градиент, тепло-индуцированной поиска антигена, и блокирования эндогенной активности пероксидазы и неспецифического связывания объектов. Некоторые разделы затем окрашивали антителами, специфичными для Т-клеток CD8 маркеров и в то время как другие окрашивают в течение тирозингидроксилазы. Слайды впоследствии лечат вторичных антител, конъюгированных с биотином, то разработаны с использованием авидин конъюгированных с пероксидазой хрена (HRP) с Diaminiobenzidine (DAB) в качестве субстрата. После развития, слайды контрастно для контраста, и монтировать под покровные с permount. После адекватной сушки, эти слайды готово для работы с изображениями.

Immunohistochemistry: Парафин частей с помощью Vectastain ABC Kit Векторные Labs

Иммуногистохимия (ИГХ) представляет собой ценный метод, используемый для локализации и визуализации экспрессии белков в закрепленном срезе ткани с помощью специфических...

immunohistochemistry-paraffin-sections-using-vectastain-abc-kit-from

Research

JoVE Journal

Biology

Биология

Техника объединения на месте окрашивания тетрамера и гибридизация (ISTH) позволяет визуализации, отображения и анализа пространственной близости вирус-специфических CD8 + Т-клеток с их инфицированных вирусом цели, а также определение количественных соотношений между этими иммунных эффекторов и задач к инфекции результатов.

Техника одновременно визуализировать вирус-специфических CD8 + T-клетки и инфицированные вирусом клетки В месте</em

Нормальный взрослый васкуляризированной ткани млекопитающих, что не хватает физиологических ангиогенеза и который не подвергался хирургическому вмешательству используется для изучения: (я) возникновение и развитие ангиогенеза после внутрибрюшинного введения тестовых агентов, и (II) изменение ангиогенеза следующие системные администрации выбранного теста агентов.

Крыса Брыжейка Ангиогенез Пробирной

Здесь мы опишем метод количественного молекулярной неоднородности в гистологических срезов опухолевого материала с использованием количественных иммунофлюоресценции, анализ изображений, а статистическая мера неоднородности. Метод предназначен для использования в клинической разработке биомаркеров и анализа.

Неоднородность Картирование экспрессии белка в опухолях с использованием количественных иммунофлуоресценции

Это видео описывает технику иммуногистохимического окрашивания для идентификации дендритных клеток из эндобронхиальной биопсии.

Иммуногистохимическое окрашивание: метод получения пространственной информации из тонких срезов тканей

Косвенным протокол иммунофлюоресценции описано в этой статье позволяет обнаруживать и локализовать белков в молочной железе мыши. Полный метод ее подготовки молочных желез образцы, для выполнения иммуногистохимии, чтобы изображение на срезах тканей с помощью флуоресцентной микроскопии, и, чтобы восстановить изображение.

Непрямой иммунофлюоресценции на замороженные Разделы молочной железы мыши

Этот протокол является экономически эффективной альтернативой для экспрессии голой плазмидной ДНК в коже мыши. Общая цель протокола заключается в предоставлении иммунных связанных генов в ткань кожи, чтобы очертить функциональную роль специфического гена в кожных воспалениях.

Разработка системы доставки Экономичный ДНК по «Acufection» и его применение к исследованию кожи

Здесь мы описываем метод, который сочетает в себе в situ MHC-Тетрамер пятнать иммуногистохимия для определения локализации, фенотип и количество антиген специфические Т-клеток в тканях. Этот протокол используется для определения пространственных и фенотипические характеристики антиген специфические CD8 Т-клеток по отношению к другой тип клеток и структуры в тканях.

На месте MHC-Тетрамер окрашивание и количественный анализ для определения местоположения, изобилия и фенотип антиген специфические CD8 Т-клеток в тканях

В настоящее время immunofluorescent окрашивание на фиксированные клетки является методом выбора для определения уровнях выражения протеина при морфологическом информация также необходима. Этот протокол, представленная в настоящем документе предоставляет альтернативный метод immunocytochemistry на ячейку парафин врезанных блоков.

Определение уровня выражения протеина в культивируемых клеток Immunocytochemistry на клетки, парафин врезанных блоков

Метод локализации иммунофлуоресценции in vivo (IVIL) может быть использован для изучения биораспределения антител и антител в vivo для онкологических целей в живых организмах, используя сочетание таргетинга опухоли in vivo и иммунодефицита ex vivo Методы.

В Vivo Иммунофлуоресценция Локализация для оценки терапевтического и диагностического антитела биораспределения в онкологических исследований

Данный экспериментальный протокол описывает и оптимизирует метод мультиплексного иммуногистохимического (ИГХ) окрашивания, в основном за счет оптимизации условий инкубации одноканальных антител и корректировки настроек антител и каналов для решения проблем аутофлуоресценции и перекрестных помех каналов в тканях рака легкого клинического происхождения.

Мультиплексное иммуногистохимическое окрашивание тканей рака легкого, залитых парафином

В данной рукописи описан подробный протокол генерации и очистки аденоассоциированных вирусных векторов с использованием оптимизированного метода аффинной хроматографии на основе гепарина. Он представляет собой простой, масштабируемый и экономичный подход, устраняющий необходимость в ультрацентрифугировании. Полученные векторы проявляют высокую чистоту и биологическую активность, доказывая свою ценность в доклинических исследованиях.

Выделение аденоассоциированных вирусных векторов с помощью одноэтапного и полуавтоматического протокола гепариновой аффинной хроматографии

Изучите протокол иммуногистохимического окрашивания парафиновых срезов с использованием набора Vectastain ABC Kit. Метод включает депарафинизацию, антигенную ретриваль и блокировку пероксидазы для качественной визуализации тканей.

Immunohistochemistry: Парафин частей с помощью Vectastain ABC Kit Векторные Labs

Больше видео