Изображений Запах-Вызванные деятельности в мышь обонятельной луковице с помощью программы оптического отражения и флуоресценции Сигналы

Общая цель этого эксперимента состоит в том, чтобы составить карту активности, вызванной запахом, на поверхности обонятельной луковицы мышей с использованием собственных оптических сигналов и флавопротеинов, автофлуоресцентных сигналов или визуализации FAS после анестезии мыши и обнажения черепа. Косточка над обонятельной луковицей истончается. Костный лоскут рисуется с помощью кончика лезвия скальпеля, а затем удаляется, камера изготавливается из стоматологического цемента и окружает открытую поверхность обонятельной луковицы.

Его заполняют аросом и сверху кладут покровное стекло. Визуализация других вызванных активностей в обонятельной луковице мыши с использованием оптического отражения и автофлуоресцентных сигналов может помочь ответить на ключевые вопросы, касающиеся специального покрытия порядков в обонятельной луковице. Основное преимущество этой методики перед существующими методами, такими как двухдокси-глюкозная визуализация или FMRI, заключается в том, что она позволяет регистрировать заказные активности с особым разрешением одного гламурного списка.

Как правило, люди, плохо знакомые с этими методами, испытывают трудности в начале своей работы, потому что как хирургические, так и инструментальные навыки приобретаются медленно. Визуальная демонстрация этого метода имеет решающее значение для привлечения внимания к ключевым этапам хирургических и визуализирующих процедур. Зажмите заднюю лапу мыши для подтверждения анестезии и удалите шерсть с кожи головы с помощью машинок для стрижки.

Сотрите остатки волос с кожи стерильными марлевыми салфетками, смоченными в дистиллированной воде. Поместите мышь в стереотаксическую рамку так, чтобы морда находилась в той же плоскости, что и затылок. Для того, чтобы расположить обонятельную луковицу горизонтально, надежно закрепите ушные и носовые планки, чтобы предотвратить движение.

Нанесите офтальмологическую мазь на глаза, чтобы предотвратить пересыхание во время визуализации, а затем продезинфицируйте область кожи головы Бетадином с помощью стерильных ножниц. Сделайте надрез на затылке между ушами, затем разрежьте с обеих сторон по направлению к основанию уха и в переднем заднем направлении ко лбу вдоль век. Завершите снятие кожи головы, разрезав кожу на морде.

Использование носовой планки в качестве ориентира. Поместите животное под стереомикроскоп и с помощью ватного тампона, смоченного физиологическим раствором, аккуратно отделите надкостницу на верхней части черепа. С помощью щипцов удалите остатки ткани и соскребите поверхность черепа скальпелем, чтобы обеспечить чистоту препарата, чтобы область обонятельной луковицы оставалась влажной на протяжении всего эксперимента.

Положите кусочек рассасывающегося желатина, смоченного в дистиллированной воде губку на косточку над обонятельной луковицей, расположенной между глазами. Удалите желатиновую губку и начните с осторожного соскабливания кости лезвием скальпеля номер 10. Соблюдайте постоянный угол в 45 градусов между лезвием и костью и перемещайте лезвие от век к сагиттальной стороне области луковицы.

Будьте осторожны, чтобы не оказывать вертикальное давление на кость и не царапать кость над венозным синусом во время процесса истончения. Останавливайтесь каждые пять минут и кладите на кость губку с гидратированным желатином, чтобы остудить препарат. Промокните череп губкой, чтобы удалить кости, пыль и периодически протирайте кончик скальпеля, чтобы он оставался чистым и острым.

Продолжайте до тех пор, пока не станет виден губчатый костный слой или трабекула. Когда видна тонкая сосудистая сеть обонятельной луковицы, перестаньте чесать кость и с помощью кончика скальпеля под номером 11 нарисуйте прямоугольную область и смыкайте обонятельную луковицу. Удерживая окно в пределах границы венозных синусов продолжайте царапать кость в пределах прямоугольной области.

Будьте особенно осторожны с глубиной кончика скальпеля, чтобы не соприкасаться с поверхностью твердой мозговой оболочки. Для того чтобы получить представление о толщине оставшейся кости, осторожно надавите на нее кончиком щипцов. Если кость складывается под давлением, переходите к следующему шагу.

Добавьте каплю физиологического раствора и с помощью кончика скальпеля, ориентированного горизонтально, приподнимите костный лоскут. Осторожно снимите лоскут с помощью щипцов, чтобы не оторвать оставшуюся кость. После того, как поверхность обонятельной луковицы обнажена, проверьте отсутствие кровотечения или кровеносных сосудов. Анастомоз.

Протрите участок желатиновой губкой, смоченной в физрастворе. Чтобы сохранить обонятельную луковицу влажной, нанесите полиакрилатный стоматологический цемент с помощью шприца 29 калибра, чтобы сформировать лунку на кости вокруг черепного окна. Нанесите каплю с низкой температурой плавления на твердую мозговую оболочку и поместите стерильное покровное стекло над черепным окном для визуализации.

Поместите стереотаксическую рамку под стереомикроскоп так, чтобы краниальное окно было центрировано в поле зрения, чтобы капилляры оказались в поле зрения. Переключитесь на зеленый свет 580 нанометров и сделайте анатомическое контрольное изображение, чтобы проверить состояние препарата во время визуализации. При освещении 480 нм стандартный сеанс визуализации включает в себя базовую продолжительность от 5 до 10 секунд, при которой подается только воздух, а затем стимуляция запаха в течение от трех до 10 секунд в зависимости от выбранной концентрации запаха.

И, наконец, от 70 до 82 секунд подачи воздуха записывается для базового восстановления. Здесь сосудистая сеть обонятельной луковицы визуализируется через краниальное окно, за которым следуют результаты исследования стимуляции с использованием h. синала в качестве одоранта, зафиксированного с помощью визуализации iOS и FAS. С помощью визуализации iOS активность, вызванная запахом, отображается в виде темных областей абсорбции, активированных AL, обозначенных белыми стрелками, а активные области можно увидеть как в одиночных, так и в усредненных множественных испытаниях.

Переключение на ФАС-визуализацию в той же вызванной активности ОД мыши теперь отображается в виде белых областей автофлуоресцентного излучения, обозначенных черными стрелками, а также может наблюдаться как в одиночных, так и в усредненных множественных испытаниях. Обратите внимание, что обе черные зоны поглощения, видимые с помощью визуализации iOS, и белые области автофлуоресцентного излучения, видимые с помощью визуализации FAS, перекрываются. Это пространственное соответствие подтверждает, что эти два метода позволяют визуализировать одни и те же обонятельные клубочки

Основными недостатками использования этих методов оптической визуализации является тот факт, что они не могут быть применены для визуализации обонятельных карт таким образом, как свободно движущиеся мыши. А из-за ограниченного проникновения фотонов в биологические ткани они не дают доступа к вентральным обонятельным клубочкам после его развития в конце девяностых годов, регистрируя собственные сигналы в обонятельной системе. Возможно, это способ для исследователей в области оптической визуализации изучить характеристики специального покрытия od.

Автофлуоресцентная визуализация флавопротеинов обонятельной луковицы является многообещающим методом для получения нового представления о специальном покрытии OD с использованием эндогенных оптических сигналов.