Упрощенный метод получения ишемической модели ран

Общая цель данного эксперимента состоит в том, чтобы сделать возможным создание ишемических ран не только у нормальных кроликов, но и у кроликов с пониженной резистентностью, таких как пожилые или больные диабетом. Все используемые в настоящее время методы создания ишемической раны являются высокоинвазивными, и до сих пор ни один из них не может быть использован у животных с диабетом. Эта процедура использует минимально инвазивную хирургию, которая начинается с выполнения трех небольших разрезов кожи над тремя сосудистыми пучками.

Следующим шагом является изоляция и защита центральной вены и сосудистого пучка, чтобы кровообращение в ухе уменьшалось, но не устранялось полностью. Наконец, оставшиеся сосуды, нервы и подкожные ткани разрываются или перевязываются через разрезы кожи. Ишемия уха подтверждается отсутствием артериального пульса, появлением уха, перепадом температур, подкожным насыщением кислородом.

Эта минимально инвазивная операция может показаться сложной в выполнении, но на самом деле она очень проста. Основное преимущество этой методики заключается в том, что она имеет очень небольшое нарушение кожных покровов. С тех пор, как мы впервые опубликовали эту методику в 2007 году, мы получили много вопросов.

С тех пор мы еще больше упростили эту процедуру. Чтобы сделать это еще проще обойтись без использования микроскопа, начните с взвешивания выбранного кролика, обезболите кролика, используя смесь кетамина и ксилазина. Следите за жизненными показателями кролика, с тыльной стороны можно выделить три сосудистых пучка, которые снабжают ухо

Это центральный пучок, который является самым большим с коллатералями, соединяющимися с другими судами. Сводный пучок, в котором артерия обычно очень маленькая или отсутствует, и краниальный пучок. На вентральной стороне дистальный отдел кожи не получает кровоснабжения из проксимальных сосудов.

Вместо этого пучки сосудов на тыльной стороне уха имеют многочисленные проникающие ветви через хрящ для обеспечения кровоснабжения дистального отдела вентральной кожи. У некоторых кроликов на вентральной стороне также имеется очень маленький подкожный сосуд, который снабжает кровью не более одной трети вентральной кожи. При открытом кольцевом разрезе кожи из вентрального разреза практически не происходит кровотечения.

Прежде чем продолжить, убедитесь, что кролик не реагирует на болевые раздражители с помощью щипки пальцев ног и глазного рефлекса, защитите глаза животного, применив искусственную слезу. Мазь. Держите кролика в тепле во время операции с помощью грелки. Затем с помощью бетадина и спиртового скраба обоим ушам и окружающим кожу задрапируйте кролика, чтобы обнажить только два уха.

Одно ухо будет подвергнуто ишемизации, в то время как другое будет служить контролем. Инструментами, используемыми для операции, являются хирургический нож с лезвием No 15, две пары звукоснимателей, одна для кожи, а другая для других мягких тканей. Три противомоскитных зажима, одна или две пары изогнутых микроножниц, одна пара маленьких ножниц для разрезания швов и жестких тканей, иглодержатель и несколько пробойников из нержавеющей стали.

Начните операцию с определения трех сосудистых ножек в соответствии с артериями и венами. С помощью лезвия под номером 15. Аккуратно сделайте один вертикальный разрез кожи на центральной сосудистой ножке.

Изолируйте центральную вену от окружающих тканей и защитите ее. Этот шаг обводит. Центральная жилка для ретракции.

Рассеките центральный нерв свободно. Обычно он находится на взбалмошной стороне вены. Нерв отрезают ножницами.

Рассеките центральную артерию свободно. В норме она находится на черепной стороне и глубже вены, перевязывают артерию и разделяют ее. Очистите ткани вокруг центральной вены над ушным хрящом.

Второй разрез кожи делается над детской ножкой. Чтобы сохранить пучок. Сосуды свободно рассекаются и окружаются для защиты.

Это особенно полезно, когда жила большая, как у этого кролика. Сделайте туннель между этим и первым надрезом. Разрежьте подкожные ткани над хрящом.

Третий разрез кожи делается над черепным пучком. Весь этот пучок перевязывается и отделяется. Кожица над третьим пучком разрезается.

Эта вена находится очень близко к коже, поэтому не режьте слишком глубоко. Затем весь пучок сосудов рассекается, завязывается и отделяется. С помощью ножа и ножниц сделайте подкожный тоннель.

Три разреза прекращают работу всех подкожных тканей, мышц, нервов и мелких сосудистых ветвей. Используйте дополнительные острые и тупые рассечения, чтобы очистить основание, оставив голый хрящ шириной от пяти до 10 миллиметров. Кровотечение можно контролировать с помощью давления марли.

Электрокаутеризация не нужна. Кожа внутри уха не разрезается, так как она не несет много крови. Важным аспектом этой процедуры является обеспечение адекватного рассечения подкожного тоннеля при одновременной защите сосудов.

Это не должно быть такой уж сложной процедурой. После гемостаза три разреза кожи закрываются с помощью четырех или пяти ох швов и снова проверяются, чтобы убедиться, что разрезы кожи закрыты правильно и не видно кровотечения. Круговые раны на всей толщине кожи могут быть созданы на вентральной стороне каждого уха с помощью шестимиллиметрового пробойника из нержавеющей стали.

Расстояние между ранами составляет не менее 20 до 30 миллиметров. Кожа и надхрящное кресло внутри пробойника удаляются, но хрящ не повреждается. После того как ранки будут созданы на обоих ушах, временно накройте их марлей и переведите кролика в процедурный кабинет для нанесения лекарств.

После того как раны будут очищены от любых тромбов, применяют тестовые и контрольные препараты. Раны покрываются окклюзионной повязкой для предотвращения высыхания. При сравнении двух препаратов наносите каждый препарат как на проксимальную, так и на дистальную рану.

Это позволяет контролировать разницу в скорости заживления ран в дистальном и проксимальном отделе уха после операции. Ишемизированное ухо обычно становится холодным и синюшным со сниженной чувствительностью дистальнее разреза. Легкие I отеки могут проявляться в течение нескольких дней, но исчезают сами по себе, и лечение не требуется.

Пульс центральной артерии отсутствует. Движение ушей уменьшается, но не устраняется полностью, потому что некоторые мышцы все еще прикреплены к основанию уха. Если туннель сделан правильно, между разрезами можно увидеть четкую вмятину.

Фентаниловый пластырь прикрепляется к коже спины для облегчения возможных послеоперационных болей. Температура кожи измеряется на каждом ухе ежедневно с помощью термометра. Циркуляция крови в ухе измеряется с помощью чрескожного измерителя напряжения кислорода или лазерного допплеровского расходомера.

Через неделю с 2007 года можно снимать швы на разрезах кожи. Процедура была применена на более чем 70 кроликах. В их число входят 23 кролика с диабетом и четыре пожилых.

Разница температур между неишемическим и ишемизированным ухом варьировалась от одного до 10 градусов по Цельсию, при этом у большинства кроликов она находилась в диапазоне от двух до шести градусов по Цельсию. Разница температур была выше в первые дни после операции, постепенно уменьшалась после 15-го дня, но все еще сохранялась в конце одного месяца. Из каждого уха было взято шесть образцов тканей, и содержание высокоэнергетических фосфатов было измерено с помощью ВЭЖХ, как TP, так и общей энергии.

Концентрации были выше в нормальных ушах, чем в ишемизированных ушах. Время заживления раны всегда было больше для ишемизированного уха, чем для неишемического уха у животных без диабета и диабета у 15 кроликов без диабета. Среднее время заживления составило 17,8 дня в неишемизированном ухе против 21,8 дня в ишемизированном ухе.

У 10 12-месячных животных с диабетом среднее время заживления составило 18,3 дня на неишемическом ухе по сравнению с 29,1 дня на ишемизированном ухе. У всех животных, включая кроликов с диабетом, разрезы кожи заживали нормально без каких-либо осложнений у кроликов. На 24-месячном сроке диабета вентральные раны имеют более высокую склонность к инфицированию.

Эта особенность делает его ближе к человеческим диабетическим ранам. Гистологический образец показывает заживление подкожного туннеля, в котором мышца отсутствует и замещена фиброзными тканями. Тем не менее, кожа не повреждена.

Пытаясь пройти эту процедуру, важно помнить о гуманном обращении с животными. Освоив эту технику, она может быть выполнена менее чем за один час. Мы использовали эту технику на более чем 70 кроликах, в том числе на 23 кроликах с диабетом, без каких-либо осложнений, таких как кровотечение или инфекция.

Это очень безопасная процедура после этой процедуры. Другие методы, такие как дополнительная ишемия, повреждение нервов и бактериальная инокуляция, могут быть выполнены, чтобы ответить на дополнительные вопросы, такие как сосудистые язвы, пролежни и диабетическая нейропатия.