Мышиной модели индуцированного хирургического Эндометриоз через Авто-трансплантации тканей матки

Общая цель данной процедуры заключается в хирургическом индуцировании эндометриоза у мышей путем аутологичного переноса ткани матки в артериальный каскад брыжейки кишечника. Это достигается путем предварительного лигирования, удаления и обнажения эндометрия матки. Вторым этапом процедуры является создание трех эндометриоидных имплантатов из обнаженного эндометрия с помощью биопсийного панча диаметром 2 мм.

Третьим этапом процедуры является наложение швов на три эндометриоидных имплантата к артериям артериального каскада брыжейки кишечника. Заключительным этапом процедуры является ушивание брюшной стенки и кожи, после чего животному дают время на развитие эндометриоидных очагов. Вырезанные из тканей мышей очаги напоминают очаги женщин с эндометриозом, что подтверждается гистологическим анализом, а также паттернами экспрессии генов и белков.

Как правило, специалисты, впервые применяющие данный метод, сталкиваются с тремя основными трудностями. Во-первых, ткани мыши очень малы. Во-вторых, брыжейка кишечника легко повреждается, и, в-третьих, слишком тугое затягивание швов приводит к некрозу кишечника.

Начните с подготовки всего необходимого хирургического оборудования для проведения успешной асептической операции, включая растворы для аналигезии и анестезии. После наркотизации животного с помощью ингаляционного изофлурана убедитесь в наступлении полной анестезии по отсутствию реакции на зажим пальца лапы; чтобы предотвратить пересыхание слизистых во время операции, нанесите офтальмологическую мазь на глаза, после чего выстригите шерсть в области операционного поля с помощью маленькой машинки для стрижки. Продезинфицируйте место операции, трижды попеременно протирая его хлоргексидиновым скрабом и 70% этанолом, затем застелите животное стерильной салфеткой.

Сделайте небольшой разрез по срединной линии с помощью маленьких ножниц или скальпеля, заканчивающийся на расстоянии 0,5–1,0 сантиметра ростральнее вагинального отверстия. Осторожно выполните тупую диссекцию, отделяя стенку тела от брюшной стенки, чтобы облегчить последующее ушивание места операции. После тупой диссекции сделайте небольшой разрез по срединной линии брюшной стенки.

Затем с помощью маленького пинцета аккуратно найдите левый рог матки. Матка расположена дорсально по отношению к кишечнику, который обычно виден сразу после вскрытия места разреза; осторожно потяните рог матки вверх и просуньте под него раскрытый пинцет, чтобы использовать его в качестве ретрактора. Также на этом этапе полезно отметить внешний вид яичников и матки.

Для облегчения определения фазы эструсного цикла просуньте два отрезка плетеного шелкового шовного материала черного цвета размером 6–8 см (размер 5-0) под растянутый рог матки. Надежно перевяжите рог в месте его соединения с маточной трубой.

Аккуратно перевяжите маточную трубу и место соединения матки с шейкой матки. Используя квадратный узел в каждом месте, оставьте концы шва необрезанными. Вырежьте участок рога матки между двумя лигатурами и поместите ткань в стеклянную чашку Петри, содержащую примерно 100 µL PBS с пенициллином и стрептомицином.

В последнюю очередь обрежьте концы шелковой нити. Если шов развязался или началось кровотечение, найдите культю и завяжите еще один узел с помощью маленьких ножниц. Удалите жировую ткань с рога матки.

Раскройте рог матки, введя одно лезвие маленьких ножниц в просвет. Осторожно проведите ножницами вдоль рога матки, удерживая его пинцетом. В стеклянной чашке Петри с помощью биопсийного панча диаметром 2 мм вырежьте три имплантата равного размера. Следите за тем, чтобы они не пересохли.

Поместите стерильную марлю непосредственно над местом разреза и тщательно смочите ее стерильным PBS, содержащим пенициллин и стрептомицин. Важно поддерживать увлажнение на протяжении всех последующих этапов, используя маленькие гладкие пинцеты. Осторожно найдите слепую кишку и аккуратно переместите ее вдоль тонкого кишечника.

Отделите небольшой участок кишечника длиной четыре-пять сантиметров и разложите его веером на предварительно смоченной марле так, чтобы артериальный каскад брыжейки кишечника был четко виден. Обязательно поддерживайте кишечник во влажном состоянии, постоянно орошая его стерильным физиологическим раствором. Наденьте один имплантат на иглу, затем с помощью шовного материала 6-0 aut black alon осторожно зафиксируйте имплантат на артерии примерно в 0,5 сантиметрах от кишечника.

Используйте только один. Наложите шов через пинцет и не затягивайте его слишком сильно, так как это может привести к нарушению кровотока и последующему некрозу кишечника.

Завяжите два узла одним движением, затяните каждый из них и обрежьте шов на расстоянии двух миллиметров от имплантата, увлажните кишечник. Затем, двигаясь в ростральном направлении, вытяните следующие три-четыре сантиметра кишечника и аккуратно верните на место участок, в который уже установлен имплантат.

Пропустите одну или две артерии от места предыдущей имплантации и пришейте следующий имплантат; повторите процедуру для третьего имплантата. В конце зашейте брюшную стенку и закройте кожу с помощью хирургических скоб. После закрытия операционной раны и введения анальгетиков поместите животное в клетку на живот, частично на рециркуляционную грелку с водой, до полного восстановления животного.

Для извлечения эндометриоидных очагов найдите черные швы в брыжейке кишечника. Измерьте длину и ширину каждого эндометриоидного очага с помощью штангенциркуля. Аккуратно выделите эндометриоидные очаги, стараясь не повредить их.

Удалите любую ткань из очага поражения, не являющуюся эндометриоидной. Слегка встряхните три заполненных жидкостью эндометриоидных очага перед удалением шва. Осторожно удалите шов и вскройте два эндометриоидных очага.

Взвесьте их повторно перед переходом к обработке тканей. Затем иссеките и взвесьте оставшийся рог матки. Гистологический анализ эндометриоза как у женщин, так и в представленной здесь мышиной модели показывает, что эндометриоидный очаг содержит железы и строму эндометрия. Эндометриоидные очаги у мышей также содержат макрофаги, нагруженные гемосидерином, что является общим характерным признаком эндометриоза у женщин. Эндометриоидные очаги, удаленные у мышей через три дня после индукции, выглядят воспаленными и геморрагическими, как показано слева, после двух-четырех недель роста.

Эндометриоидные очаги в мышиной модели представляли собой кистозные образования, заполненные жидкостью и окруженные перитонеальными спайками, по сравнению с массой очагов на момент индукции. Очаги, заполненные жидкостью, были на 306% и 862% больше, а ланцетовидные очаги — на 51% и 172% больше через один и два месяца после индукции соответственно. Жидкостным и ланцетовидным эндометриоидным очагам.

Вес оставался стабильным через один месяц после индукции в пяти различных экспериментах, проведенных по данной методике. Эта модель может быть использована для изучения патофизиологии эндометриоза, а также для исследования новых терапевтических средств для лечения боли и бесплодия, связанных с этим заболеванием.