Диагностика туберкулеза легких с Xpert MTB / RIF испытаний

Общая цель данной процедуры заключается в одновременном обнаружении микобактерий, туберкулеза и устойчивости к рифампицину в отделяемой мокроте или концентрированном осадке мокроты в течение двух часов. Начните с простого и высокоэффективного протокола деконтаминации образца. Затем перенесите каждый обработанный образец в одноразовый специализированный картридж M-T-B-R-I-F, который содержит реагенты для ПЦР и в котором проходит процесс ПЦР.

Установите картриджи в систему GeneXpert DX и запустите высокочувствительную вложенную ПЦР HEMI для одновременного выявления mycobacterium tuberculosis и определения резистентности к рифампицину. В завершение интерпретируйте результаты теста и передайте их лечащему врачу. Анализ Expert MTPR предназначен для использования с образцами пациентов с клиническим подозрением на туберкулез легких, которые соответствуют критериям, изложенным в сопроводительном тексте.

Обратите внимание, что данный метод не должен использоваться для мониторинга эффективности лекарственной терапии. Crystal. Техник из моей лаборатории продемонстрирует протокол в соответствии со стандартом 2 международных стандартов по лечению туберкулеза. Соберите два образца для бактериологического исследования у каждого пациента с подозрением на туберкулез легких.

Выделите один модуль системы GeneXpert DX для каждого исследуемого образца, маркируя каждый картридж идентификатором образца. Теперь для анализа каждого образца перенесите 1 mL мокроты в коническую пробирку объемом 15 mL с завинчивающейся крышкой с помощью другой стерильной переносящей пипетки. Добавьте 2 mL реагента для образцов M-T-B-R-I-F.

Плотно закройте крышку. Интенсивно встряхните пробирку 10–20 раз. После этого оставьте пробирку в вертикальном положении при комнатной температуре на пять минут.

Снова выдержите при комнатной температуре в течение 10 минут. Убедитесь, что все образцы полностью гомогенизированы и не содержат видимых комочков мокроты. Сначала промаркируйте картриджи идентификационным номером каждого осадка мокроты; к каждому образцу осадка добавьте 1,5 milliliters реагента для образцов M-T-B-R-I-F, после чего перенесите 0,5 milliliters в коническую пробирку объемом 15 milliliter с завинчивающейся крышкой. Закройте крышку, перемешайте на вортексе в течение 30 секунд и оставьте пробирку в вертикальном положении на пять минут.

Перемешайте содержимое пробирок на вортексе, затем оставьте их в вертикальном положении на 10 минут. Осмотрите разжиженные образцы, чтобы убедиться в отсутствии комков мокроты. Сопоставьте маркировку на пробирках с соответствующими картриджами.

Не открывайте картридж до начала проведения анализа; используйте картридж в течение 30 минут после открытия крышки. С помощью стерильной переносящей пипетки наберите разжиженный образец так, чтобы мениск находился выше минимальной отметки. Медленно введите образец в картридж.

Закройте крышку картриджа. Начните тест в течение 30 минут после добавления образца в картридж. Сначала включите компьютер, затем прибор на рабочем столе.

Дважды щелкните по иконке Gene Expert DX. Войдите в системное программное обеспечение. Выберите «create test», чтобы открыть диалоговое окно сканирования штрихкода картриджа.

Затем введите идентификатор образца и отсканируйте штрихкод на картридже. Когда появится окно создания теста, нажмите «начать тест» и введите пароль в диалоговом окне. Теперь откройте дверцу модуля прибора и установите картридж.

Закройте дверцу, чтобы начать тест. Когда зеленый индикатор погаснет, тест будет завершен. После того как система разблокирует замок, откройте дверцу модуля и извлеките картридж.

Наконец, утилизируйте использованные картриджи в соответствующие контейнеры для отходов. Каждый тестовый картридж содержит реагенты для QPCR на определение резистентности комплекса Mycobacterium tuberculosis к рифампицину, а также соответствующие экспериментальные контроли. Контроль проверки зондов подтверждает регидратацию реагентов, заполнение ПЦР-пробирок в картридже, целостность зондов и стабильность красителя.

Кривая обработки образца служит положительным контролем надлежащей обработки целевых бактерий, а также указывает на наличие любых ингибиторов ПЦР. Праймеры разработаны для дифференциации консервативной последовательности дикого типа и мутаций в основном регионе гена RPOB, связанных с резистентностью к рифампицину (RIF). Значения CT обратно пропорциональны концентрации целевой матрицы M-T-B-D-N-A в исследуемом образце.

В диалоговом окне с результатами теста указано, что в образце пациента обнаружена целевая ДНК MTB, а устойчивость к RIF не обнаружена. Целевая ДНК MTB обнаружена в низких концентрациях с признаками устойчивости к рифампицину. Оба контроля, SPC и PCC, соответствуют установленным критериям приемлемости.

Данный результат анализа считается недостоверным, так как SPC отрицателен, а продукты ПЦР отсутствуют. Это может быть следствием неправильной подготовки образца или ингибирования ПЦР. Повторите анализ.

Как вы видели на видео, данный тест стандартизирован и требует лишь умеренной лабораторной инфраструктуры и подготовки. Таким образом, я полагаю, что экспресс-тест M-T-B-R-F обладает потенциалом для обеспечения универсального доступа к стандартизированному, чувствительному и высокоспецифичному диагностическому тестированию как на туберкулез, так и на устойчивость к рифампицину в пунктах оказания медицинской помощи.