Обнаружение инвазивный легочный аспергиллез в гематологических больных злокачественных новообразований с помощью бокового потока технологии

Быстрый и точный момент оказания медицинской помощи тест на инвазивный легочный аспергиллез представлен. Он использует боковой поток технологий с использованием специфических моноклональных антител, которые связываются с

Общая цель данной процедуры заключается в демонстрации использования устройства бокового потока для быстрого обнаружения диагностического антигена аспергилла в сыворотке крови человека и жидкостях BAL. Это достигается путем предварительного нанесения образца сыворотки или BAL на выпускное отверстие устройства бокового потока. Второй шаг заключается в том, чтобы позволить раствору мигрировать вдоль мембраны.

Следующим шагом является определение действительности теста путем изучения внутренней контрольной линии. Заключительным этапом является интерпретация результата теста путем изучения тестовой линии. В конечном счете, устройство бокового потока используется для обнаружения присутствия диагностического антигена аспергилла в сыворотке крови или жидкостях BAL.

Аспергиллус ЛФД может быть использован в качестве дополнительного теста для диагностики инвазивного аспергиллеза легочной артерии. Основное преимущество этого метода перед существующими методами, такими как аспергиллус, галакто, иммуноферментный анализ манана, панф, фундал, анализ бета-глюкана и ПЦР-тест на аспергиллус, заключается в том, что это быстрый диагностический тест на месте оказания медицинской помощи, требующий минимального лабораторного оборудования и подготовки. Несмотря на то, что LFD был разработан для обнаружения видов aspergillus, технология бокового потока также может быть применена для обнаружения других инфекционных патогенов, таких как цетоспориум, фузариоз и виды стояков.

Благодаря включению моноклональных антител, специфичных для этих организмов, визуальная демонстрация этого метода имеет решающее значение. Поскольку интерпретация результатов LFD требует ознакомления с форматом анализа Для сбора сыворотки из необработанных образцов крови допускается свертывание крови при четырех градусах Цельсия сыворотки и бронхоальвеолярного лаважа, или жидкости BAL следует хранить в виде аликвот при температуре минус 20 градусов Цельсия перед использованием, хранение в качестве аликвот ограничивает потенциал деградации целевого антигена путем повторного свободного хранения образцов при повторном тестировании для подготовки образцов сыворотки и BAL к тестированию, Разморозьте образцы при комнатной температуре, а затем выдержите на льду тщательно перемешайте с помощью вортекса, а затем центрифугируйте в течение одной минуты при 14 000 об/мин. Для рутинного тестирования образцов человека разбавьте сыворотку один к одному с питательной средой для тканевых культур и диссоциируйте целевой антиген из сывороточных иммунных комплексов. Разбавьте сыворотку от одного до двух PBS, содержащим 4% ЭДТА, нагрейте в течение трех минут на кипящей водяной бане и центрифугируйте в течение пяти минут при 14 000 об/мин.

Жидкости BAL человека не требуют предварительной обработки. Образец BAL был разморожен вихрем, а центрифуга представляет собой аккуратный образец, который может быть нанесен непосредственно на устройство бокового потока. Для тестирования устройства бокового потока или LFD хранятся при комнатной температуре или 23 градусах Цельсия, при которой они стабильны в течение 12 месяцев.

Чтобы начать анализ, извлеките приборы из мешочков и положите на ровную поверхность. С помощью стерильного наконечника для пипетки в течение нескольких секунд нанесите 100 микролитров предварительно обработанной сыворотки на выпускное отверстие устройства. Жидкость должна мигрировать за счет капиллярного действия вдоль мембраны из азотистой целлюлозы в окне наблюдения.

Таким же образом нанесите 100 микролитров чистого образца BAL на выпускное отверстие устройства. Дайте анализу поработать в течение 15 минут при комнатной температуре, в это время следует записать результаты теста. Тест не следует оставлять дольше чем за 15 минут до записи результатов.

Поскольку это может привести к искажению интерпретации результата, недельная реакция не будет усилена за счет продления инкубационного периода. LFD состоит из внутренней контрольной линии, обозначенной буквой C на пластиковом корпусе, и тестовой линии, обозначенной буквой T. Контрольная линия всегда должна присутствовать независимо от антигена аспергилла в образце сыворотки или BAL. Это показывает, что анализ был проведен правильно, если антиген аспергиллуса присутствует в сыворотке крови или образце BAL.

Тестовая линия также появится в течение 15 минут после нанесения образца. Интенсивность теста, реакции Лайма пропорциональна концентрациям целевого антигена в образцах сыворотки и VAL. Самым сложным аспектом этой процедуры является интерпретация результатов теста.

Результаты LFD должны быть прочитаны через 15 минут, и результат теста должен быть сравнен с репрезентативным примером, показанным здесь, На этом рисунке показаны репрезентативные примеры слабых, положительных, умеренно положительных и сильных положительных результатов LFD с образцами BAL и сыворотки. Любая положительная тестовая линия в образце сыворотки, независимо от интенсивности, указывает на инвазивный пари-аспергиллез или заболевание IPA из-за наличия циркулирующего антигена аспергиллуса в кровотоке. Положительные реакции на БАЛ независимо от интенсивности указывают на прорастание спор и развитие потенциально патогенного вируса в легких.

При отсутствии антигена аспергиллуса тестовая линия не появится и результат будет зафиксирован как отрицательный. В этой таблице представлены результаты тестов LFD с использованием жидкостей BAL у пациентов с острым миелоидным лейкозом или ML, диагностированных в соответствии с диагностическими критериями Европейской организации по исследованию и лечению рака и исследовательской группы Национального института аллергии и инфекционных заболеваний. В эту таблицу включены соответствующие клинические и психологические данные, а также результаты специфического ПЦР-теста ASPERIA для каждого пациента.

В соответствии с рекомендациями E-O-R-T-C-M-S-G 2002 года, пациентам 12, 13 и 16 лет был поставлен диагноз возможного IPA на основании факторов хозяина и клинических критериев или положительного результата GM. Согласно пересмотренным рекомендациям E-O-R-T-C-M-S-G 2008 года, факторы хозяина и ГМ-позитивность сами по себе или факторы хозяина и клинические критерии не указывают на возможную инвазивную грибковую инфекцию, если они не сопровождаются подтверждающими доказательствами из клинических данных и микологии соответственно. У шестого пациента был диагностирован вероятный IPA в соответствии с рекомендациями 2002 и 2008 годов из-за факторов хозяина, основных и второстепенных клинических особенностей и положительного результата ГМ.

Наконец, обратите внимание, что, хотя ни анализ LFD, ни анализ ПЦР в настоящее время не включены в рекомендации E-O-R-T-C-M-S-G в образцах BAL пациентов 6 и 12 пациентов, существует сильная связь между двумя анализами и коммерческим тестом gala manin, указывающим на наличие антигена аспергиллуса и нуклеиновой кислоты после этой процедуры. Другие методы, такие как аминоанализ фермента Pella Glactomannan, panf, тест на бета-глюкан грибов или ПЦР-тесты на аспергиллус, могут выполняться параллельно для подтверждения инвазивного грибкового заболевания. Не забывайте, что работа с сывороткой крови человека и жидкостями BAL может быть чрезвычайно опасной, и операторы устройства всегда должны быть вакцинированы от таких заболеваний, как гепатит В и туберкулез.