Перепрограммирование соматических клеток человека в индуцированные плюрипотентные стволовые клетки (иПСК) Использование ретровирусных вектор с GFP

Общая цель этой процедуры заключается в получении человеческих IPS-клеток посредством ретровирусно-опосредованной сверхэкспрессии OCT 4, SOX 2K LF 4 и M с помощью репортерной системы GFP. Это достигается путем добавления соответствующего количества индивидуального GFP, экспрессирующего ретровирус. Затем инфицированные вирусом клетки, экспрессирующие GFP, переносятся в пластины, покрытые 0,1% желатином, с эмбриональными фибробластами мыши.

Третьим этапом процедуры является замена среды на среду для культивирования эмбриональных стволовых клеток человека. Наконец, изолированы замолчавшие GFP колонии IPS, которые демонстрируют морфологию, сходную с человеческими эмбриональными стволовыми клетками. В конечном счете, результаты показывают экспрессию эндогенных плюрипотентных маркеров посредством иммунофлуоресцентного окрашивания и R-T-Q-P-C-R.