Экспериментальная модель Эндокардит метициллин устойчивый Золотистый стафилококк (MRSA) у крыс

Общая цель этой процедуры заключается в создании экспериментальной модели инфекционного эндокардита у крыс. Это достигается путем предварительного культивирования золотистого катеруса и подготовки хирургических катетеров к инфекции. Далее подготавливается операционная зона и животное обезболивается.

После того, как животное обезболивается, катетер вводится через правую сонную артерию к сердцу. Заключительным этапом является заражение животных золотистым путем введения в хвостовую вену. В конечном итоге, ткани-мишени препарируются и подготавливаются к количественному посеву.

Основное преимущество этой методики перед существующими методами, такими как модель экспресс-эндокардита, заключается в том, что модель красного эндокардита может быть использована с системой визуализации in vivo. Ivus. Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в области патогенеза полости рта, такие как вирулентность и эффективность антимикробного средства. Как правило, люди, плохо знакомые с этой техникой, будут испытывать трудности, потому что хирургическая процедура сложна.

Сначала привите петлю, полную культуры M SSA, от замороженного поголовья до случая с кровью овцы. Соевая шнековая пластина инкубирует культуру в течение ночи при температуре 37 градусов Цельсия, убедившись в отсутствии загрязнения. Выберите одну колонию с тарелки и используйте ее для инокуляции пяти миллилитров соевого бульона в 15-миллилитровую тюбику с защелкивающейся крышкой.

Инкубируйте инокулят при температуре 37 градусов Цельсия в течение ночи в встряхивающем инкубаторе. Установите значение 200 об/мин, чтобы сначала подготовить катетеры. Разрежьте полиэтиленовую трубку на длину 10 сантиметров и простерилизуйте катетеры в дезинфицирующем растворе cex в течение 30 минут.

Затем расплавите один конец стерилизованной трубки, надавливая на кончик нагретыми стерильными щипцами, чтобы создать катетер, который будет проходить от правой сонной артерии в левый желудочек и вызывать повреждение эндокарда при сердцебиении. Затем обезболите крысу, поместив ее в камеру, содержащую смесь фтора и кислорода один к одному, пока анестетик не начнет действовать. Подтвердите анестезию, проверив, расслаблены ли мышцы и отсутствуют ли педальные рефлексы.

И поддерживать обезболивающее состояние во время операции с помощью носового конуса, который соединен с газовой смесью. Очищайте операционную область бетадином и 70% этанолом с использованием стерильной техники на протяжении всей операции. Поместите крысу в спинное положение и сделайте разрез вертикально через слой кожи шеи выше грудины с помощью тупого рассечения.

Отделите фасцию, чтобы обнажить правую сонную артерию. Правая сонная артерия расположена чуть правее средней линии над ключицами. Осторожно вытяните артерию вверх из полости шеи и поместите два шелковых швов длиной 10 сантиметров под артерию, чтобы перевязать ее на обнаженном головном конце.

Затем поместите зажим на артерию, чтобы предотвратить кровотечение. Сделайте небольшое отверстие в верхней части артерии с помощью введения катетера с помощью щипцов. Введите незапечатанный конец катетера через отверстие в артерии.

Снимите зажим и надавите на катетер вниз по направлению к сердцу. До тех пор, пока сопротивление не будет вставлено должным образом, катетер должен простираться на четыре-пять сантиметров вглубь артерии и пульсировать в такт сердцебиению крысы. Как только катетер будет установлен, завяжите ослабленный шов вокруг зубчатого конца артерии и закрепите катетер на месте.

Шелковым швом срежьте лишний шов и концы катетера, а затем подверните концы под кожу шеи. Закройте кожу зажимами. Поместите крысу в чистую клетку и держите ее в теплом месте до тех пор, пока она не оправится от анестезии.

Обеспечьте крысу едой и водой и часто проверяйте ее, как во время, так и после выздоровления. Инфекция может быть проведена в период от одного до семи дней после операции, но время должно оставаться неизменным в пределах экспериментов. Очистите хвост крысы с помощью 70% этанола и введите 0,5 миллилитра культуры MRSA в нужную клетку.

Считайте в хвостовую вену. С помощью полудюймовой иглы 27 калибра надавите на место инъекции до тех пор, пока кровотечение не остановится, прежде чем вернуть крысу в клетку. Принеся крысу в жертву, протрите грудную клетку 70%-ным этанолом, а затем сделайте V-образный разрез в груди ниже грудины.

Разрежьте хрящи ребер с каждой стороны грудины. Чтобы обнажить сердце, осторожно потяните его вверх и прорежьте ткань рядом с аортой и рассеките вверх, чтобы освободить сердце. Поместите сердце на стерильную чашку Петри, выстланную марлей размером четыре на четыре дюйма, а затем сделайте надрез через внутреннюю стенку левого желудочка и откройте левую камеру.

Проверьте правильность установки катетера, а затем извлеките его. Осмотрите и удалите растительность из клапана ножницами и щипцами. Также удаляют почки и селезенку, а после взвешивания и гомогенизации тканей и вегетации делают серийные разведения в PBS для количественной культуры.

Здесь показан правильно расположенный катетер, как указано крайней левой стрелкой. Он проходит через аортальный клапан и в левую сторону камеры сердца, а вокруг аортальных клапанов видны многочисленные вегетации, как показано средней и правой стрелками. В этой таблице приведен пример вирулентности штамма ssus в модели эндокардита крыс.

Все животные испытывали с помощью инокля от 10 до пятого и 10 до шестого. После освоения КОЕ развился эндокардит с высокой плотностью ssus в сердечных вегетациях, а также в почках и селезенке. Эта хирургическая процедура может быть выполнена в течение 10 минут, если она выполнена правильно.

Пытаясь выполнить эту процедуру, важно помнить о поддержании животного в оцененном состоянии во время операции после этой процедуры. Не такие методы, как ВСУС, могут быть выполнены для ответа на дополнительные вопросы, такие как мониторинг эффективности антимикробных агентов в режиме реального времени и экспрессия гена in vivo после его развития. Эта методика является способом для исследователей в области степа оруса и художественной литературы изучить его патогенный фактор вирулентности в эндоваскулярной инфекции.

После просмотра этого видео у вас должно сложиться хорошее представление о том, как установить экспериментальную модель эндокардита у крыс. Не забывайте, что работа с МРА может быть чрезвычайно опасной, и при выполнении этой процедуры следует соблюдать такие меры предосторожности, как ношение лабораторного костюма, халата и перчатки.