Губка поливинилового спирта модели имплантации

Общая цель данной процедуры заключается в использовании губки из поливинилового спирта для моделирования заживления ран у мышей. Это достигается путем предварительного гидратирования и наполнения губки перед имплантацией. Затем губку вводят в карман между брюшной мышцей и кожей мыши.

После имплантации в каждую губку можно ввести препарат для лечения. Заключительным этапом является извлечение губок из организма мыши. В конечном итоге могут быть проведены срезание, окрашивание и количественные анализы для наблюдения за изменениями и вариациями в процессе заживления ран.

Хотя данный метод позволяет получить представление о заживлении ран, он также может быть применен в других областях исследований, таких как ангиогенез опухолей, доставка лекарственных средств, выживаемость и приживление имплантированных клеток. Начните с гидратации губок путем перемешивания в течение ночи в 0,9% водном растворе хлорида натрия. Затем подвергните автоклавированию 75 миллилитров суспензии гидратированных губок в течение 25 минут при 121 °C.

Для стерилизации губок поместите раствор для автоклавирования губок в стерильный бокс, затем с помощью стерильного пинцета возьмите одну губку, отожмите ее пинцетом и с помощью вакуумного наконечника удалите из губки как можно больше раствора. Затем поместите отжатую губку в планшет для культивирования тканей, стараясь оставить пространство между губками, и дозированно нанесите раствор для обработки непосредственно в центр губки. После этого осторожно нажмите наконечником пипетки на губку, чтобы помочь ей впитать раствор.

После загрузки всех губок храните планшет на льду до момента имплантации губок мыши. Убедившись в седации с помощью теста на щепотку, поместите мышь в носовой конус в положении лежа на спине. Затем с помощью электрического бритвенного станка удалите шерсть на вентральной стороне мыши ниже грудной клетки на участке размером один на один дюйм.

После этого протрите область, чтобы удалить состриженные волосы. Стерилизуйте выбритый участок раствором Бетадина, затем 70% alcohol. Далее натяните кожу.

С помощью скальпеля сделайте вертикальный разрез, длина которого в полтора-два раза превышает диаметр вставляемых губок. Будьте осторожны, чтобы не прорезать брюшную полость. Используйте пинцет, чтобы захватить край кожи.

Затем с помощью ножниц Метценбаума медленно отделите кожу от мышц по обе стороны от разреза. Расширьте карман по всей ширине тела мыши — от грудной клетки до задних конечностей. Теперь, используя пинцет, захватите первую губку, предназначенную для введения в организм животного, сжав ее по бокам.

Затем перенесите губку в прямой пинцет так, чтобы она удерживалась сверху и снизу. Далее захватите и приподнимите край кожи другим пинцетом и медленно введите губку, стараясь не касаться кожи или подлежащей мышцы. После того как все губки будут введены, с помощью пинцета соедините обе стороны разреза, а затем проведите шовный материал через оба слоя кожи.

Затяните первый узел ровно настолько, чтобы края кожи соприкоснулись, и завершите квадратный узел еще одним набросом в противоположном направлении. В этот раз затяните узел плотно. Затем завяжите еще два квадратных узла, чтобы завершить наложение шва.

Наложите дополнительные швы, чтобы полностью закрыть разрез. В завершение извлеките животное из системы анестезии и наблюдайте за ним до восстановления сознания. Мышь должна быстро начать передвигаться и вернуться к дооперационному уровню мобильности.

Начните с заполнения шприца необходимым раствором и установите на него иглу калибра 28G. После подтверждения седации путем сжатия пальца лапы, введите иглу в тело животного под углом 45 градусов через кожу в центре губок, чтобы убедиться, что игла находится в губке. Медленно извлеките иглу по вертикали.

Если игла находится в губке, губка поднимется вместе с иглой. Затем медленно введите вещество в губку и извлеките иглу. После умерщвления животного зажмите кожу пинцетом и сделайте разрез рядом с нужной губкой.

Наконец, осторожно отделите губки от окружающей капсулы, стараясь не захватить лишние ткани вокруг извлекаемой губки. Губки можно хранить в различных условиях в зависимости от типа планируемого анализа. Для изготовления срезов извлеченные губки можно заливать в среду для заморозки, например, в состав для оптимальной температуры резания (OCT), или помещать в 10% формалин для последующей заливки и изготовления срезов в парафиновых блоках, как это было сделано для данных губок, окрашенных гематоксилином и эозином.

При приготовлении срезов окрашенных губок trireme наилучшие результаты достигаются, если разрезать губку пополам по диаметру, как показано здесь, а затем заливать ее срезом вниз. Как продемонстрировано здесь, срезы губки должны выполняться таким образом, чтобы на рисунке была представлена вся ширина губки. Губка слева была залита или разрезана неправильно, о чем свидетельствует нарушение границы ткани вдоль правой стороны среза, в то время как целая губка справа была обработана правильно.

После просмотра этого видео вы должны получить четкое представление о том, как подготавливать, имплантировать, вводить препараты и извлекать губки из поливинилового спирта для изучения заживления ран у мышей.