Do-It-Yourself Устройство для восстановления криоконсервированных образцов случайно уронил в криогенных резервуаров

Цель этой процедуры состоит в том, чтобы облегчить извлечение образцов в криобоксах и криопробирках из двух резервуаров, заполненных жидким азотом, с помощью простого в конструкции устройства. Это достигается путем предварительного снятия одной или двух морозильных решеток с устройства, чтобы освободить место для маневрирования, и вертикальной установки устройства в устройство. Второй шаг – аккуратно соскоблить по дну исполнителя с помощью устройства.

Затем потяните устройство вертикально вдоль стен исполнителя Чтобы вытащить морозильную камеру из резервуара, последним шагом является захват коробки, извлеченной со дна устройства, и замена снятых полок морозильной камеры. Основное преимущество этого метода перед существующими методами, такими как декантация, стержень, заполненный жидким азотом, заключается в том, что он обеспечивает простую, безопасную и быструю альтернативу, которая сохраняет целостность образца и может быть выполнена одним оператором. Чтобы начать сборку криотолерантного устройства, используйте плоскогубцы, чтобы выпрямить одну сторону трехсторонней прочной стяжки, чтобы получилась прочная стяжка LHA.

Как видно на рисунке, размеры прочного галстука можно выбирать в зависимости от диаметра шеи исполнителя. Две такие прочные стяжки должны быть изготовлены, чтобы позволить устройству извлекать криобоксы размером пять с половиной на пять с половиной дюймов. Закрепите их прочным стяжным ремнем TST с помощью болта головки, гаечной шайбы и винта, чтобы сформировать основание криосовка.

Теперь устройство должно выглядеть так, как показано здесь. Теперь с помощью пластины со шлицем совместите прорези на прочном тройнике с прорезями на одном конце пластины с прорезями. Затем закрепите их вместе с помощью гаек и болтов Hillman.

Сверлите отверстия для крепления, если щелевая пластина и прочные стяжки не имеют предварительно просверленных отверстий. При желании ручку можно сформировать, согнув другой конец щелевой пластины и обернув пенопластом. Чтобы лучше схватить устройство, обязательно удалите пену перед вливанием воды.

Криотолерантное устройство для извлечения «сделай сам» также может быть адаптировано для извлечения криопробирок. Для этого плоское основание заменяется сетчатым фильтром из нержавеющей стали, предназначенным для вычерпывания флаконов из жидкости. Чтобы приступить к сборке, сначала открутите коронные гайки и болты, прикрепив прочный тройник шины к шлицевой пластине.

Затем перед тем, как прикрепить сетчатый фильтр из нержавеющей стали к щелевой пластине, осторожно согнуте горлышко сетчатого фильтра с помощью плоскогубцев, чтобы сориентировать основание под углом, напоминающим ковш. Если используемый фильтр поставляется с губой, используйте плоскогубцы, чтобы отогнуть губу вниз. Это облегчит маневрирование с устройством.

Совместите отверстие на ручке сетчатого фильтра с отверстиями на шлицевой пластине и закрепите сетчатый фильтр с помощью гаек и болтов Hillman. Просверлите отверстия, если в комплекте с сетчатым фильтром нет предварительно просверленных отверстий. Чтобы начать извлечение криобоксов у исполнителя, обязательно сначала наденьте криогенные перчатки.

Затем снимите одну или две решетки морозильной камеры с исполнителя, чтобы освободить место для маневрирования с устройством. Затем используйте вертикальное криотолерантное устройство для извлечения самодельных изделий, оснащенное прочным основанием ttra, чтобы аккуратно соскребите по дну дозатора и соберите коробку, упадите на дно резервуара для дозаторов. Затем потяните устройство вертикально вдоль стенок исполнителя, чтобы вычерпать морозильную камеру из бака.

Обратите внимание, что устройство следует держать вертикально и тянуть прямо вверх, чтобы коробка не соскользнула обратно в исполнителя. Чтобы извлечь криопробирки, используйте мерную ложку, оснащенную ситечком, чтобы аккуратно соскоблить дно дозатора, как при извлечении криобокса, потяните устройство в вертикальное положение и возьмите флаконы, собранные в ситечко. Основная проблема в исследованиях экспрессии генов заключается в том, что качество РНК зависит от условий хранения как замороженных образцов тканей, так и экстрагированной РНК.

На этом рисунке показано влияние обработки образцов на целостность общей РНК из одного и того же тканевого источника, который был подвергнут другой обработке образцов до начала эксперимента. Скорость подготовки РНК показывает четкие 28 с и 18 с рибосомальные полосы РНК с 28 s рибосомальной полосой РНК, примерно в два раза интенсивнее, чем 18 s полоса рибосомальной РНК. Это признак того, что РНК не повреждена. На третьей и четвертой дорожках изображены образцы со значительной деградацией из-за многократного частичного размораживания путем кратковременного извлечения из организма, таким образом, моделируется длительное хранение с периодической декантацией из-за необходимости извлечения упавших флаконов на коробках.

Тем не менее, образцы, хранящиеся в службе исполнителей с помощью устройства «сделай сам» и, следовательно, без частичного размораживания, содержат неповрежденную РНК на второй дорожке. После просмотра этого видео у вас должно сложиться хорошее понимание того, как извлекать образцы из заполненного жидким азотом двара без необходимости его сцеживания.