Мышиной модели Мышцы обучение по нервно-мышечной электростимуляции

Мышиной модели нервно-мышечной электростимуляции (NMES), безопасный и недорогой клинической модальности, в передней мышцы отсек описано. Эта модель имеет то преимущество, изменить доступными клиническими устройств с целью выявления целевых и специальных сокращений мышц у мышей.

Общая цель этой процедуры — продемонстрировать модель тренировки мышц с использованием нервно-мышечной электростимуляции. Это достигается путем предварительной адаптации клинически доступного поверхностного электрода, предназначенного для использования у людей, к поверхностному электроду, который может быть использован у мышей для последующей анестезии и позиционирования животного для стимуляции. Затем поместите поверхностный электрод непосредственно над глубоким малоберцовым нервом, расположенным дистальнее головки малоберцовой кости.

Заключительным этапом является выполнение протокола стимуляции передних сгибаемых мышц. В конечном счете, гистологический анализ показывает увеличение сосудистой сети скелетных мышц, а сократительное тестирование in situ показывает увеличение пиковой силы сатаны. Здравствуйте, меня зовут Фабрицио.

Я являюсь доцентом кафедры физической медицины и реабилитации в Университете Питтсбурга и директором Лаборатории клеточной реабилитации. Сегодня мы продемонстрируем вам зеркальную модель тренировки мышц с помощью нервно-мышечной электростимуляции. В этой первой части демонстрации мы покажем вам, как преобразовать клинически доступный поверхностный электрод в электрод, который можно использовать для стимуляции скелетных мышц у мышей.

Во второй части мы продемонстрируем, как реализовать этот протокол нервно-мышечной электростимуляции в ваших экспериментах и при разработке животных моделей, которые точно имитируют модальности. Использование клиники важно, потому что она может помочь нам ответить на вопросы, связанные с физиологией скелетных мышц, например, как активация мышц запускает механические трансдуктивные реакции, и в этом мы можем рассмотреть это на молекулярном, клеточном и тканевом уровнях. Здравствуйте, меня зовут Рикардо Феррари.

Я учусь в аспирантуре на кафедре физиотерапии Университета Питтсбурга. Рядом с мышечной электростимуляцией является распространенной процедурой, используемой в клинике для увеличения мышечной силы и улучшения заживления мышц. Однако остается много вопросов относительно оптимальных параметров, которые следует использовать.

Эта животная модель может помочь в разработке специфических протоколов электростимуляции для использования в клинических условиях. Подготовка электрода начинается с согнутия двух шестимиллиметровых золотых штифтов под углом 90 градусов. Далее оголяют примерно семь сантиметров двух медных проводов, сняв внешнюю изоляцию.

Затем припаяйте провода от разъемов к двум золотым контактам, которые расположены примерно на расстоянии 3,5 миллиметра друг от друга. После этого места наложите термоусадочную трубку на соединение между медными проводами и золотыми контактами для изоляции и стабилизации, нагрейте термоусадочную трубку, убедитесь, что золотые контакты расположены параллельно друг другу, и проткните их через печатную плату так, чтобы наконечники были выровнены. Затем вставьте штифты в несколько применений прозрачной эпоксидной смолы, дав эпоксидной смоле полностью высохнуть между нанесениями в конце, отшлифуйте эпоксидную смолу, чтобы обнажить кончики золотых штифтов.

Затем с помощью вольтметра убедитесь, что провода не закорочены. Затем с помощью пластиковой трубки изолируйте металлические контакты гнездового двустороннего проводного разъема. Далее подсоедините электродные выводы от устройства NMES к гнездовому двустороннему разъему провода.

Все процедуры были рассмотрены и одобрены Университетом Питтсбурга IAUC и выполнены в PHS Assured и alac. Международные аккредитованные программы и учреждения обезболивают животное путем вдыхания изоофтора. Животное должно оставаться под наркозом на протяжении всего сеанса NMES.

Анестезия должна быть подтверждена с помощью теста на разгибательный рефлекс пальцев ног. Затем поместите животное в боковое лежачее положение. Впоследствии побрейте заднюю конечность, протрите ее спиртом, протрите электрод 3%-ной отбеливателем.

Затем с помощью воды установите параметры стимуляции, включая длительность импульса 150 микросекунд и частоту 50 PP с. Затем установите время стимуляции на пять секунд с увеличением на 0,5 секунды и уменьшением на 0,5 секунды. Это позволит мышце постепенно акклиматизироваться к стимуляции и будет более комфортным для животного.

После этого установите время выключения между схватками на 10 секунд. Это может быть скорректировано в зависимости от желаемого эффекта, но сокращение времени отдыха приведет к более быстрому возникновению мышечной усталости. Затем простерилизуйте электрод 3% отбеливателем, а затем водой и нанесите проводящий гель на электрод для стимуляции мышц переднего отдела, включая переднюю большеберцовую мышцу и самую длинную мышцу разгибателя пальца

Положение электрода подтверждается, когда стимуляция вызывает полное тыльное сгибание голеностопного сустава и полное разгибание пальцев. С другой стороны, тыльное сгибание лапы без разгибания пальцев предполагает, что стимулируется только передняя мышца большеберцовой кости. Затем инициируют интенсивность NMES на уровне девяти миллиампер, выполняют два подхода сокращений, в общей сложности 20 сокращений с пятиминутным отдыхом между подходами в период отдыха, выполняют стимуляцию контралатеральной конечности.

Теперь поместите животное в камеру восстановления. После четырех недель NMES у мышей с полозьями MDX в возрасте от трех до пяти месяцев, окрашивание скелетных мышц гематином и эоином не выявило увеличения количества волокон с центральным ядром по сравнению с контрольными аналогами без стимуляции. Это говорит о том, что применение NMES не инициирует каскад регенерации дегенеративной регенерации.

Иммуногистохимия CD 31 в качестве маркера эндотелиальных клеток показывает, что по сравнению с контрольными мышами, которые не получали стимуляции, четыре недели NMES привели к значительному ангиогенезу обработанной мышцы. На этом рисунке показана увеличенная пиковая титаническая сила мышц, обработанных NMES, по сравнению с контрольными необработанными мышцами. После того, как вы освоите эту технику, выполнение протокола должно занимать примерно 15 минут на каждое животное.

Самая сложная часть этого протокола — найти правильное место для электрода, чтобы вызвать желаемую мышечную реакцию. Спасибо за просмотр. Пожалуйста, не стесняйтесь обращаться в нашу лабораторию, если у вас возникнут какие-либо вопросы.