Развитию облитерирующего бронхиолит в мышиной модели ортотопической трансплантации легких

Общая цель этой процедуры заключается в создании литеративной модели бронхиолита при зеркальной ортотопической трансплантации легких. Это достигается путем предварительного забора донорского легкого у мыши C 57 BL 10. Вторым этапом является подготовка манжеты для бронха, легочной артерии и вены к анастомозу.

Далее подготовленное донорское легкое пересаживается реципиенту C five seven BL six mouse. Заключительным этапом является наблюдение за пересаженной мышью в течение 21 или 28 дней после трансплантации. В конечном счете, гистологический анализ используется для выявления литеративных поражений бронхиолита в трансплантированном легком.

Основное преимущество этой модели по сравнению с зеркальной гетеротопической моделью трансплантации дыхательных путей заключается в том, что современная модель имитирует состояние человека. Как правило, люди, плохо знакомые с этим методом, будут испытывать трудности, потому что высшие структуры у мышей очень хрупкие и более восприимчивы к травмам, потому что масса составляет всего 10-ю часть массы крысы. Поместите мышь-донора в герметичную камеру хранения и введите анестезию с 5% изофтора. Затем с помощью внутривенного катетера 20 калибра интубируйте мышь или Trae, а затем подключите ее к аппарату искусственной вентиляции легких для грызунов.

Поддерживайте анестезию с помощью от одного до 2% изофтора. Убедившись, что мышь полностью обезболена из-за отсутствия реакции на щелчок хвостом и щипки пальцев ног, поместите ее в положение лежа на спине и подготовьте брюшную полость 70% спиртом. Теперь отрежьте ножницами кожу, лежащую над животом, и обнажите мускулатуру живота.

Затем выполните лапарную стернотомию, сначала сделав разрез по средней линии через брюшную стенку, а затем, разрезав поперечно поперек грудины, отодвиньте кишечник и найдите нижнюю полую вену, которая находится чуть ниже печени. Ввести в НПВ гепарин в дозе 100 микролитров на килограмм. Далее потяните вниз серповидную связку печени и разрежьте диафрагму вдоль вентрального причинного прикрепления по направлению к позвоночнику.

Разрежьте грудную стенку с обеих сторон до шеи, чтобы обнажить грудную полость. Разрежьте грудную клетку с обеих сторон, защищая легкое, и удалите тимус. Далее разрежьте внутригрудной НПВ на уровне диафрагмы.

Теперь найдите сердце и иссеките придаток правого предсердия. Затем сделайте поперечный разрез у корня ствола легочной артерии и с помощью разреза промойте легкие двумя миллилитрами охлажденного лактатного рингера и 0,1 миллилитрами гепарина. Обнажите трахею, а затем разрежьте ее вместе с пищеводом.

Теперь остановите вентиляцию на двух третях от конечного приливного раздувания. Вырежьте сердечный длинный блок и храните его на льду. Наложите марлю на иссеченное легкое, чтобы защитить его от света.

Разрежьте легочную связку до легочной вены или пв. Удалите пищевод и аорту, чтобы локализовать приросток. Найдите легочную артерию или па, которая расположена в самом краниальном аспекте ворот и прикрепленного к нему главного бронха.

Осторожно рассеките легочную артерию в сторону от бронха. Теперь изготовьте манжету PA из внутривенного катетера 24 калибра, разрезав ее до 0,5 миллиметра в длину с удлинителем 0,7 миллиметра. Поверхность манжеты плетена из АВ.

Для того чтобы обеспечить поверхность для анастомоза, изготовьте манжету для бронха из материала, аналогичного манжете PA, только с помощью катетера 20 калибра, разрезанного на длину одного миллиметра с удлинением 0,7 миллиметра. Размер манжеты PV варьируется в зависимости от веса мыши-донора. Для мышей весом от 24 до 27 грамм.

Размер манжеты составляет 22 калибра с длиной 0,7 миллиметра и удлинением 0,7 миллиметра для мышей весом от 27 до 32 граммов. Длина одинаковая, но используется катетер 20 калибра. Теперь вставьте манжеты в дистальный отдел хрусталика легочной артерии, легочной вены и бронха, закрепив каждого девятью шелковыми швами.

После того, как манжеты будут правильно прикреплены. Подготовленное донорское легкое заверните в пропитанную лактатом марлю и положите его на лед до момента пересадки. Для подготовки реципиента мышам вводят анестезию и помещают на искусственную вентиляцию легких таким же образом, как это было сделано для донора.

Побрейте левую грудную стенку и приготовьте с 70% спиртом. Начните с того, что сделайте торакотомический разрез в левом третьем межреберье. Расширьте разрез дорсально близко к позвоночнику.

Убедитесь, что операционное поле задрапировано стерильным образом, и поместите зажим микрососудов на левые легочные сосуды и бронхи, прилегающие к сердцу. Легочная артерия может быть визуализирована в краниальной части, легочная вена — на зубчатом конце ворот и бронх между ними. Затем используйте мягкое вытяжение на кровоостанавливателе, чтобы вызвать легкое напряжение на па, ПВ и бронх.

Оставьте прикорневые структуры зажатыми и аккуратно резецируйте левое легкое. Изолируйте легочную артерию, легочную вену и бронх, а затем наложите шов вокруг каждой структуры. Полностью рассеките ПА от его адвентициального влагалища, а затем сделайте небольшой поперечный разрез примерно в одну четвертую окружности сосуда в передней стенке.

Оставив продолжение дорсальной части артерии нетронутым, достаньте донорское легкое, которое обмотайте холодной лактационной тканью, пропитанной ватной марлей, и поместите его в грудную полость. Затем вставьте манжеты в реципиентные па, ПВ и бронх, чтобы создать анастомоз, и перевязайте их наношвами. Далее удалите легкое реципиента.

Затем снимите прикорневый поперечный зажим, который обеспечивает реперфузию и вентиляцию. Поместите пересаженное легкое обратно в грудную клетку реципиента и закройте разрез для торакотомии Используя пять швов, мышь теперь должна восстановиться после анестезии. Бупренорфин можно давать для облегчения боли после того, как мышь придет в сознание.

В этой таблице представлены гистологические показатели острого отторжения и распространенности литеративного бронхиолита или ОВ. Оценка острого отторжения после трансплантации называется оценкой А. Комбинации аллотрансплантатов демонстрируют значительно более острую или хроническую патологию отторжения по сравнению с ISO-трансплантатом. Кроме того, распространенность литеративного бронхиолита была значительно выше в комбинациях аллотрансплантатов, чем в трансплантате ISO на 21 и 28 день после трансплантации.

Здесь представлены макроданные и гистопатология через 28 дней после трансплантации легких. Эти изображения представляют собой макроданные и окрашенное H и E легкое с помощью трансплантата ISO, а также правое наивное легкое. На этих изображениях представлены h, e и masen trireme окрашенный аллотрансплантат легких BL 10, трансплантированный реципиенту BL six у мышей, у которых развились OB и non OB соответственно.

Белая стрелка в одной букве «В» идентифицирует поражения OB. На этой панели показан аллотрансплантат легкого BL six, трансплантированный реципиенту мыши BL 10 после освоения. Эту технику можно выполнить почти за полчаса, если она выполнена правильно.

Полезность этого метода заключается в том, что он может быть использован для ответа на механистические вопросы, касающиеся первичной дисфункции трансплантата, острого отторжения и абляционного бронхиолита после трансплантации легких.