21 декабря 2012 г.
Потеря целостности перитонеального предоставляет новую парадигму для понимания и лечения хронических тазовых болей у женщин с легкой формой эндометриоза и могут быть легко обнаружены с помощью интраоперационной закапывания красителя во время лапароскопии.
Общая цель следующего эксперимента — предоставить специалистам, лечащим женщин с тазовой болью, простой метод выявления наличия и степени распространения малозаметного эндометриоза. Это достигается путем первоначального осмотра видимых очагов эндометриоза для выявления явных проявлений заболевания. На втором этапе применяется краситель метиленовый синий, который позволяет обнаружить области малозаметного эндометриоза, которые могли быть пропущены при обычной лапароскопии.
Затем все области, окрашенные в синий цвет, иссекают, чтобы полностью избавить пациентку от заболевания. Результаты сканирующей электронной микроскопии показывают, что данный подход позволяет удалить невидимый эндометриоз, поражающий подлежащие клетки брюшины; это, в свою очередь, предотвращает доступ менструальной или овуляторной крови к сенсорным нервам, иннервирующим таз и вызывающим боль. Значимость данного метода распространяется как на диагностику, так и на лечение эндометриоза, поскольку он позволяет выявить малозаметный и даже невидимый эндометриоз, который может нарушать целостность поверхности брюшины и обеспечивать контакт крови с нервами, расположенными под тканями, что объясняет боль, которую испытывают такие пациентки.
В норме при овуляции или менструации некоторое количество крови попадает в полость таза. Облицовка таза и брюшной полости представлена непрерывным слоем мезотелия, который препятствует взаимодействию этой крови или содержащихся в ней болевых факторов с чувствительными нервными волокнами. У женщин с эндометриозом воспалительные эндометриоидные клетки могут приводить к потере межклеточных контактов клеток перитонеума, что открывает крови доступ к подлежащим тканям и нервным волокнам.
Эти промежутки между мезотелиальными клетками можно обнаружить с помощью сканирующей электронной микроскопии; они также являются причиной того, что синий краситель окрашивает нижележащие ткани в определенных областях. I. Женщинам, страдающим хронической тазовой болью, сначала проводят опрос для выяснения медицинского анамнеза и подробностей, касающихся локализации боли и ее связи с менструальным циклом; фиксируются и записываются сопутствующие симптомы, включая жалобы на раздраженный кишечник или нарушения мочеиспускания. Кроме того, после отбора пациентов каждому из них проводится физикальный осмотр.
Обязательно получите согласие женщин, переносящих лапароскопию, на возможную резекцию очагов эндометриоза и использование их тканей в исследовательских целях. Выполните лапароскопию с использованием стандартных методик через пупочный порт диаметром 5 мм и дополнительные порты диаметром 5 мм в нижней части живота. Тщательно осмотрите органы малого таза, чтобы сопоставить любые обнаруженные признаки эндометриоза с предоперационной локализацией боли, указанной пациенткой.
Затем разведите краситель метиленовый синий в стерильном физиологическом растворе в пропорции 1:200 и с помощью аспирационной иглы введите раствор на поверхности малого таза. После этого проведите вакуумную ирригацию, чтобы удалить излишки красителя и промыть поверхности брюшины. Снова тщательно осмотрите полость таза и зафиксируйте все области накопления синего красителя.
По возможности проведите резекцию пораженных участков брюшины. После завершения резекции осмотрите полость таза, чтобы убедиться в отсутствии кровотечения. Затем выпустите газ CO2, извлеките инструменты и закройте разрезы с помощью тканевого клея.
После одного часа отдыха в палате восстановления пациенту разрешается отправиться домой. Чтобы задокументировать скрытый эндометриоз с помощью сканирующей электронной микроскопии, сначала пришейте срезы брюшины к стерильной подушечке Telfa, чтобы расправить образец и сохранить ориентацию внутрибрюшинной стороной вверх. Затем поместите срезы в фиксатор на основе глутаральдегида для СЭМ. После надлежащей фиксации образцы могут быть подготовлены для сканирующей электронной микроскопии в другом случае с предшествующей резекцией эндометриоза мочевого пузыря, у которого больше нет болей в этой области.
Краситель не окрасил поверхности брюшины, что подтверждает связь между корреляцией окрашивания синим красителем и наличием тазовой боли. Данное изображение поверхности брюшины было получено у женщины с хронической тазовой болью и жалобами на работу мочевого пузыря, которые усиливались во время менструации. Лапароскопический снимок был сделан до применения синего красителя, и только отражение лапароскопического света выявило области, подозрительные на явные очаги эндометриоза, на что указывают стрелки; на снимке, сделанном в той же области, видно, что синий краситель, нанесенный на мочевой пузырь, окрасил отдельные участки брюшины.
На этом изображении показана резекция брюшины, покрывающей мочевой пузырь, а на этом изображении — клетки из данной области, visualized с помощью сканирующей электронной микроскопии. Образец был подготовлен в соответствии со стандартными процедурами и напылен сплавом золота и платины до толщины 20 nanometers. Видно, что брюшина покрыта клетками, которые, предположительно, являются очагами эндометриоза, а в межклеточных контактах мезотелиальных клеток брюшины имеются зазоры, обнажающие подлежащий внеклеточный матрикс.
В то же время это изображение, полученное с помощью сканирующего электронного микроскопа из образца нормального брюшинного покрова, подготовленного аналогичным образом, показывает, что эпителиальные клетки нормальной брюшины тесно соединены. Как видите, это довольно простой метод, который можно использовать при проведении лапароскопических процедур, чтобы помочь выявить скрытый и невидимый эндометриоз, вызывающий проницаемость поверхностей брюшины. Резецируя весь очаг поражения вместе со всеми эндометриоидными клетками, вы обеспечиваете пациенту наилучший шанс на избавление от боли.
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео
В данном исследовании представлен метод обнаружения скрытого эндометриоза у женщин с хронической тазовой болью. Использование красителя метиленового синего во время лапароскопии позволяет врачам выявлять и иссекать очаги эндометриоза, которые могут быть не видны при использовании стандартных методов.
В данном исследовании представлена методика на основе красителя метиленового синего для выявления скрытого эндометриоза во время лапароскопии, что позволяет восполнить важный диагностический пробел при обследовании женщин с хронической тазовой болью. Обеспечивая визуализацию и резекцию участков с нарушением целостности брюшины, данный метод способствует снижению неопределенности в изучении механизмов эндометриоза и может улучшить валидацию мишеней в исследованиях путей передачи болевых импульсов. Предложенный подход представляет собой воспроизводимый и простой в исполнении инструмент для доклинических моделей, изучающих взаимодействие между брюшиной и нервными волокнами при тазовой боли.
Данный метод вписывается в континуум исследований эндометриоза: от раннего этапа поиска (проверка гипотез посредством поглощения красителя) до доклинической валидации (ультраструктурное подтверждение) и терапевтического вмешательства (резекция), что способствует итеративному снижению рисков при выборе мишеней.