Передача вирусов растений Использование Белокрылки

Общая цель данного эксперимента заключается в передаче вирусов растений с помощью белых мух. Это достигается за счет создания и поддержания колонии белых мух, которые еженедельно поставляют вновь появившихся взрослых белых мух, не зараженных другими потенциальными переносчиками и патогенами. Колонии поддерживаются путем регулярного добавления белых мух к молодым растениям, свободным от насекомых, из которых образуются новые взрослые особи.

Через 17-20 дней каждую неделю вновь появившиеся взрослые особи могут быть переведены на испытательные заводы для приобретения или передачи вируса. Как правило, достигается эффективность почти 100%, а скорость передачи обычно начинается с низкого уровня и растет при систематической оптимизации. Наиболее сложным аспектом использования белых мух для инокуляции вирусов является выращивание белых мух таким образом, чтобы исключить нежелательные патогены и насекомых.

Патогены, особенно корневые гниющие грибы и фитофтороз листьев, снижают качество растений-хозяев вируса. Нежелательные насекомые, такие как бережливые, могут подавлять размножение белокрылки, а также ставить под угрозу качество растения-хозяина вируса. Демонстрировать процедуры будет Хизер Капа Бьянко, техник из моей лаборатории.

Колонии белокрылки должны содержаться в чистом и контролируемом помещении для выращивания. Контроль относительной влажности, температуры, фотопериода и интенсивности света имеет важное значение для колонии, которая развивается от яйца до взрослой особи за 18 дней, используйте следующие настройки. Температура должна быть установлена в диапазоне от 26 до 30 градусов по Цельсию, а относительная влажность в идеале должна быть в пределах от 30 до 50%. Если относительная влажность превышает 70%, грибковые патогены насекомых и растений могут стать проблемой.

Идеальный период фотосъемки – 14 часов. Интенсивность света должна быть довольно высокой, а люминесцентные лампы VHO могут производить от 800 до 1000 футовых свечей в кронах растения. Нормы удобрений и полив также должны быть снижены, чтобы препятствовать грибковым патогенам, а также накоплению соли

Хорошие результаты были получены при использовании органзы органа плюс алюминиевый скрининг, а также скрининг белого цвета вида растения является важным фактором. Во-первых, он должен быть быстрорастущим, но при этом не зарастать камерой. Во-вторых, растение должно быть достаточно сильным, чтобы поддерживать высокую популяцию насекомых без разрушения.

По этим причинам карликовые или кустовые сорта являются хорошим выбором растений. В-третьих, растение должно быть либо способным быть хозяином, либо неспособным принимать используемый вирус в зависимости от типа выращиваемой колонии. Поскольку колония может разрушиться из-за клещей, ТГП, диких белых мух или других инвазивных насекомых, выбранные сорта должны быть выращены в защищенной среде, чтобы исключить других насекомых.

Первые белые мухи новой колонии должны быть свободны от вирусов растений, других насекомых и патогенов насекомых. Если в поле собраны белые мухи, выращивайте их не менее восьми недель на растениях, которые в течение этого времени не являются носителями вируса, проверьте отсутствие симптомов у растений. Как только чистые белые мухи будут получены, введите от 20 до 100 в клетку с растениями путем аспирации или осторожного встряхивания их с другого исходного растения.

Каждую неделю необходимо устанавливать новую клетку. В течение первых трех недель используйте белокрылок на растениях, не содержащих ST, чтобы установить новую клетку. Начиная с четвертой недели, используйте молодых взрослых белокрылок из трехнедельной клетки, чтобы установить следующую клетку.

В течение первой недели в клетке белокрылки откладывают яйца на нижней стороне листовой поверхности растений. На второй неделе станут заметны неполовозрелые белые мухи, а некоторые взрослые особи останутся еще живы. На третьей неделе появится много новых взрослых белокрылок, и должно произойти очень заметное увеличение популяции взрослой белокрылки.

Эти белокрылки могут быть использованы для экспериментов по передаче. На четвертой неделе недельных взрослых особей следует перевести в новую клетку. Старая клетка должна быть удалена, а ее растения выброшены. Точный.

Бережный перенос белых мух осуществляется с помощью аспирационного устройства, а флаконы для сбора никогда не аспирируются. Белые мухи, которые питаются растениями во время кормления белых стилей, внедряются в растение и обламываются, если их оторвать от растения. Сделав белокрылку бесполезной для сбора белых мушек в одну руку, другой рукой держите желтый пластиковый ограждение внутри клетки колонии.

Осторожно постукивайте по растениям, чтобы побудить взрослых белых мух взлететь. Белые мухи будут привлечены к желтой карточке, где их можно собрать. С помощью аспиратора и очень щадящего отсоса добавьте не более 20 белых мушек в каждый флакон для сбора.

Затем постучите по флакону, чтобы дезориентировать мух, и закройте флакон парамом. Чтобы обеспечить успешную передачу вируса, попробуйте взять от 15 до 40 молодых взрослых особей с зараженных вирусом растений на здоровые растения, в зависимости от вируса и растения-хозяина. Другие протоколы, такие как резистентный скрининг, требуют большего количества стартовых популяций.

В этом случае встряхните зараженные вирусом растения, которые заражены белыми мухами над растениями, которые необходимо привить. После того, как белые мухи будут размещены на зараженном вирусом растении, дайте им питаться в течение 48-72 часов, чтобы они могли приобрести постоянно передаваемые вирусы. Большее время, как правило, не увеличивает скорость передачи вирусов, передаваемых непостоянным или неустойчивым способом.

Более короткий период доступа к сбору данных от часа до одного дня будет достаточным для экспериментов, требующих получения данных из определенных листьев. Можно использовать клетки с зажимами, установите клетку так, чтобы нижняя сторона листьев была доступна, и не используйте более 10 самок белых мух на клетку диаметром 2,5 сантиметра, иначе скорость пропускания упадет из-за скученности. Для прививки растений подбирайте подходящую клетку с учетом количества растений.

Одному растению, например, нужна всего лишь маленькая клетка, чуть больше ее самой, для нескольких заводов выберите между меньшей трубкой из ПВХ, каркасной клеткой или большей алюминиевой рамной клеткой. Чем меньше пространство вокруг полога растения, тем лучше. После того, как белые мухи добавлены в новое растение, количество времени, необходимое для прививки, зависит от вируса и растения-хозяина.

Как и в случае с приобретением, количество времени, необходимое для передачи, зависит от способа передачи. Непостоянная передача требует гораздо более короткого времени доступа, чем полупостоянная или постоянная передача. Убедитесь, что белокрылки прощупывают или кормятся во время периода доступа к инокуляции.

Откройте клетку и исследуйте нижнюю сторону листьев на каждом растении. Для более длительной прививки. Периоды доступа периодически осторожно тревожьте растения, чтобы стимулировать их перераспределение на растениях.

Это увеличит скорость передачи инфекции за счет противодействия естественной склонности белых мух к накоплению в конце периода вакцинации. Убейте белых мух с помощью двух инсектицидов, наносимых один за другим. Сначала нанесите контактный инсектицид для быстрого уничтожения взрослых белых мух, такой как инсектицидное мыло.

Во-вторых, примените системный инсектицид, чтобы уничтожить любых белых мух, которые развиваются в последующие недели. И любые оставшиеся взрослые особи выделяют, арид или пиразин являются эффективным выбором. Используя эти процедуры, можно в рутинной форме получать скорость передачи вируса на уровне 100%.Такие высокие показатели передачи имеют важное значение при скрининге тестовых установок на устойчивость к вирусам и желательны при оценке эффективности химических соединений на предмет их способности препятствовать передаче вируса.

После просмотра этого видео у вас должно сложиться хорошее представление о том, как разводить белокрылок и использовать их для передачи вирусов растений. Эти процедуры могут быть использованы в исследовательских целях или для коммерческой разработки устойчивых к вирусам растений, или для тестирования соединений на их способность препятствовать передаче вирусов.