Выделение, характеристика и сравнительный Дифференциация по правам зубных стволовых клеток, полученных из целлюлозы постоянных зубов с помощью двух различных методов

Общая цель этой процедуры заключается в выделении, характеристике и дифференцировке нееврейских пульсовых стволовых клеток человека из постоянных зубов с помощью двух методов. Это достигается путем сбора здоровых ретинированных зубов мудрости, разрезания их вокруг цемента в месте соединения эмали. Стоматологические полистволовые клетки D PSC выделяют двумя различными методами.

В первом методе ткани полипов ферментативно расщепляются путем инкубации в коллагеназе первого типа плюс раствор дискового пространства. Здесь мы называем их ed. При использовании метода изоляции во втором методе пальповые ткани помещаются в колбу только без какого-либо переваривания.

Таким образом, дпсс начинают мигрировать из ткани в колбу. Эти клетки, названные ОГ, относятся к методу изоляции выростов. Вторым этапом процедуры является идентификация стволовых клеток с помощью осенней цитометрии.

Третьим этапом процедуры является индукция дифференцировки одонтобластов, а заключительным этапом процедуры является сравнительная оценка дифференцировки одонтобластов между двумя группами по красному окрашиванию и QBCR. Я Р.А. Кде из отдела стволовых клеток и биологии развития в Институте Риана. Сегодня я покажу вам изоляцию, характеристику и сравнительную дифференцировку мезенхимальных стволовых клеток человека с использованием двух методов.

Здравствуйте, я доктор Резаян из Института Рио. Мы работаем над проектом, связанным со стволовыми клетками пульпы зуба человека. Эти клетки являются своего рода мехи-стволовыми клетками, которые легко получить с минимальными болевыми ощущениями и заболеваемостью.

Мехи-стволовые клетки характеризуются пластической аранической способностью, образованием колоний, способностью к множественной дифференцировке. Здравствуйте, я доктор Ами из отделения стволовых клеток. В институте мы используем эту процедуру в нашей лаборатории для выделения стволовых клеток с целью научных исследований и будущего применения.

В регенеративной медицине самым первым шагом для использования этого источника стволовых клеток для будущей терапии на основе стволовых клеток является выбор наилучшего протокола выделения стволовых клеток из тканей человеческой части. Для достижения этой цели крайне важно исследовать определенные аспекты клеточного поведения в различных условиях выделения стволовых клеток. Во-первых, я собираюсь изолировать стволовые клетки пульпы зуба человека с помощью ферментативной диссоциации пульпы или роста стволовых клеток из тканевых имплантатов.

Затем охарактеризуйте и дифференцируйте их по огенному взрыву. Итак, приступим. Во-первых, спейс и коллагеназа первого типа растворяют оба в PBS.

Затем отфильтруйте их с помощью шприцевого фильтра ох 0,2 микрона. Вытяните оба в коническую трубку. Затем добавьте пенер и PBS для достижения окончательной концентрации.

Перенесите здоровые зубы мудрости в лабораторию в холодной основной среде в стальном состоянии. Перед исследованием поверхность зуба очистить на 70% этанолом. Обязательно уберите ветерок с поверхности зуба.

Разрежьте зуб вокруг соединения цементной эмали с помощью стерилизованного зубного диска, чтобы выявить пульповую камеру. Следует учитывать, что процесс резки должен выполняться медленно, чтобы уменьшить перегрев зубной ткани. Затем аккуратно отделите пульповую ткань от коронки пульпы на одно-два миллиметровых кусочка с помощью лезвия Скарпы.

Переносите небольшие кусочки тканей пульпы в один миллилитр раствора фермента на один час при температуре 37 градусов Цельсия каждые 30 минут, чтобы помочь разрушить ткани пульпы. После этого удалите крупные агрегаты, пропустив их через штамм клеток размером 70 микрон. Затем добавьте PBS, содержащие центрифуги PENER, при 1, 200 об/мин в течение пяти минут.

Аккуратно снимите надат. Затем подвешиваем пластину в пролиферативной среде pm, перекладываем ее в колбу для культуры и добавляем среду. Затем инкубируют инкубированные.

Меняйте среду каждые три дня до тех пор, пока не будет достигнуто слияние клеток для метода аутворка. Повторите процесс резки. После разрезания зубное средство выдавливает ткани на один-два миллиметровых фрагмента.

Затем поместите их в культуру. Вспышка с пролиферацией, средняя и инкубированная. Следует учитывать, что общий объем пролиферирующей среды должен поддерживать прикрепление всех частей для дальнейшего разрастания клеток.

Меняйте среду после наблюдения за разрастанием, а затем каждые три дня до тех пор, пока не будет достигнуто слияние клеток. Для иммунофенотипирования инкубируйте оба типа D-ПСК с конъюгированными антителами PE или FITC в течение 30 минут при четырех градусах Цельсия в темноте. Затем добавьте PBS и centi views на 1 200 об/мин в течение пяти минут.

Удалите надосадочную жидкость и резонатор, подвесьте планшет в PBS и, наконец, оцените поверхностные маркеры с помощью проточной цитометрической субкультуры, оба типа DPC для трех пассажей. Затем трипсин лед и переложите их в шесть блюд с красной культурой при беглости 60% Co, замените PM на одонтогенную среду. Три скважины остаются в качестве отрицательного контроля путем добавления ПМ.

Меняйте среду каждые три дня на 21-й день промойте ячейки PBS. Затем фиксируют их по одному миллилитру на лунку. 10%формальная высота геля в течение 15 минут при домашней температуре.

Через 15 минут аккуратно снимите фиксатор и трижды обмотайте элементы дистиллированной водой. Затем замените воду на один миллилитр на красную альзу в растворе красного морилки. Через 20 минут удаляем излишки красителя и четыре раза промываем ячейки деионизированной водой.

Затем добавьте по одному миллиметру в каждый колодец воды, чтобы клетки не высохли. После окрашивания вы можете увидеть, как три верхние рельса становятся красными по сравнению с контрольными группами под микроскопом, вы можете увидеть поглощение цвета пятна вокруг клетки при большом увеличении для количественной оценки красного окрашивания. После удаления воды добавьте по одному миллилитру на лунку, 10%-ную кислотную кислоту, затем выдержайте в течение 30 минут с встряхиванием.

Затем аккуратно соскребите клетки с пластины с помощью скребка для клеток. Затем переложите их в отдельные пробирки. VOR принимает энергично в течение 30 секунд.

Затем нагрейте их до 85 градусов Цельсия в течение 10 минут. Чтобы избежать испарительного уплотнения трубок с передаточной трубкой ParaView в лед в течение пяти минут, они использовали их при давлении 20 000 G в течение 15 минут. Между тем, сделать красный Альцгеймера стандартным серийным разведением в соответствии с региональным протоколом.

После центрифугирования извлеките снэт и переложите их в новые пробирки. Нейтрализуйте pH с помощью 10% гидроцита аммония. Затем добавьте стандарты, а также сэмплы в 96.

Затем измерьте поглощение на 405 нанометрах и проанализируйте данные в соответствии со стандартным последовательным разбавлением. Здесь можно увидеть ДПК, которые выделяются путем ферментативной диссоциации на 10, 15 и 18 день, а также перерастают ДПК на пятый, 10, 13 и 18 день. Результаты иммунофенотипирования показывают наличие маркеров мезенхимальных стволовых клеток, таких как CD 44, CD 73 и CD 19, и отсутствие гемопоэтических и эндотелиальных маркеров, таких как CD 34, CD 45 и CD 11 B. Интересно, что экспрессия CD 1 0 5 и CD 146 больше у переросших d ПСК по сравнению с D-P-S-C-E-D, количественное определение окрашивания фермента красным на 21-е сутки дифференцировки одонтобластов показало большее отложение кальция в D-P-S-C-E-D по сравнению с стволовыми клетками без кондентальной верхушки.

Результаты КПЦР также указывают на значительно более высокую экспрессию MEP и A LP в качестве маркеров минерализации в D-P-S-C-D по сравнению с исходящими стволовыми клетками. Между тем, оба гена регулируются во время дифференцировки, а также экспрессии DSPP, поскольку одонтогенный маркер увеличивается во время дифференцировки. Тем не менее, не существует существенных различий в экспрессии DSVP в дифференцированных клетках между группами ЭД и ОГ.

Мы только что показали вам, как выделить стволовые клетки частей зубов человека с помощью ферментативной диссоциации пульпы или роста стволовых клеток из ткани. Вот и все. Желаю вам удачи в том, чтобы попробовать использовать эту процедуру в своем эксперименте.

Спасибо.