Интраназального введения ЦНС терапии, чтобы Awake Мыши

Общая цель этой процедуры заключается в том, чтобы нацелить лекарства на центральную нервную систему с помощью интраназальной доставки у мышей без анестезии. Это достигается путем предварительной адаптации мыши к обращению. Вторым шагом является использование модифицированной загривочной рукоятки для обездвиживания головы животного.

Далее капли препарата вводят интраназально с помощью пипетки. На последнем этапе мышь возвращается в клетку с наградой. Основные преимущества этого метода заключаются в том, что интраназальное введение нацелено на центральную нервную систему без системного воздействия, а интраназальное введение лекарств в сознании позволяет проводить хроническое лечение мышей без анестезии.

Этот метод может быть использован для ответа на ключевые вопросы в разработке препаратов для лечения неврологических заболеваний. Как правило, люди, плохо знакомые с этим методом, испытывают трудности, потому что трудно надежно удерживать рот, чтобы предотвратить движение головы. Визуальная демонстрация этого метода имеет решающее значение, так как расположение пальцев для правильного захвата является ключевым моментом и его трудно объяснить с помощью текста и фотографий За две-четыре недели до интраназального введения приучите мышей к обращению, выполняя следующие шаги в течение двух-трех дней, каждый из которых подтверждает, что мышь не проявляет признаков стресса, прежде чем перейти к следующему шагу.

Для первого шага аккламации поместите мышь в ладонь на период две-три минуты. Не более чем на одну ногу над клеткой. Затем поместите мышь на ладонь на три минуты и осторожно погладьте животное от головы до хвоста, позволяя животному свободно двигаться.

Как только животное начнет терпеть ласку, положите мышь на ладонь на три минуты, а затем с помощью большого и указательного пальцев слегка сожмите кожу на задней части шеи животного. Для следующего шага акклиматизации поднимите мышь за загривок на 30 секунд. Затем дайте животному отдохнуть на крыше клетки еще 30 секунд, прежде чем повторить удержание снова.

Теперь потренируйтесь в интраназальном захвате, сначала используя большой и указательный пальцы доминирующей руки, чтобы держать мышь за хвост. Затем средним безымянным пальцем и мизинцем слегка приколите нижнюю часть тела животного к клетке. Пусть мышь ухватится за брусья, слегка вытягивая животное, чтобы лучше ухватиться за загривок.

Используя большой и средний пальцы на недоминирующей руке, продолжайте крепко щипать мышь за загривок за шеей и плечами, подтягивая рыхлую кожу верхней части спины, чтобы сделать палатку поперек лопаток. Затем быстро положите указательный палец недоминантной руки на голову мыши как можно ближе к носу и потяните за кожу. В то же время проведите большим и средним пальцами по направлению к голове для оптимального положения.

В идеале мышь не должна иметь возможности двигать головой по вертикали или горизонтали. Во время следующего сеанса выполните интраназальный захват, как показано выше. На этот раз животное переворачивается так, чтобы его брюшная сторона была обращена к потолку, а шея была параллельна полу.

Как только мышь освоится с перевернутым интраназальным захватом, потренируйтесь на короткое время поместить микропипетку с пустым кончиком рядом с каждой ноздрей. Наконец, введите шесть микролитров физиологического раствора, сначала только в одну нору, а затем на следующем сеансе в обе фазы, используя процедуру интраназальной доставки лекарств, более полно продемонстрированную в следующем разделе перед началом интраназальной доставки лекарства. Во-первых, расположите клетки и дозаторы так, чтобы они были легко доступны.

Затем выньте первую мышь из клетки и используйте только что продемонстрированный интраназальный захват, чтобы взять животное. Далее с помощью доминирующей руки загрузите в микропипетку шесть микролитров препарата. Поместите кончик наполненной пипетки рядом с левой ноздрей мыши под углом 45 градусов.

Затем медленно вытолкните препарат с образованием небольшой капли примерно с половиной объема на кончике, поместите каплю достаточно близко к ноздре мыши, чтобы мышь могла вдохнуть ее сразу после того, как мышь вдохнет каплю, вытолкните оставшуюся часть препарата в наконечник пипетки, чтобы образовать еще одну маленькую каплю, которую мышь сможет вдыхать через ту же ноздрю примерно через две-три секунды, Удерживайте мышь в таком положении в течение 15 секунд, а затем введите препарат в правую ноздрю таким же образом. Теперь поместите мышь обратно на верхнюю часть клетки на две минуты, а затем снова подайте препарат в обе ноздри, как только что было продемонстрировано ровно через две минуты после введения в первую ноздрю, чтобы ввести одну или две мыши одновременно. Эту схему отбора проб можно следовать после того, как мышь получит полную дозу препарата.

Верните животное в клетку. После каждой акклиматизации или интраназального сеанса дозирования мышам следует давать лакомство, такое как cheerio, в качестве положительного подкрепления для снижения стресса, всегда восстанавливать гнезда в исходное состояние перед возвращением животных в клетки, менять перчатки между клетками при дозировании животных, содержащихся в группе, чтобы не переносить запах из клетки в клетку, что вызовет агрессивное поведение соседа по клетке. После освоения один человек может интраназально вводить препарат от 15 до 20 мышей в течение одного часа.

Важно принять меры предосторожности, чтобы мыши случайно не поменяли клетки. После просмотра этого видео у вас должно сложиться хорошее понимание того, как использовать интраназальное доставочивание у мышей без анестезии. Для нацеливания лекарственных препаратов на центральную нервную систему.

Не забывайте всегда принимать меры предосторожности при работе с мышами, такие как ношение маски N95 и перчаток для предотвращения контакта с аллергенами.