Производство дисульфид-стабилизировались трансмембранного пептидные комплексы для структурных исследований

В соответствии с этим протоколом создаются ковалентно стабилизированные комплексы трансмембранных пептидов для структурных исследований, направленных на понимание того, как мембранные белки взаимодействуют друг с другом через свои липидные домены. Во-первых, экспрессируйте помеченный hist гибридный белок, содержащий трансмембранную последовательность, представляющую интерес у кишечной палочки. Затем извлеките белок из фракции тела включения с помощью гины и моющего средства с использованием матрицы сродства к никелю.

Концентрируйте меченый фьюжн белок и дисульфид сшивайте его до диаметральной формы, промывая колонку в растворе, содержащем окислители. Затем элюируют сшитый гибридный белок в уксусной кислоте Tri Fluor и обрабатывают бромистым цианогеном для высвобождения партнера по слиянию, а затем выделяют продукт сшитого пептида из смеси для расщепления с помощью ВЭЖХ в обращенной фазе. В конечном счете, идентичность и чистота продуктов проверяются с помощью SDS page и масс-спектрометрического анализа.