Ангиогенеза в ишемизированных легких крысы

Общей целью этой процедуры является перевязка левой легочной артерии. Это достигается путем предварительной интубации и вентиляции крысы под наркозом. Далее проводится торакотомия и перевязывается левая легочная артерия.

После перевязки грудная клетка закрывается, и крысе дают восстановиться. В конечном счете, степень неоваскуляризации в левом легком может быть оценена путем измерения уровня флуоресценции в ткани или с помощью других гистологических методов. Основное преимущество данной методики заключается в том, что она дает возможность изучить in vivo развитие и неоваскуляризацию бронхиального кровообращения в легких.

Это дает возможность изучить сложную 3D-структуру этой новой сосудистой сети в вентиляционном легком. Это сильно отличается от того, что в настоящее время делают большинство исследователей, которые проводят исследования in vitro, изучающие пролиферацию эндотелиальных клеток и хемотаксис или формирование трубок. Как правило, люди, плохо знакомые с этой процедурой, испытывают трудности с попытками сделать расслоение между левой легочной артерией и левым бронхом.

Единственный совет, который я могу дать, — это практиковаться, быть терпеливым и часто просматривать это видео, чтобы увидеть, есть ли незначительные корректировки в хирургическом подходе. Эту процедуру демонстрирует Джон Дженкинс, техник из моей лаборатории. Для начала поместите крысу под наркозом на операционную доску и прикрепите носовой конус для продолжения анестезии, интубируйте животное с помощью пластикового катетера и подключите крысу к аппарату искусственной вентиляции легких.

После нанесения мази на глаза положите крысу на правый бок и прикрепите придатки скотчем. Удалите волосы над областью операции и подготовьте кожу с помощью повторных скрабов бетадина и спирта. Когда все будет готово, сделайте поперечный разрез через кожу.

Затем затупляйте, рассекайте через слои жира и ткани, чтобы открыть грудную клетку. После обнажения определите третье межреберье и с помощью щипцов сделайте тупой разрез между третьим и четвертым ребром. Вставьте разделители ребер в отверстие и осторожно раскройте ребра, пока не станет видно легкое.

Закрепите отверстие. Сначала правой рукой переместите левое легкое назад. Затем прямыми щипцами захватите левую легочную артерию и дыхательные пути левой.

Левая легочная артерия должна лежать сверху дыхательных путей, а щипцы должны быть перпендикулярны столу. После выравнивания правильно используйте резные щипцы, чтобы отделить артерию от левого главного стволового бронха на их естественных границах. Эта разделительная линия кажется тонкой и белой между двумя отдельными структурами.

Будьте осторожны, чтобы не пройти через судно. Сдвиньте кончики щипцов вдоль разделителя. Продолжайте в том же духе до тех пор, пока левая легочная артерия не ляжет на изгиб щипцов.

Левой рукой аккуратно отпустите прямые щипцы и возьмитесь за кусок предварительно разрезанного шва. Откройте изогнутые щипцы, удерживая артерию настолько, чтобы захватить шов. Аккуратно протяните шов вверх относительно изгиба щипцов.

После этого затяните шов, чтобы окклюзировать левую легочную артерию, и отрежьте все оставшиеся швы, удерживая их вместе щипцами. Зашиваем ребра. Следите за тем, чтобы кожа не зашивалась неплотно.

Завяжите квадратный узел, который впоследствии закроет ребра. Гипернадуйте легкое, кратковременно окклюзируя линию выдоха аппарата ИВЛ, а затем затяните шов. Закрепите шов, завязав еще один полный узел, прежде чем отрезать концы.

Снимите давление в конце выдоха и понаблюдайте в течение 30 секунд, чтобы убедиться, что легкие не разрушились. Наконец, нанесите пять капель. Бупивакаином, закройте кожу тканевым клеем.

Выключите газообразный фтор, но продолжайте проветривать крысу в течение одной-двух минут на комнатном воздухе до тех пор, пока спонтанное дыхание не вернется в равновесное состояние. Затем отсоедините трахеальную трубку от аппарата искусственной вентиляции легких и убедитесь, что крыса дышит спонтанно, прежде чем снимать ее. Периодически вводите местный анальгетик в течение следующих 24 часов.

Наконец, сотрите мазь с глаз и наблюдайте за животным до тех пор, пока оно не выздоровеет в нужное время. В точки после ишемии могут вводиться меченые микросферы. Для оценки величины бронхиальной перфузии используется инфузионный насос небольшого объема, который доставляет меченые микросферы в левую сонную артерию с постоянной скоростью.

Подсоедините катетер к тупой игле 25 калибра и четырехпозиционному запорному крану. Для начала следует следовать за хирургическими препаратами, продемонстрированными ранее. Когда будете готовы, сделайте надрез по средней линии вдоль шеи тупой.

Рассеките ткань, чтобы выявить трахею и левую сонную артерию. После выделения двух швов под сонной артерией плотно завяжите проксимальный шов. Далее сделайте небольшой разрез в артерии и вставьте катетер, наполненный физиологическим раствором.

Закрепите его на месте с помощью верхнего шва. Этот сосудистый слепок обеспечивает замечательную визуализацию бронхиального ангиогенеза в легких. Через 28 дней после перевязки левой артерии, через три дня после операции, показан участок дыхательных путей из левого легкого.

Обратите внимание на два выступающих бронхиальных сосуда, заполненных эритроцитами, расположенных внутри стенки дыхательных путей. Врезка окрашивается, чтобы показать пролиферирующие эндотелиальные клетки бронхиальной артерии. В этом примере показан разрез левого легкого, сделанный через 14 дней после перевязки.

Обратите внимание на увеличенный размер бронхиальных сосудов в этот момент времени и флуоресценцию иссохшей легочной артерии, используемую для оценки величины системной перфузии, которая практически не была обнаружена в левом легком наивных крыс. Тем не менее, был измерен существенный, значимый и постоянный уровень в левом легком у крыс. Изучали через 14 дней после лигирования После освоения.

Эту технику можно выполнить менее чем за час, если она выполнена правильно. После просмотра этого видео у вас должно сложиться хорошее представление о том, как интубировать крысу, выполнить торакотомию и успешно перевязать легочную артерию. В зависимости от вашей переменной исхода, вы должны быть в состоянии канюлировать левую сонную артерию и вводить меченые микросферы для анализа перфузии.