March 10th, 2013
Новый подход, сочетающий внутриглазного трансплантации и конфокальной микроскопии позволяет продольные, неинвазивные изображений в реальном времени с одноклеточными резолюции в привиты тканей В естественных условиях. Мы показываем, как пересадить панкреатических островков в переднюю камеру глаза мышей.
Здравствуйте, меня зовут Доретта из Института исследований диабета при Медицинской школе Миллера Университета Майами. В этом видео я продемонстрирую, как пересадить проушины поджелудочной железы во внутреннюю камеру мышиного глаза. Процедура включает в себя два этапа.
Первым шагом является загрузка изолированных глазков поджелудочной железы в канюлю, а вторым этапом является сама процедура трансплантации. Для получения подробной информации об инструментах и реагентах обратитесь к сопроводительному тексту. Здесь мы выделяем моторизованный драйвер шприца с установленным шприцем, а также насадки для резервуара и канюли, на которых будет сосредоточено внимание в следующем видео.
Мы начинаем с загрузки люверсов в канюлю. Все процедуры проводятся под стереоскопом. Начните с центрирования люверсов, вращая или вращая блюдо по кругу.
Когда канюля будет отцентрирована, отсоедините ее от резервуара и промойте все пузырьки воздуха, двигая моторизованный драйвер шприца вперед. И это делается путем нажатия на переднюю педаль. Когда все будет готово, начните всасывание проушин в резервуар, одновременно приводя моторизованный драйвер шприца в обратном направлении.
И опять же, это делается путем нажатия на заднюю ножную педаль. Обратите внимание, как люверсы имеют тенденцию скапливаться на дне водоема. Затем снова подсоедините канюлю к резервуару и вытолкните проушины из резервуара.
Затем трубку вставляют в канюлю, чтобы выбить проушины из резервуара и побудить их оставаться упакованными в трубку. Коснитесь резервуара, когда вы ведете моторизованный драйвер шприца вперед. Обратите внимание, насколько плотно расположены проушины в трубке, когда они начинают входить в заднюю часть канюли.
К этому моменту вы должны быть готовы к пересадке люверсов. Поместите мышь размера NS на коврик и обнажите или выдавите глаз, который нужно пересадить, потянув за кожу головы указательным и большим пальцами. Использование новой иглы в качестве скальпеля.
Подходите к глазу скошенным концом вниз, чтобы предотвратить контакт и травмирование радужной оболочки. Проникните кончиком иглы в роговицу и сделайте боковой разрез. Затем введите канюлю, предварительно загруженную веками, во внутреннюю камеру через разрез и начните снова вводить проушины в камеру, двигая моторизованный драйвер шприца вперед.
Не беспокойтесь о пузырьках воздуха, которые могут оказаться внутри канюли, так как позже они рассеются. И они будут действовать как естественный барьер, чтобы свести к минимуму или предотвратить рефлюкс век из камеры. Медленно и осторожно вытяните канюлю из внутренней камеры.
Теперь промойте глаз стерильным PBS. Введите предпочитаемый анальгетик и, наконец, нанесите мазь с офтальмологическим антибиотиком. Пересадка завершена.
Теперь мы показываем репрезентативные результаты с поджелудочными веками, пересаженными во внутреннюю камеру глаза. Для продольной визуализации исследования отдельных глазков на седьмой день. После пересадки люверсы четко приживаются поверх радужной оболочки к 28 дню.
Люверсы находятся в тех же местах, что и ранее, через 42 дня после трансплантации. Люверсы хорошо видны в тех же местах. Также обратите внимание на то, насколько хорошо зажил разрез, исключающий любую возможность вмешательства в визуализацию отдельных глазков.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
Эта статья представляет новый метод трансплантации поджелудочных островков в переднюю камеру глаза мыши с использованием внутриглазной трансплантации и конфокальной микроскопии. Этот подход позволяет проводить лонгитюдное, неинвазивное изображение трансплантированных тканей с разрешением на уровне отдельных клеток in vivo.