Выявление различий в сперме конкурентоспособности на Drosophila

Общая цель данного эксперимента состоит в том, чтобы проверить различия в конкурентоспособности сперматозоидов среди самцов дрозофил, меланогастеров с различными генотипами. Это достигается за счет отслеживания видимых генетических маркеров, которые идентифицируют отцовство потомства от самки, спаривающейся с двумя разными самцами, генотипами в анализе самкам сначала разрешается спариваться с эталонным самцом, а затем разрешается спариваться с экспериментальным самцом. Доля потомства, полученного подопытным самцом, выводится путем изучения окраски глаз потомства.

Полученные результаты косвенно сравнивают конкурентоспособность экспериментальных мужских сперматозоидов по их относительным показателям по сравнению с эталонными мужскими сперматозоидами. Эти методы могут помочь ответить на ключевые вопросы в области генетики и эволюции в биологии, такие как оценка влияния генетического фактора на конкурентоспособность SPR, демонстрируя эту процедуру как у S, так и у магистрантов нашей лаборатории. Следующий протокол иллюстрирует анализ генетического фактора под названием sic, который, предположительно, кодирует белок, участвующий в подвижности сперматозоидов.

Начните с установки от 15 до 20 флаконов в каждый флакон. Слегка посыпьте среду несколькими высушенными активными дрожжевыми гранулами. Для облегчения своего положения.

Всегда используйте свежие питательные среды, такие как дрожжевая среда из кукурузной муки. Затем к каждому флакону добавьте от восьми до 10 самок, но не более, и добавьте пять самцов. Идентификация пола может быть достигнута путем визуального осмотра нескольких морфологических различий.

Храните флаконы при температуре 25 градусов Цельсия и пересаживайте взрослых особей в новые флаконы не реже одного раза в три-пять дней. Переводите взрослых через день для достижения наилучшего результата. Сохраните флаконы с яйцом для сбора потомства.

Количество необходимых флаконов будет зависеть от количества экспериментальных типов самцов в исследовании и предполагаемого количества особей, необходимых для получения статистической мощности. Через четыре или пять дней после того, как родители будут перенесены из флакона, увеличьте доступную поверхность для окукливания во флаконе, вставив в среду многослойную бумагу. Осмотрите флаконы на предмет потемневших куколок, когда они будут видны.

Эти мухи появятся в течение 24 часов, от 11 до 12 дней после того, как крест был впервые установлен. Начните собирать девственных самок и наивных самцов из этих флаконов. Первым делом с утра выбросьте мух, которые появились за ночь.

Затем один-два раза в течение дня с интервалом в четыре-шесть часов соберите мух из флаконов, обезболите мух, введя в флакон углекислый газ. Затем нажмите на мухи и подведите их к стереомикроскопу. Поместите нужных мух в разные флаконы по полу и фенотипу и промаркируйте флаконы соответствующим образом.

Не загружайте во флаконы более 10 флаконов. Девственные самки устанавливают для мух темный цикл от 12 до 12 светлых темных периодов, чтобы регулировать время их окклюзии в свою пользу. Пиковое время окклюзии приходится на один-два часа после субъективного рассвета и за два часа до выключения света.

Существует две версии этого эксперимента. Они называются пробирным анализом нападения и пробирным анализом защиты. В этом разделе описано, как провести пробирный анализ на правонарушение утром первого дня, настроить первую случку с помощью аспиратора.

Аспиратор состоит из куска трубки, прикрепленного к наконечнику пипетки с баррикадой, которая удерживает аспирированных мух в наконечнике. Отверстие наконечника расширено. Для мух устанавливают флаконы, содержащие десять четырех- или пятидневных девственных самок.

С 10 наивными эталонными самцами устанавливали от двух до трех таких флаконов ежедневно в течение пяти дней подряд. Для каждого флакона дайте мухам спариваться в течение двух часов, затем выбросьте эталонных самцов и переложите каждую самку в новую пробирку, используя аспираторную этикетку для каждой пробирки V, и оставьте самку в пробирке на два дня. На третий день установите для каждой самки второе спаривание с наивными самцами другого генотипа.

За два часа до наступления субъективной темноты с помощью аспиратора пересадите самку в новую пробирку с трех-, пяти- или шестидневными подопытными самцами того же генотипа. Промаркируйте флаконы мужским генотипом, а новый флакон V — двумя. Следующее утро – день четвертый.

За два часа до начала полетов субъективные, рассветные отбрасывают самцов, используя аспиратор. На шестой день переложите каждую самку в другой новый флакон с маркировкой V три. На 10-й день отбраковывайте самок на 17-й день.

Осмотрите флаконы V one из потомства. Определите, была ли самка девственницей или нет при спаривании с референс-кольчугом и спаривалась ли она с референс-кольчугом. В тот же день осмотрите потомство из V-двух флаконов, сбивая мух углеродом.

Отсортируйте их по цвету глаз и полу. Затем запишите число потомков, рожденных первым и вторым самцами. В этом эксперименте только потомство женского пола может быть однозначно отнесено к эталонным или экспериментальным самцам.

В других экспериментах для определения отцовства потомства потомства мужского пола также можно использовать различные генетические маркеры. Выбросьте проверенное потомство, но оставьте два флакона V на секунду. Осмотр на 20-й день, записать отцовство потомства из V двух флаконов во второй раз и произвести первый осмотр появившегося потомства из V трех флаконов.

Затем, три дня спустя, на 23-й день, осмотрите появившееся потомство в V 3. Опять же, зарегистрированный подсчет потомства должен быть организован соответствующим образом для легкого визуального осмотра и эффективного анализа с помощью статистического пакета для каждой самки и подсчетов из V 2 и V 3. Чтобы рассчитать общее количество потомства, полученного от эталонного самца и экспериментального самца, рассчитайте P 2 балла для каждой самки как долю потомства, полученного экспериментальным самцом, к потомству как экспериментального, так и контрольного самцов.

Некоторые самки должны быть исключены из анализа. Во-первых, те, у кого не было потомства или потомство было очень ограничено, во-вторых, самки, которые умерли во время процедуры, и третьи самки, которые были успешно осеменены только одним из двух самцов. Ищите статистические различия в значениях P two.

Среди экспериментальных мужских типов используют параметрические или непараметрические тесты, основанные на перекосе распределения значений P two и зависимости между дисперсией и средней пропорцией. Данные обычно не распространяются в обычном виде. Преобразование знака дуги, также известное как угловое преобразование, может быть применено к исходным значениям P за два до T-критерия студента или теста NOVA, или просто использовать непараметрические тесты, такие как эксперименты WIL Coxin two offense с drosophila melanogaster.

Экспериментальные самцы были проведены один с функциональным кластером ESIC и без него. В целом, от 58% до 83% женщин были информативны. Самцы без функционального кластера ESIC показали значительно более низкие баллы P 2 по сравнению с самцами с интактным кластером ESIC.

Это указывает на то, что кластер SIC повышает конкурентоспособность сперматозоидов. После просмотра этого видео у вас должно быть хорошее понимание того, как проводить эксперименты по двойному спариванию, чтобы вы могли обнаружить различия в конкурентоспособности сперматозоидов между мутантными и контрольными самцами.