Генетически-кодированные Молекулярные зонды по изучению G-белком

Общая цель данного эксперимента заключается во введении одного информативного зонда в рецепторы-мишени, сопряженные с G-белком, для облегчения структурных и динамических исследований сигнальных комплексов. Это достигается путем пересечения клеток плазмидами, необходимыми для экспрессии необходимого трансляционного механизма для включения неестественной аминокислоты зето, фенилаланин или зето-фи в экспрессируемый GPCR. Дисперсия платы GPCR zeto может быть применена тремя различными способами для исследования структуры и функции рецептора.

Во-первых, плата зето используется в качестве фотоактивирующего сшивающего агента в GPCR, что позволяет идентифицировать сайт связывания тритированного лиганда. Далее, плата зето может быть использована в качестве реакционноспособной химической ручки для присоединения пептидного конъюгированного или флуоресцентного зонда к GPCR с помощью биоортогонального мечения. Получены результаты, которые показывают использование молекулярного зонда зето-фи в целенаправленном фотосшивании, таргетном мечении эпитопов и флуоресцентном мечении GPCR на основе живых клеточных и биохимических методов. Основным преимуществом этого метода по сравнению с существующими методами, такими как использование фотоаффинных лигандов или цистеиновое мечение, является гибкость при специфическом введении биологически инертной и реактивной неестественной аминокислоты P-зетофенолаланина в известное положение в рецепторе-мишени.