Большеберцовой Перерезка Нерв - стандартную модель для доступа индуцированную денервацией атрофии скелетных мышц у мышей

Общая цель этого видео — продемонстрировать модель транссекции большеберцового нерва при атрофии скелетных мышц у мышей. Это достигается путем выделения седалищного нерва и его трех ветвей: большеберцового, сильного и малоберцового нервов. После изоляции большеберцовый нерв пересекается.

После денервации рану герметизируют и внимательно следят за состоянием животного. В конечном итоге получаются образцы, которые показывают прогрессирующее уменьшение мышечной массы после денервации. Модель транссекции большеберцового нерва при атрофии скелетных мышц, вызванной денервацией, обычно используется в хорошо проверенной модели у крыс, и она имеет гораздо меньшую заболеваемость, чем та, которая связана с рассечением седалищного нерва.

Мы адаптировали эту модель для использования на мышах, что и продемонстрируем здесь. Это позволяет исследователю воспользоваться существованием генетически модифицированных мышей и изучить процесс атрофии мышц в отсутствие белков, которые имеют решающее значение для регуляции скелетной мышечной массы, вызывая при этом минимальную заболеваемость у животного. Сначала запишите вес мыши после подтверждения адекватной анестезии путем защемления пальцев ног, определите седалищную выемку путем пальпации и побрейте боковое бедро и ягодицу оттуда до колена.

Далее очистите участок с помощью повторных аппликаций спирта и пройода. Положите мышь на бок под операционный или препарирующий микроскоп в стерильных перчатках. Определите седалищную выемку при пальпации.

Надрежьте кожу боковой поверхности бедра от седалищной выемки до колена. Аккуратно раскройте кожу. С помощью тонких ножниц определите двуглавую мышцу бедра, которая представляет собой плоскую поверхностную мышцу боковой части бедра, расположенную непосредственно под кожей.

Разделите двуглавую мышцу бедра вдоль мышечных волокон и вставьте пружинный втягивающий механизм. Чтобы обнажить седалищный нерв и его ветви, определите седалищный нерв непосредственно под двуглавой мышцей бедра. Его можно определить по характерному блестящему белому цвету и составляет примерно 0,8 миллиметра в диаметре.

Она проходит от седалищной выемки до колена, разветвляясь на большеберцовый, малоберцовый и сальниковый нервы на уровне подколенной ямки. Аккуратно отделите большеберцовую кость от ветвей малоберцового и сального нерва с помощью ультратонких щипцов и пружинных микрорассекающих ножниц. Большеберцовый нерв является самой большой ветвью и обычно центральным.

Бережное обращение с седалищным нервом и его ветвями имеет важное значение для успеха этой процедуры. Следите за тем, чтобы ветви сальника и промежностного нерва не были повреждены или растянуты. Если эти ветви будут повреждены или вытянуты, это также обденит их цели.

Удержание нерва только на внешнем адвентициальном слое с помощью ультратонких щипцов и удержание нерва в слабом состоянии позволит избежать раздавливания нерва и тракционного повреждения для временной денервации. Разрежьте большеберцовый нерв ножницами для микрорассечения как можно дальше. Осторожно избегайте подколенных сосудов, если требуется полная денервация.

Сшить конец перерезанного большеберцового нерва на переднюю поверхность двуглавой мышцы бедра нейлоном 10 Т и повторно аппроксимировать бицепс бедра пятью Т Викрилом для предотвращения аббернации желудочно-кишечного тракта и камбаловидной мышцы. Как только денервация будет завершена, закройте кожу бегущим швом из Викрила. Когда будете готовы, выключите ингаляционный анестетик, но сохраните поступление кислорода.

После однократного введения обезболивающего средства поместите мышь в теплую чистую клетку без подстилки. Держите мышь под непосредственным наблюдением до тех пор, пока вы не сможете передвигаться. Когда мышь полностью восстановится, переложите ее в клетку с чистым дном и мягкой подстилкой.

Ежедневно осматривайте операционную конечность и стопу на предмет развития пролежней, пяточных язв или признаков незначительных проблем с жеванием, которые можно устранить с помощью местных антибиотиков или антисептиков, таких как один. Конечными показателями, требующими эвтаназии животного, являются потеря веса, признаки плохого ухода за собой и сгорбленная осанка. Кроме того, следует также пожертвовать животными с разрушением раны или язвами, которые они не заживают при одной-двух неделях ухода за раной.

Кроме того, любые животные, которые испытывают чрезмерную боль В послеоперационный момент времени собираются нужные ткани для анализа. После эвтаназии побрить медиальную часть как операционной, так и контралатеральной контрольной ноги и очистить спиртом, работая под препарирующим микроскопом, надрезать скальпелем медиальную кожу икры от лодыжки до колена и по окружности вокруг лодыжки на операционной конечности. Затем аккуратно стяните кожу с мышцы и проксимально по направлению к бедру.

Чтобы обнажить все мышцы ноги, определите желудочно-кишечную мышцу, которая представляет собой икроножную мышцу, проходящую от колена до лодыжки на задней стороне ноги. Затем найдите дистальное прикрепление двуглавой мышцы бедра проксимальнее гастромышцы на медиальной поверхности колена. При дистальном прикреплении бицепс бедра выглядит тонким и пленчатым и покрывает наиболее проксимальную часть желудочного тракта с помощью ножниц и рассечения тупым концом.

Аккуратно отделите дистальное прикрепление двуглавой мышцы бедра от желудочно-кишечной мышцы. Добавьте его дистальное прикрепление в пяточную кость, желудочно-кишечная мышца сужается к ахиллову сухожилию. Определите ахиллово сухожилие, которое выглядит белым и жилистым.

Удерживайте ахиллово сухожилие щипцами. Будьте осторожны, чтобы не удерживать и не раздавливать желудочную мышцу и не отделять ахиллово сухожилие от введения пяточной кости. С помощью ножниц, все еще удерживающих сухожилие, осторожно поднимите бледно-красную желудочно-кишечную мышцу от более глубокого красного камбаловидного от дистального введения к его началу в колене, используя очень мягкое вытяжение.

Чтобы облегчить процесс, отделите желудочный тракт от ноги, отделив начало желудочного тракта от медиального и латерального мыщелков бедренной кости. С помощью ножниц. Будьте осторожны, чтобы не раздавить мышцу.

Камбаловидная камбала теперь будет ясно видна непосредственно под прицелом желудочно-кишечного тракта. Поднимите су от его вставки на ахилловом сухожилии к началу на задней гокре. После снятия взвесьте мышцы отдельно на прецизионных весах.

Затем разделите мышцы по вертикали пополам для мгновенной заморозки и жидкого азота и наполовину для гистологии. Наконец, повторите эти процедуры на контрольной стороне без рейтинга, чтобы собрать контрольные желудочно-кишечные и камбаловидные мышцы. Желудочно-кишечные мышцы были собраны из денервированных и контралатеральных контрольных задних конечностей через одну, две или четыре недели и выражены в соотношении.

Денервация со временем привела к прогрессирующей потере мышечной массы. Площадь поперечного сечения миоволокон была измерена после иммуноокрашивания, как показано здесь. Быстро подергивающиеся два типа волокна окрашиваются в коричневый цвет и медленно сокращаются волокна первого типа, быстро окрашиваются в белый цвет второго типа.

Подергивающиеся волокна продемонстрировали прогрессирующее уменьшение площади поперечного сечения в денервированной мышце. В течение четырех недель после просмотра этого видео вы сможете выполнять пересечение большеберцового нерва у мышей. Это обеспечивает воспроизводимую, надежную и хорошо проверенную модель вызванной денервацией атрофии скелетных мышц.