Polymalic кислота основе Nano Биополимеры для таргетинга из нескольких онкомаркеров: возможность для персонализированной медицины?

Общая цель состоит в том, чтобы создать наноразмерную платформу, открытую для универсального протокола синтеза персонализированной медицины на основе генетического комплекса болезни человека, особенно онкологической. Сначала производят и очищают полияблочную кислоту из микроорганизма frum polycephalum, химически активируют очищенный PMLA на его подвеске. Карбоксильные группы присоединяют малые функциональные группы и линкер MEA путем замещения активированных групп и возвращают неиспользуемые активированные группы к карбоксильным группам путем гидролиза.

Затем добавьте антитела и антисмысловые молекулы через сульфатные гидрогруппы спейсера, MEA и колпачка. Неиспользованная проставка по реакции с PDP по окончанию теста на состав и функцию провода. Нанолекарство получается из животной модели, такой как мыши, несущие агрессивного человека.

Два положительных результата на рак молочной железы могут определить эффективность лечения, а также то, является ли лечение без нежелательных побочных эффектов. Основное преимущество биопроизводства перед существующими синтетическими методами, такими как полимеризация, заключается в том, что биополимер сохраняет полную оптическую чистоту и не загрязняется побочными продуктами. Это семейство нанопрепаратов PolyPhen может нацеливаться на любой тип клеток на основе специфического нацеливания и регулировать экспрессию белка.

Как правило, лечение рака нанопрепаратами PHE очень эффективно на нескольких животных моделях, пронизывая первичный рак мозга и молочной железы. Сначала у нас возникла идея блокировать синтез глиобластомы, специфичного для ламинга в формах изоф, а позже мы доказали нацеливание на ингибирование HER двух и тройных негативных белков рака молочной железы для предотвращения роста опухоли. Применение этого метода распространяется и на диагностику рака с помощью оптической и магнитно-резонансной томографии.

Полинанопрепараты могут дать представление о доставке лекарств для лечения рака. Он также может применяться при других патологических состояниях, таких как инфекционные заболевания, облегчение боли и неврологические расстройства. После выращивания семенного плазмодия культуры из колоса на шнек инокулируют 100 миллилитров базальной питательной среды и выращивают культуру при температуре 25 градусов Цельсия.

Термос заявленный инкубатор производит количество гравитационно упакованных микроплазменных модий при исключении света. Во избежание спорообразования в 10-литровом корпусе биореактора растворите 80 граммов карбоната кальция в восьми литрах базальной среды, затем перенесите микроплазму пакта в установленный реакционный сосуд и запустите биопроцесс на 75 часов. При температуре 25 градусов Цельсия при расходе отфильтрованного воздуха 10 литров в минуту и 150 оборотах в минуту при помешивании сегментом перемешивают.

Когда культуральный бульон имеет pH 4,8, остановите культуру, чтобы измерить выработку полималеиновой кислоты. Теперь охладите бульон до 17 градусов Цельсия и дайте клеткам осесть под действием силы тяжести и удалите надосадочную жидкость культуры из реактора. Отрегулируйте pH до 7,5.

Теперь прокачайте надосадочную жидкость снизу через 1,5-литровую целлюлозную колонку DEAE, уравновешенную 20 миллимолярами трис гидрохлорида pH 7,5 при пяти градусах Цельсия. Затем пропустите три колонки промывочного буфера, содержащего 0,3 моляра натрия хлорида, снизу вверх из колонки элюируйте ПМЛА в присутствии 0,7 молярного натрия хлорида. Отрегулируйте фракцию PMLA до 0,1 молярного хлорида кальция и добавьте 80% ледяного этанола для осаждения фракционирования кальция следующего размера PMLA, кальция PMLA, используя cidex G 25 и воду.

Наконец, пропустите каждую фракцию через янтарный световой столб и немедленно заморозьте поток через полияблочную кислоту в жидком азоте и лиофилизируйте перед хранением при температуре минус 20 градусов Цельсия. Для активации карбоксильных групп ПМЛА смешайте одну миллимоль единицы P-M-L-A-H в одном миллилитре безводного ацетона и одном миллимоле, по гидрокси-ЦИН и цило хейл карбо иде в двух миллилитрах диметилформамида после перемешивания при 20 градусах Цельсия в течение трех часов, добавьте 0,05. Миллимоли метилПеги составляют в одном миллилитре ДМФА и 0,05 миллимоля триэтиламина.

Затем по каплям добавьте 0,4 миллимоля этилового эфира лейцина и через час проверьте завершение реакции по отрицательному ответу Hyn на тонкослойной хроматографии. Аналогично добавьте 0,1 миллимоля двух ме капто, одного этиламина и 0,5 миллимолей TEA. Удалите остатки эфира NHS путем спонтанного гидролиза фосфатно-солевым буфером.

Обессолите над колонкой PD 10 и лиофилизируйте до получения белого порошка, храните этот предварительно сопряженный в сухом виде при температуре минус 20 градусов Цельсия. Далее добавьте 30 мг антитела в 4,5 мл 150 ммиллярного натрия хлорида в 100 ммилляр натрия фосфата при pH 5,5. Уменьшите дисссульфидные связи с пятью миллимолярами триса, двумя карбоксиэтилфосфина гидрохлоридом и очистите в колонке PD 10.

Теперь растворите IDE PEG IDE в двух миллилитрах вышеуказанного буфера, хотя и при pH 6,3. Добавьте уменьшенное антитело и перемешивайте при температуре 20 градусов Цельсия в течение часа. Сконцентрируйте до 2,5 миллилитров в AVEVA spin 20 с исключением 30 килодальтон, а затем очистите в cidex G 75.

Теперь проверьте продукт с помощью SEC HPLC. Измерьте количество на 280 нанометрах и также подтвердите отсутствие примесей на других длинах волн. Затем смешайте 50 миллиграммов предварительного конъюгата с 200 MLE конъюгированного антителом PEG IDE в пяти миллилитрах буфера pH 6,3.

Отрегулируйте концентрацию сульфа гидро до двух миллимоляров и инкубируйте при температуре 20 градусов Цельсия в течение трех часов. Для получения 98%-ного выхода солюбилизации три первичных аминоантисмысловых олигонуклеотида реагируют с одним объемом SPDP, очищают A-O-N-P-D-P над cidex LH 20 в метаноле, затем выпаривают метанол, растворяют продукт в воде и лиофилизируют 800 животных NAN активированных AOS с предварительным конъюгатом антител PEG к MEA SH в течение ночи. Когда реакция обмена дисссульфидов завершена, затем добавьте флуоресцентный блок красителя, избыток гидросульфа с PDP и очистите над цидексом G 75.

Хранить готовый нанопрепарат на основе полияблочной кислоты при температуре минус 20 градусов Цельсия для оценки содержания полималеиновой кислоты во время производства действуйте следующим образом, к 320 микролитрам образца добавьте 160 микролитров 10% гидроксильного хлорида аммония и 160 микролитров 10% гидроксида натрия. Через 10-15 минут смешайте со 160 микролитрами 5%-ного раствора хлорида железа и визуализируйте образование темно-фиолетового цвета при 540 нанометрах. Затем гидролизуйте нанопрепарат в течение ночи в двух молярах соляной кислоты при температуре 110 градусов Цельсия, используя герметичный ампульный анализ на малеиновую кислоту с помощью обратной фазированной хроматографии.

Использование образцов, приправленных стандартами малеиновой кислоты. Теперь расщепите нанопрепарат со 100 миллимолярными дихи тремя этолами и измерьте морф-антисмысловые олигонуклеотиды с помощью количественной ВЭЖХ с обратной фазой против стандартов морфо-а-ОН. Используя расщепленный нанопрепарат, измерьте содержание антител с помощью набора для анализа белка для количественного определения содержания ПЭГ Малика.

Сначала вступите в реакцию с тиоцианатом ОТ аммония, затем экстрагируйте хлороформом и измерьте абсорбцию на 510 нанометрах. Проверьте активность антител и солигирование с помощью Элизы, используя пять микролитров нанопрепарата на лунку и 0,5 микрограмма на лунку из двух ее антигенов, покрытых пластиной. Наконец, рассчитайте достигнутый процент для антисмыслового олигонуклеотида, EG. И антитела в отношении малеиновой кислоты.

Сравните с процентом, запланированным при разработке препарата. Этот бимодальный стратегический подход к нанопрепарату использует герцептин для ингибирования двух сигнальных путей HER и два специфических a ON для блокирования транскрипции антител к двум рецепторам HER, облегчающих трансцитоз через эндотелиальный TFR опухолевого сосуда. Наноконъюгатная платформа полималеиновая кислота была получена путем культивирования микроплазмы и очищена, активируя карбоксильные группы PMLA, способствовала синтезу предварительно сопряженного каркаса.

И, наконец, наносопряженный свинец. Анализы Eli SA показали сохранение активных моноклональных антител на протяжении всего синтеза нанолекарств. Поскольку оба антитела собраны на одной полимерной платформе, флуоресцентная конфокальная микроскопия отслеживала поглощение нанопрепарата клетками.

Наложенные изображения через нулевое и трехчасовое обследования анализировались вместе с мечеными эндосомами. Коэффициенты корреляции Пирсона для колокализации указывают на высвобождение нанопрепарата из эндосом в цитоплазму и диссоциацию ОН из нанопрепарата путем расщепления глутатион-зависимого дисс-сульфида в цитоплазме. In vitro ведущий нанопрепарат значительно наиболее эффективно ингибировал рост в клеточной линии HER с более высокой экспрессией.

Эксперименты in vivo на мышах, несущих BT 4 74, HER 2 с повышенной экспрессией рака молочной железы человека показали более чем 95% ингибирование роста свинцовым нанопрепаратом, содержащим герцептин. А два специфических A ON ex vivo вестерн-блоттинга указывали на ингибирование как синтеза двух HER, так и фосфорилирования расщепления KT выраженного PARP апоптоза. Регрессия опухоли в ответ на медикаментозное лечение проявляется в уменьшении опухоли и истощении опухолевых клеток при гистологическом исследовании.

Теперь у вас должно быть хорошее понимание того, как использовать биосовместимую наноплатформу для достижения эффективного персонализированного лечения без побочных эффектов и получения нанопрепарата с контрольной композицией и проверенной функциональной активностью. Этот метод с использованием наноплатформы поликислотных кислот для адресной доставки антисмысловых олигонуклеотидов открывает исследователям в области персонализированной аномедицины путь к изучению лечения опухолей, нацеленного на конкретные молекулярные рынки опухолей, идентифицированные с помощью персонализированного генетического анализа. Фармакологически активные агенты и клетки могут быть чрезвычайно опасными.

Во время выполнения этой процедуры всегда следует соблюдать меры предосторожности, такие как ношение маски и перчаток.