Процедура для изучения влияния длительного продовольственной ограничение на героин Ищу в абстинентного крыс

Процедура, которая позволяет демонстрацию надежной увеличения наркотиков, обращающихся в пищевых ограничением крыс описана. После героина обучения самоуправления, крысы пройти через период воздержания, в среде, свободной от наркотиков, в течение которого они мягко питания ограничен. Ищет наркотики затем проверяется в среде, связанных с наркотиками.

Общая цель этой процедуры состоит в том, чтобы изучить влияние манипуляций с окружающей средой, таких как хроническое ограничение приема пищи, на рецидив героинового поиска в лабораторных обертках в условиях абстиненции. Это достигается путем хирургического введения внутривенного катетера в яремную вену крысы, чтобы обеспечить самостоятельное введение героина после периода восстановления. Крыс обучают самостоятельному введению героина в камерах оперантного кондиционирования в течение 10 дней.

Следующим этапом процедуры является фаза воздержания, когда крысы перевозятся в помещение для животных и подвергаются периоду ограниченного или неограниченного доступа к пище. Наконец, крыс возвращают в камеры оперантного обусловливания для прохождения теста на поиск героина, в котором реакции на рычаге, нарушающем героин, приводят к активации сигнала, света и тона в отсутствие подачи героина. В конечном счете, крысы с хроническим ограничением в пище С историей употребления героина, самостоятельное введение приведет к значительному увеличению спроса на героин в условиях абстиненции, что является результатом повторного воздействия на окружающую среду, в которой принимают наркотики, и сигналов, связанных с наркотиками.

Основным преимуществом данной методики перед существующими методами, такими как процедура восстановления, является отсутствие явного оперантного угасания, которое не наблюдается в условиях человека. Кроме того, использование хронических и острых манипуляций позволяет получить большую конструктную валидность в отношении состояния человека. Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в области наркозависимости, такие как общие неврологические механизмы, лежащие в основе поведения, связанного с поиском наркотиков и пищи.

Катетеры подготавливаются навалом и стерилизуются в автоклаве для использования в течение длительного периода времени. Чтобы сконструировать катетер, сначала разрезают эластичную трубку на кусочки длиной 12 сантиметров. С помощью зубочистки или иглы 18 калибра поместите небольшую каплю силикона вокруг катетера на расстоянии трех сантиметров от кончика.

Дайте силикону высохнуть в течение 24 часов перед автоклавированием сгнуть длинную трубку из пяти канюль, которая будет служить соединителем под прямым углом к пластиковой тумбе перед автоклавированием. Чтобы собрать катетеры в день операции, надавите длинной стороной школьной трубки на изогнутую металлическую трубку пяти верхних канюль примерно на полпути к пластиковому пьедесталу. Подсоедините трубку с пятью верхними трубками с помощью тигональной трубки и смешанной иглы 22 калибра к одномиллилитровому шприцу, наполненному стерильным физиологическим раствором.

Промывайте физиологический раствор через катетер, чтобы обеспечить беспрепятственный поток. Для начала обезболите животное перед бритьем и очистите область на правом плече и голове спиртом и хирургическим скрабом. После нанесения геля на глаза для предотвращения сухости вводят пенициллин и физиологический раствор для защиты от инфекции и обезвоживания.

Используйте стандартные методы для обнажения наружной яремной вены, изолированной от окружающих тканей. Вставьте изогнутые щипцы под вену, чтобы она оставалась приподнятой и слегка растянутой. Сделайте небольшой V-образный надрез на жилке и держите срез раскрытым.

С помощью сосудистого расширителя продвигайте короткий трехсантиметровый кончик катетера в вену по направлению к сердцу, пока силиконовая капля не окажется в точке разреза. Перевяжите катетер к вене тремя швами, один из которых должен быть максимально обтянут. Один просто рострально до силиконовой капли, а третий как можно дальше ростраль.

Проведите физиологический раствор через катетер, чтобы убедиться, что он остается заблокированным и что швы не слишком тугие. Далее поместите крысу подфюзеляжной стороной вниз. Надрежьте головку и введите кровоостанавливающее средство, чтобы отделить кожу от подлежащих тканей и создать подкожный карман.

Направьте кровоостанавливающее средство под кожу к отверстию на плечах, куда был введен катетер. Прорвите соединительную ткань и плотно зажмите катетер в самой ростральной точке ниже основания пяти вверх. Отсоедините пятерку вверх и проденьте длинный конец катетера под кожу и выведите из разреза, расположенного в верхней части головки.

С помощью ножниц разрежьте катетер ниже того места, где был зажат кровоостанавливатель, и снова прикрепите длинный конец пятерки вверх. Протяните катетер вдоль металлического стержня пятерки вверх до пластиковой пьедестала, пропустите через нее физиологический раствор, чтобы обеспечить свободный поток. После закрытия ран швами поместите крысу в стереотаксический аппарат.

Как только открытый череп станет чистым и сухим, используйте ручное сверло, чтобы просверлить четыре-пять отверстий в поверхности. Затем вставьте в отверстия машинные винты, которые будут действовать как строительные леса для головного колпака. Поместите пять верхних соединителей между винтами и заправьте излишнюю длину катетера в подкожный карман, сделанный ранее.

Наконец, используйте стоматологический цемент, чтобы прикрепить пятерку к верхней части черепа. Извлеките крысу из стереотаксического аппарата после полного высыхания цемента и следите за его полным восстановлением. Крысы размещаются по отдельности в камерах оперантного кондиционирования.

Заключены в шумопоглощающие отсеки, оборудованные вентилятором. Два выдвижных рычага установлены на высоте девяти сантиметров над полом правой боковой стенки с кием над каждым рычагом. Тональный модуль расположен над активным рычагом, а красный фонарь дома расположен в верхней центральной части левой боковой стены.

Еда и вода доступны в libitum. Насос для лекарств крепится к катетеру с помощью вертлюга для жидкости и тигональной трубки, защищенной металлической пружиной. Самостоятельный прием героина начинается после восстановления после операции и 24-часового периода привыкания.

Для начала промойте катетер раствором гепарина гентамицина. Далее подсоедините пять вверх разъемов к трубке Tigon и прикрепите металлическую пружину. Начинайте каждый сеанс при наступлении темновой фазы с выдвижения активных и неактивных рычагов, а также подсветки дома светом и активации тонального комплекса Q light.

В течение 30 секунд крысам разрешается самостоятельно принимать героин в течение 10 дней в течение трех трехчасовых сеансов, разделенных трехчасовыми интервалами. Срабатывания на активном рычаге приводят к активации насоса для лекарств и инициации 22-го тайм-аута, в течение которого свет в доме выключается, а над активным рычагом активируется комплекс световых тонов Q. Неактивные реакции рычага регистрируются, но не имеют программируемых последствий.

После самостоятельного обучения выведите крыс из камер оперантного кондиционирования и разместите их по отдельности в помещении для животных с неограниченным доступом к пище и воде. В течение одного дня вымывания наркотиков на следующий день уменьшите количество пищи для группы с ограниченным питанием, чтобы начать период воздержания, сохраняя при этом неограниченный доступ к пище в группе насыщения. Проведите тест на поиск наркотиков утром в день воздержания.

День 14: верните крыс в камеры оперантного кондиционирования и прикрепите их к металлической пружине. Предоставьте одно- или трехчасовой сеанс, во время которого активные и неактивные реакции рычага имеют те же последствия, что и при самостоятельной тренировке, исключая доступность препарата. Эти результаты демонстрируют, что масса тела остается стабильной на протяжении всего героина.

Во время воздержания крысы с неограниченным доступом к корму увеличивают массу тела, в то время как крысы с ограниченным питанием снижают массу тела примерно на 10-15%. После периода абстиненции активная реакция рычага на крыс с ограничением в пище значительно увеличилась по сравнению с сытыми крысами. В то время как реакция неактивного рычага минимальна и сопоставима между группами после этой процедуры.

Другие методы, такие как внутричерепные инъекции, микродиализ, вестерн-блоттинг и иммуногистохимические методы, могут быть использованы для воздействия на конкретные нейрохимические и фармакологические системы. После просмотра этого видео у вас должно сложиться четкое представление о том, как хирургическим путем вживить внутривенный катетер в яремную вену крысы, а также как проводить процедуру самостоятельного введения героина в стандартных камерах оперантного кондиционирования.