Минимально инвазивная Создание мышиной артифициального мочевого пузыря ксенотрансплантатов

Общая цель этой процедуры заключается в быстром, точном и минимально инвазивном создании ортотопических ксенотрансплантатов при раке мочевого пузыря. Это достигается путем расширения определенной опухолевой клеточной линии и суспензии опухолевых клеток в Матригеле. Далее животное устанавливается на платформу визуализации и мочевой пузырь визуализируется с помощью ультразвука.

Затем слизистый и мышечный слои в мочевом пузыре разделяются с помощью инъекции физраствора. Наконец, суспензия матрицы опухолевых клеток вводится в это искусственно созданное пространство. В конечном счете, можно получить результаты, которые показывают рост опухоли с помощью ультразвуковой визуализации и биолюминесценции.

Основное преимущество этой методики перед другими существующими методами, такими как использование лапаротомии для инокуляции первичных ксенотрансплантатов, заключается в том, что этот подход является быстрым, точным и малоинвазивным. Применение этих методов распространяется на диагностику и терапию рака мочевого пузыря, потому что аутоксенотрансплантаты являются золотым стандартом для доклинического изучения новых методов лечения. Визуальная демонстрация этого метода имеет решающее значение, потому что этапы инъекции довольно сложны для освоения, а вода была очень жидкой, демонстрация этой процедуры будет.

У Игоря Моски есть научный сотрудник, а у Вольфганга Йегера — постдокторант. Оба являются урологами после подтверждения идентичности соответствующих клеточных линий рака мочевого пузыря человека. Для этого исследования с помощью ДНК-дактилоскопии используйте лентивирусную конструкцию, несущую ген люциферазы светлячка, для биолюминесцентного анализа роста опухолей ксенотрансплантата для трансфекции клеточных линий.

Когда будете готовы начать процедуру, разморозьте и используйте DMEM с 10% FBS для расширения существующих клеточных линий, инкубируйте при температуре 37 градусов Цельсия во влажной атмосфере с концентрацией 5% CO2. Чтобы приготовить клеточную суспензию для инъекций, после размораживания матригеля и удержания на льду трипсина глаз смешайте 70% клеток и используйте нормальную питательную среду для суспензии, затем подсчитайте клетки и вращайте суспензию в 200 раз больше G в течение пяти минут. После удаления надосадочной жидкости добавьте соответствующее количество равных объемов D-M-E-M-F-B-S и МАТРИГЕЛЯ до достижения нужной концентрации клеток для введения объема 40 микролитров на одно животное.

Хорошо перемешивайте и избегайте образования пузырьков воздуха из любого плоского жесткого пластикового материала. Разрежьте стабилизатор мочевого пузыря, внимательно осмотрите ремешок и удалите все острые края перед нанесением на мышей. После обезболивания самок мышей 3%-ным изофлураном в кислороде и проведения щипкового пальца ноги.

Чтобы обеспечить адекватную седацию, установите животное на нагревательный стол платформы для визуализации мелких животных, непрерывно контролируя его жизненные показатели с помощью резиновой ленты. Зафиксируйте нижние конечности и используйте 0,5% глюконат хлоргексидина для дезинфекции брюшной полости, прежде чем использовать стерильный ватный наконечник для протирания кожи. Далее, с помощью стабилизирующего ремня мочевого пузыря, обездвижите мочевой пузырь, чтобы избежать уклонения от него во время интрамурального введения.

Затем нанесите стерильный гель для ультразвука на низ живота. Медленно продвигайте ультразвуковое сканирование, перейдите к коже и визуализируйте мочевой пузырь на ультразвуковом экране. Если мочевой пузырь пуст, используйте 50 микролитров теплого PBS в трансуретральном ангиокатетере 24 калибра, чтобы заполнить его, чтобы разделить слои стенки мочевого пузыря.

Начните с прикрепления шприца объемом 1,0 миллилитров, наполненного PBS и подключенного к игле 30 калибра 30 калибра три четверти дюйма к зажиму шприца. Расположите иглу по направлению к коже чуть выше лобковой кости. Под углом от 30 до 45 градусов обнаружьте иглу на ультразвуковом экране, прежде чем медленно перфорировать кожу и мышцы брюшной стенки.

Далее поверните скос иглы на 180 градусов так, чтобы он был обращен кзади, и введите кончик иглы в стенку мочевого пузыря, не проникая внутрь слизистой. Затем для создания искусственного пространства медленно введите 50 микролитров PBS между мышечным слоем и слизистой перед извлечением иглы. Чтобы ввести клетки рака мочевого пузыря, прикрепите второй шприц объемом 1,0 миллилитров, наполненный суспензией матрицы раковых клеток, и иглу 30 калибра размером три четверти дюйма к зажиму шприца.

Направьте кончик иглы на заполненное ПБС пространство. Только что созданы и впрыскиваем в пространство 40 микролитров суспензии. Затем извлеките иглу после снятия мыши с платформы визуализации.

Держите его в теплой и комфортной среде под постоянным контролем. После прихода в сознание и нормального передвижения поместите животное обратно в домашнюю клетку. Интрамуральная инъекция трех различных опухолевых клеточных линий была выполнена 50 животным под ультразвуковым контролем в течение трех дней подряд.

Инокуляция была выполнена эффективно и не была связана с какими-либо внутриинтервенционными или постинтервенционными осложнениями. Мониторинг роста опухоли проводили с помощью ультразвуковой визуализации и биолюминесценции. На третий день опухоль могла быть обнаружена с помощью ультразвука в переднем мочевом пузыре всех 50 животных, и у 98% мышей наблюдался постоянный рост опухоли в течение периода наблюдения после инокуляции ЯК. Три.

У Люка, у одной мыши, развилась внутрибрюшинная диссеминация опухоли, и опухоль инволюционировала после седьмого дня у второго животного. Это была первая группа мышей, инокулированных этой новой техникой после инокуляции uc. Три. Лука uc, один Лука и uc.

13 От Луки. Мышей приносили в жертву на 24, 28 и 37 день соответственно. Опухоли ксенотрансплантата были собраны и исследованы с помощью сечений h и d.

Все опухоли были мышечно инвазивными, и некоторые из них инфильтрировались в висцеральный жир, но инвазии в соседние органы не наблюдалось. 60% ЯК, 13 Лука и 20% ЯК. У трех мышей с опухолями Luke развились метастазы в забрюшинные лимфатические узлы, которые были подтверждены окрашиванием h и e.

Как только вы овладеете этой техникой, ее можно будет выполнить за три минуты. Знакомство с ультразвуковой визуализацией является необходимым условием для выполнения этой процедуры После того, как опухоли были привиты таким образом, ультразвук позволяет нам не только контролировать рост опухоли с течением времени, но и наблюдать за перфузией опухоли с помощью микропузырьков. Это также позволяет нам проводить внутриопухолевую инъекцию с новыми экспериментальными препаратами.