Трассировка Fear Conditioning у мышей

Общей целью данного эксперимента является оценка зависимого обучения и памяти гиппокампа у мышей с помощью обусловливания следовой сферы. Это достигается путем обучения животного ассоциировать слуховой тон с аверсивным стимулом. На следующий день животное помещается в новый контекст, и фиксируется поведение замирания в ответ на тон.

На третий день животное возвращается в исходный контекст и фиксируется поведение при замораживании. Результаты показывают, что мыши, обученные с помощью сопряжения с тональным тоном шока, демонстрируют более сильное поведение при замораживании, чем те, кто не получал удар током. Этот метод может быть использован для получения информации о зависимом обучении и памяти гиппокампа у мышей, и особенно полезен при изучении трансгенных и нокаутных животных.

Следующая процедура выполняется в камере для обусловливания страха, расположенной внутри более крупной шумопоглощающей камеры. Когда дверь в камеру закрыта, свет должен быть таким, чтобы достичь желаемого уровня освещенности, при правильном размещении индикатор уровня освещенности должен быть выключен. Используйте шумомер, чтобы подтвердить постоянный уровень фонового шума в каждой камере.

Далее откалибруйте тон, используемый во время тренировки. Используйте внешнее калибровочное устройство для калибровки уровня удара. Поместите один провод на перекладину, а другой на три или четыре полоски сверху.

Используйте генератор удара для подачи удара и калибровки до тех пор, пока не будет достигнут правильный уровень. Повторите этот шаг для каждой камеры кондиционирования страха. После того как аппарат будет подготовлен, переведите испытуемых в камеру ожидания, отдельную от комнаты для тестирования, чтобы уменьшить чрезмерное обращение.

Перед тестированием маркируйте хвосты не менее чем за 30 минут до тестирования или за день до него. Когда вы будете готовы начать, переложите тестовую мышь в клетку с чистой маркировкой для транспортировки в камеру для подготовки к страху. Поместите мышь в камеру, закройте дверцу и запустите программное обеспечение.

В первый день обучения мышам разрешается исследовать камеру в течение трех минут. Затем программное обеспечение отображает 22-й тон, за которым следует 22-й интервал следа, который заканчивается легким ударом ноги. Понаблюдайте за субъектом, чтобы убедиться, что он получил аверсивные стимулы.

202-й межпробный интервал разделяет пять испытаний по физической подготовке. После испытаний дайте животному остаться в испытательной камере в течение одной минуты перед удалением, поместите животное обратно в клетку для переноса и вернитесь в помещение для хранения. Если есть дополнительные мыши, которых нужно протестировать в домашней клетке по отдельности, держите мышей до тех пор, пока все мыши не закончат тестирование.

Очистите тестовую камеру с 30% изопропанолом при подготовке к следующему животному. Повторяйте эти действия, пока все мыши не будут обучены. Верните всех мышей в их комнату колонии.

После того, как последняя мышь в когорте была протестирована на следующий день, животных тестируют. Для следа боязнь память. В этот день замените подстилку переносных клеток на измельченную бумагу, чтобы изменить их контекст.

Также меняется контекст камеры. Положите лист пенопласта под прозрачную акриловую вставку на полу, чтобы изменить его текстуру и внешний вид. Поместите акриловый разделитель внутрь зоны тестирования.

Измените запах, поместив ванильный экстракт в сывороточную лодку под полом. Вставьте в этот день, очистите камеру с 70% этанолом вместо 30% изопропанола между каждой мышью. Когда все будет готово, поместите мышь в тестовую камеру и запустите программу.

Сессия начинается с двухминутного базового периода, за которым следуют три презентации с 22-м тоном. Существует 222-й межпробный интервал между каждым тональным представлением. После окончания сеанса верните мышей в их домашнюю клетку и продолжайте до тех пор, пока все животные не будут протестированы, чтобы подготовиться к тестированию на следующий день.

Восстановите тот же контекст, который использовался в первый день. Очистите камеру 30% изопропанолом. Контекстуальное обусловливание проводится на третий день.

Используя те же контейнеры для переноса, что и в первый день, извлеките тестовую мышь из комнаты ожидания. Поместите мышь в испытательную камеру, а затем запустите программу для проверки контекстуальной памяти. Запустите программу, которая будет записывать поведение зависания в течение восьми минут.

По прошествии этого времени верните мышь в домашнюю клетку и продолжайте тестирование, как показано ранее, репрезентативные результаты показывают увеличение поведения при замораживании у животных, получающих спаривание шокового тона в течение сеанса дрессировки. В новом контексте мыши, получавшие аверсивный шоковый стимул, чаще замерзали по сравнению с мышами, которые не получали шок во время исходного тонального следа и межпробного интервала. При возвращении в исходный контекст животные, получавшие аверсивный шоковый стимул, демонстрировали стабильно более высокое поведение при замерзании в течение восьмиминутного периода.

После просмотра этого видео у вас должно быть хорошее понимание того, как использовать обусловливание следов страха, чтобы понять зависимое обучение и память гиппокампа и мышей.