Капсульная серотипирования Пневмококк Использование реакции реакция набухания капсулы

Общая цель этой процедуры заключается в выполнении капсулярного стереотипирования Streptococcus pneumoniae или пневмококка с использованием реакции подавления. Это достигается путем первого введения в сердечный инфузионный бульон свежей, ночной чистой культуры пневмококков. На втором этапе капля инокулюма переносится на предметное стекло микроскопа.

Далее на предметное стекло в равном объеме наносится антисовая сыворотка. На последнем этапе обе капли смешиваются, и на подвеску надевается защитный слип. В конечном счете, суспензию можно рассматривать под фазовым контрастом, чтобы наблюдать положительную или отрицательную реакцию подавления легких.

Этот метод демонстрирует золотой стандарт метода пневмококковой инфекции. Метод прост, легок в исполнении и легко интерпретируется. Визуальная демонстрация этого метода важна, так как людям, не знакомым с этой техникой, может быть трудно распознать, какая плотность клеток является подходящей для проведения теста qualm.

Начните с использования стерильной одноразовой петли объемом в один микролитр для получения небольшого количества свежей чистой культуры пневмококков, выращенной на твердой, неселективной агаровой пластине лошадиной крови, инокулируйте пневмококки в 100 микролитров сердечного инфузионного бульона. Суспензия должна казаться заметно мутной и осторожно перемешивать пробирку, чтобы эмульгировать клеточный раствор. С помощью новой петли объемом в один микролитр перенесите каплю инокулюма на стеклянный микроскоп.

Затем сдвиньте небольшую круглую крышку на подвес и проверьте плотность суспензии под фазовым контрастом при увеличении в 400 раз. Если инокулюм слишком тяжелый, разбавьте клеточную суспензию большим количеством бульона и аккуратно перемешайте клетки еще раз, если инокулюм слишком легкий. Например, если видно менее 50 клеток, добавьте в клеточную суспензию больше бактерий и аккуратно перемешайте еще раз.

С опытом. О плотности клеточной суспензии можно судить, встряхнув и поднеся суспензию к свету, где она должна казаться явно мутной. При рассмотрении под микроскопом клеточный раствор должен быть примерно такой плотности.

После того, как будет достигнуто оптимальное разведение бактериальных клеток, перенесите около одного микролитра инокулюма на стеклянный микроскоп. Проведите пальцем далее. С помощью новой петли добавьте равный объем комнатной температуры.

Антисыворотку нанести на предметное стекло и обе капли хорошо перемешать. С помощью петли сразу же наденьте на подвес небольшую крышку, стараясь не касаться капли щипцами. Затем посмотрите на суспензию под фазовым контрастом, как показано только что на рисунке.

Отрицательная реакция легких наблюдается при незначительном набухании пневмококковых клеток или его отсутствии. Аналогично отрицательному контролю, в него добавляют суспензию пневмококковых клеток без антисыворотки. Положительная реакция легких на квелл происходит, когда специфическое антитело типа связывается с капсулой пневмококка, что приводит к изменению его показателя преломления.

При рассмотрении под фазовым контрастом бактерии кажутся набухшими и более заметными. Не забывайте, что когда вы делаете эту процедуру, вы на самом деле работаете с живыми микроорганизмами. По этой причине вы должны быть осторожны и следовать передовым лабораторным практикам, носить защитную одежду, соответствующее лабораторное оборудование и безопасно утилизировать все оборудование и реагенты в конце процесса.

После освоения этой техники ее можно выполнить примерно за 10 минут, если она выполнена правильно. После просмотра этой процедуры у вас должно сложиться хорошее представление о том, как серотипировать пневмококк с помощью реакции ква-легких. Этот метод важен для понимания пневмококковой эпидемиологии, как при носоглоточном носительстве, так и при инвазивном заболевании.