Оценка Морфин-индуцированной гипералгезии и обезболивающее толерантности в мышей с использованием тепловых и механических Ноцицептивная Механизмы

Общая цель данного эксперимента состоит в том, чтобы наблюдать за развитием опиоид-индуцированной гипералгезии и толерантности к анальгетикам у мышей. Это достигается путем измерения термических и механических ноцицептивных реакций наивных мышей после введения морфина в течение определенного периода времени в нулевой день в качестве второго шага. Ноцицептивный порог измеряют ежедневно перед введением морфина на седьмой день.

Обезболивающий эффект морфина измеряется с течением времени еще раз, чтобы выявить развитие толерантности к анальгетикам. Получены результаты, которые показывают повышение болевой чувствительности, а также развитие толерантности к обезболивающим. После повторного введения морфина.

Тем не менее, этот метод может дать представление о развитии боли, гиперчувствительности и толерантности к обезболивающим препаратам у нескольких мышей. После лечения хроническими опиатами его также можно применять к другим опиатам или генетически модифицированным мышам. Чтобы свести к минимуму стресс-индуцированную анальгезию, мышей обрабатывают в течение пяти минут каждый день и приучают до тех пор, пока они свободно не войдут в ограничитель.

После привыкания начните тест на погружение хвоста в воду, установив термостат на 48 градусов по Цельсию. Аккуратно введите мышь в ограничитель. Как только вы будете как следует удержаны, опустите выступающий на две трети конец его хвоста в водяную баню и запустите хронометр.

Различение ноцицептивной и ноцицептивной реакции является ключевым элементом этой процедуры. Надлежащий арбитраж и практика имеют решающее значение для успеха. Следите за движением животного и останавливайте хронометр.

Как только мышь вытащит хвост из горячей воды, зафиксируйте задержку вывода. Верните мышь в клетку и испытайте следующее животное до конца ряда, сохраняя тот же порядок. Повторите измерения ноцицептивного ответа еще два раза.

Задержка ноцицептивного ответа в секундах для каждой мыши определяется как среднее значение для трех последовательных определений. Для проверки давления хвоста сначала осторожно введите мышь в удерживатель и расположите ее хвост под кончиком анального JMeter. Оказавшись на месте, нажмите ножной переключатель, чтобы равномерно увеличить давление на проксимальную часть хвоста.

При первых признаках ноцицептивной реакции извлеките кончик. Ноцицептивные реакции могут включать в себя борющийся скрип или отведение хвоста. Запишите силу тока в граммах, которая вызывает ноцицептивную реакцию.

Повторите эту меру на срединной и дистальной частях хвоста той же мыши с 32-м интервалом, верните животное в родную клетку и повторяйте эти действия до тех пор, пока все мыши не будут протестированы. Во-первых, определим две группы животных с сопоставимыми средними ноцицептивными показателями. Затем измерьте и запишите массу тела каждого животного.

После того, как физиологические и морфиновые группы установлены, приготовьте раствор морфина в физиологическом растворе для подкожного введения. Измерьте задержки ноцицептивного отклика в тестах на погружение в хвост и давление в хвосте и запишите их как время 0,0 для каждой группы. Затем введите морфин или физиологический раствор каждому животному в зависимости от их группы.

Через 30 минут начните записывать ноцицептивные реакции у каждого животного. Обратите пристальное внимание на пороговые значения, так как мыши вряд ли будут реагировать на вредные раздражители в этот ранний момент времени. При отсутствии ноцицептивной реакции используется 25-секундный порог для предотвращения повреждения тканей, сохраняя тот же порядок теста.

Повторяйте ноцицептивные измерения каждые 30 минут до 3,5 часов после инъекции для лечения хроническим морфином. Получите значения первого дня путем измерения ноцицептивной реакции животных на TIT и TPT, как было продемонстрировано ранее. Приготовьте свежий раствор морфина.

Сделайте инъекции морфина или физиологического раствора в соответствии с распределением по группам и дайте животным отдохнуть до следующего дня. На следующий день измерьте ноцицептивные реакции на TIT и TPT, прежде чем проводить второй раунд инъекций. Повторяйте эти действия каждый день в течение шести дней.

На седьмой день оцените анальгезию, вызванную морфином. В соответствии с парадигмой хода времени, продемонстрированной ранее в тесте на погружение хвоста, максимальный обезболивающий эффект морфина был достигнут через 30 минут. Тем не менее, в тесте на давление в хвостовой части максимальный эффект был достигнут через 60 минут по сравнению с контрольной группой, вводимой физиологическим раствором.

Эти результаты показывают, что ежедневные инъекции морфина в течение семидневного периода лечения вызывали значительное и прогрессирующее снижение термических и механических базальных ноцицептивных показателей. После хронического лечения базальная ноцицептивная ценность у мышей, получавших морфин, была значительно ниже, чем у контрольных мышей, которым вводили физиологический раствор. После острого морфина ноцицептивная реакция в группе, получавшей хронический морфин, значительно увеличилась, но лишь незначительно превысила базальную ноцицептивную ценность контроля, получавшего физиологический раствор.

У мышей, измеренных через 30 минут в TIT и TPT и через 60 минут в TIT, здесь построены ноцицептивные пороговые значения, измеренные через 30 минут после инъекции физиологического раствора или морфина, для нулевого дня и седьмого дня последующего развития. Этот метод проложил путь для исследователей в области исследования боли к изучению влияния фармакологического или генетического вмешательства на развитие гиперчувствительности к боли и толерантности к анальгетикам, вызванных хроническим введением морфина.