Моделирование Спонтанное раке почки (МСКЦ) у мышей после Нефрэктомия

Общая цель этой процедуры заключается в создании спонтанной метастатической почечно-клеточной карциномы, которая является клинически значимой. Это достигается путем предварительной подготовки клеток reka Luke к имплантации. Вторым этапом является проведение ортотопической имплантации клеток опухоли почки.

Далее, после того как опухоль разрослась, первичная опухоль удаляется путем проведения нефрэктомии. Заключительным этапом является мониторинг прогрессирования спонтанных метастазов после нефрэктомии и оценка распространения заболевания в различных локализациях. В конечном счете, этот протокол позволяет проводить мониторинг спонтанной метастатической почечно-клеточной карциномы и предлагает руководство по стандартизации оценки эффективности экспериментальных методов лечения.

Основное преимущество этой методики перед существующими методами, такими как эктопическая, часто поверхностная или подкожная имплантация опухолевых клеток, заключается в том, что она повторяет почечно-клеточную карциному или ПКР, как она проявляется у пациентов, что включает в себя способность опухолевых клеток распространяться на остальную часть тела. Применение этого метода распространяется на лечение почечно-клеточной карциномы, потому что именно систематическое метастатическое заболевание является основной причиной смертности у пациентов. Мышиные модели обычно не лечат спонтанное метастатическое заболевание, которое иногда может следовать за нефрэктомией.

Тем не менее, этот метод может дать представление о спонтанном метастатическом заболевании ПКР. Он также может применяться при других типах рака, где типично удаление первичной опухоли и основной причиной смертности является рецидив хирургического метастатического заболевания. Это включает в себя модели молочной железы и меланомы.

Как правило, люди, плохо знакомые с этим методом, испытывают трудности, прежде всего, из-за трудностей с поиском почки и обеспечением того, чтобы опухолевые клетки оставались локализованными после имплантации и не протекали. Во-вторых, эффективность не достигается эффективно и позволяет обеспечить послеоперационное восстановление. Перед ортотопической имплантацией мышиную люциферазу помечали клетки reca или reka Luke в качестве монослоя до 75% беглости после трипсина, изации и суспензии ресуса в центрифуге, содержащей 5% FBS, клетки повторяли три раза с промывкой в PBS, затем ресуспендировали клетки в свободных сыворотках средах до концентрации пять раз по 10 до четвертого renco Luke на пять микролитров свободной сыворотки.

После обезболивания кишечника морской мыши от двух до 3% изо фтора уколите ногу, чтобы проверить достаточную анестезию, после нанесения ветеринарной мази на глаза для предотвращения высыхания, поместите мышь в правое боковое положение лежа и побрейте левую сторону между четырьмя и задними конечностями. Затем наносят спирт и йод вдоль дорсальной поясничной области. Хирургическими ножницами сделайте разрез кожи в один сантиметр в продольном направлении между последним ребром и тазобедренным суставом.

Затем с помощью тупых ножниц для препарирования разрыхлите соединительную ткань под кожей. Далее с помощью хирургических ножниц сделайте разрез 0,5 сантиметра в продольном направлении в брюшной стенке. Теперь с помощью изогнутых щипцов аккуратно надавите вниз вокруг открытой раны.

Это выводит почку наружу и позволяет провести мягкую иммобилизацию органа перед инъекцией. Загрузите в шприц Гамильтона пять микролитров приготовленной клеточной смеси для поверхностной субкапсулярной имплантации. Держите иглу параллельно продольно ориентированной почке скошенным краем вверх и введите иглу под капсулой почки, но над паренхимой.

Как только игла будет на месте, введите все клетки, пока не сформируется небольшой белый пузырь. Медленно извлеките иглу из капсулы и сразу же с помощью стерильного аппликатора с ватным наконечником заблокируйте место инъекции для внутренней субкапсулярной имплантации. Начиная со стороны почки, противоположной желаемому месту имплантации.

Держите иглу скошенным краем вверх и внутрь. Вводите его через внутреннюю часть почки до тех пор, пока игла не станет видимой, но не прокалывая субкапсулярное пространство с обратной стороны. Вводите клетки до образования белого пузыря и промокните место инъекции, чтобы предотвратить утечку.

Аккуратно верните почку в полость тела. Закройте брюшную стенку с помощью рассасывающегося нити 5.0 Vicryl. После завершения скрепите слой кожи вместе и установите два-три зажима для раны перед восстановлением.

Введите 500 микролитров 0,9% натрия хлорида и 100 микролитров бупренорфина подкожно. Через 26-30 дней после имплантации обезболите животное и обнажите почку, как и раньше. Затем с помощью щипцов аккуратно удалите соединительную жировую ткань с нянчатого конца почки и удалите надпочечник с черепного конца.

С помощью щипцов аккуратно захватите почку, а затем наложите рассасывающийся шов 5.0 Vicryl вокруг мочеточника, почечной артерии и почечной вены. Далее медленно завяжите двойной узел, предварительно зажав нити гемостатиками. С помощью ножниц разрежьте над узлом и удалите почку.

После удаления почки тщательно проверьте наличие кровотечения из прилива, артерии и при необходимости прижгите. После наложения швов на брюшную стенку тела с помощью 5.0 Vicryl используйте зажимы для раны, чтобы закрыть кожу. Ежедневно наблюдайте за животным на предмет признаков дистресса, кровотечения или ограниченной подвижности.

После усыпления животного с помощью хирургических ножниц сделайте разрез, начинающийся над мочеиспускательным каналом и продолжающийся вверх по грудной полости до нижней челюсти. Используйте ножницы с тупым концом, чтобы отделить кожу от мышц брюшной стенки. Далее разрежьте кожу вдоль рук и ног и медленно снимите кожу.

Внимательно осмотрите кожу, фасцию и брюшную стенку на предмет узелков. Затем осмотрите поверхностные лимфатические узлы. Сделайте надрез в брюшной стенке и разрежьте по левой и правой боковой сторонам до диафрагмы.

С одним горизонтальным срезом. Удалите переднюю часть брюшной стенки, чтобы обнажить внутренние органы. Осмотрите ненарушенный внешний вид внутренних органов на предмет заметных опухолей.

Также обратите внимание на содержимое желудка и кишечника на наличие признаков приема пищи или кровотечения. Визуально оценивайте каждый орган на наличие или отсутствие опухоли, используя контрольный список из 22 участков, баллы составляются в таблице для животных в определенной группе, чтобы сравнить распределение заболевания. Теперь аккуратно удалите печень и промойте ее PBS.

Затем исследуйте его на наличие грубых опухолей или аномалий и оцените, как и раньше. Затем приступайте к удалению и надрезу селезенки, почек и поджелудочной железы. Затем осмотрите брюшные лимфатические узлы, включая поясничные, крестцовые, почечные и брыжеечные лимфатические узлы.

После оценки диафрагмы на признаки метастатического распространения удалите диафрагму и сделайте два боковых разреза в грудной полости, удалив лобную часть для обнажения легких и сердца, аккуратно приподнимите пищевод и разрежьте трахею над сердцем. После удаления легких и сердца оцените ткани на наличие узелков. Далее с помощью щипцов сдавливают сердце.

Отсутствие пружинящей консистенции может свидетельствовать о наличии опухоли. Наконец, используйте хирургические ножницы, чтобы разрезать череп линейно. Аккуратно удалите небольшие кусочки черепа, пока не обнажится весь мозг.

Визуальная система подсчета баллов была использована для оценки заболевания, распространения и тяжести заболевания в пяти различных группах животных. В этих группах наблюдалась разная степень и тяжесть заболевания. Дополнительное измерение, состоящее из биолюминесцентной визуализации сразу после жертвоприношения, было использовано для количественной оценки микро- и макрометастатических поражений.

После того, как имплантация, нефрэктомия или вскрытие могут быть выполнены за 5-10 минут на животное, если все сделано правильно. Изучить, будут ли реакции на лечение различаться между типами метастатических опухолевых клеток. Клетки метастатической почечно-клеточной карциномы.

В настоящее время пациентов имплантируют непосредственно животным для оценки местного и метастатического роста заболевания после его развития. Этот метод проложил путь исследователям в области ПКР к изучению клинически значимого прогрессирования заболевания и реакции на терапию. В частности, различаются ли эти реакции в зависимости от первичного локализованного заболевания или спонтанного метастатического роста.

Не забывайте, что работа с крошечными животными, которые подвергаются нескольким операциям, требует строгого соблюдения рекомендаций по протоколу для животных и стерильных условий. Комфорт и выздоровление животного являются критически важными факторами для правильного выполнения этой процедуры.