Количественная Single микрососудов проницаемость в изолированном крови-перфузии Rat Подготовка легких

Общая цель этой процедуры заключается в количественной оценке проницаемости в отдельных микрососудах изолированных легких крыс с использованием метода, основанного на флуоресценции. Это достигается путем первичной изоляции легких крысы и перфузии их аутологичной кровью. Вторым этапом процедуры является введение микрокатетера левого предсердия в небольшую область легкого для вливания флоры четырьмя мечеными декстринами.

Затем, пока меченый декстрин вводится, собираются изображения микрососудов легких. Заключительным этапом является количественная оценка проницаемости отдельных микрососудов по изображениям с помощью программного обеспечения. В конечном счете, результаты могут показать степень проницаемости микрососудов легких в различных условиях, например, после лечения ЛПС.

Эту процедуру будет демонстрировать доктор Кава Касами, постдокторант из моей лаборатории Бегин, выполняя трахеотомии самцу крысы в подтвержденной хирургической плоскости анестезии. Используйте трахеальную канюлю PE 90 и зафиксируйте ее швами. Затем введите в сердце от 100 до 200 единиц гепарина с помощью иглы-бабочки 21 калибра.

Подождите одну минуту, а затем обескровите кровь. Соберите кровь и отложите ее вместе с солевым раствором. Наполните две канюли, изготовленные из трехмиллиметровой тигональной трубки длиной четыре сантиметра и развальцованные с одного конца.

Теперь проведите торакотомию. Сделайте разрез в правом желудочке, достаточно большой для канюли, и проведите по раздутому логову одной канюли по направлению к легочной артерии. Закрепите канюлю швами.

Используйте ту же технику для введения другой канюли в верхушку левого желудочка по направлению к левому предсердию. Закрепите его пуповинной лентой шириной два миллиметра. Теперь удалите мешающие соединительные ткани и удалите длинную и сердечную вместе с канюлями.

Переложите их в чашку Петри диафрагмальной поверхностью легкого вверх и выровняйте все три канюли. Переместите расчлененный препарат на регулируемую ступень, оснащенную тигонной трубкой No 18, прикрепленной к датчикам давления, которые служат входной и выпускной трубками. Теперь смешайте сбор крови с равным объемом 5% раствора альбумина.

Добавьте эту смесь в загрузочный резервуар. Запускайте насос с 14 миллилитров в минуту. Следите за тем, чтобы на трубке не было пузырьков воздуха.

На подготовке. Прикрепите легочную артерию к входной трубке легкого, а канюлю левого предсердия — к выходной трубке. Убедитесь, что в трубке нет воздуха, а также убедитесь, что шунт открыт.

Подсоедините трахейную канюлю к третьему датчику давления. Надуйте легкие через трахейную канюлю с 30% кислорода. Поддерживайте в легких давление воды в пять сантиметров.

Теперь зажимаем шунт и запускаем насос с 14 миллилитров в минуту. Чтобы начать перфузию легких во время перфузии, отрегулируйте насос так, чтобы легочное давление поддерживалось на уровне около 10 сантиметров воды, а давление в левом предсердии поддерживалось на уровне трех сантиметров воды. Начните с подготовки легких, наполненных кровью.

Сначала постройте инфузионный катетер из трубки PE 10 длиной 40 сантиметров, вставленной в трубку PE 90 длиной 30 сантиметров. Присоедините другой конец трубки PE 10 к игле 30 калибра, прикрепленной к шприцу объемом один куб. см. Поднесите конец трубки, прикрепленной к легкому, над препаратом и прикрепите к нему инфузионный катетер.

Направьте инфузионный катетер в левое предсердие, а затем в легкое, пока он не встретит сопротивление. Чрезмерное усилие приведет к травмированию легкого. Правильный разрез микрокатетера имеет решающее значение, так как любое повреждение легкого микрокатетером снизит успех протокола.

Далее наполните шприц звонками и прикрепите его к насосу. Медленно настаивайте раствор со скоростью 10 микролитров в минуту. Постепенно место инфузии становится бледным по сравнению с остальной частью легкого, чтобы поверхность легкого быстро оставалась влажной в пластике, за исключением места инфузии.

Теперь, чтобы визуализировать легкое, создайте смотровое окно, прикрепив уплотнительное кольцо к 22-миллиметровому покровному стеколу. Используя смазку для запорного крана, закрепите уплотнительное кольцо на держателе пробирки. Затем расположите окошко над местом инфузии.

Завершите настройку, взмахнув объективом в 20 раз над защитным стеклом и сосредоточившись на легком. Никаких визуальных искажений не ожидается. Теперь влейте в легкое раствор по выбору.

В этом примере, после физиологического раствора, один миллилитр конъюгированного декстрина ZI вводится в легкое через шприцевой насос в течение 60 минут. Используя программное обеспечение для визуализации, записывайте одно изображение в минуту в течение одного часа инфузии и продолжайте запись во время последующего этапа вымывания еще 10 минут После введения декстрина Фитца промойте его, вводя раствор легочного звонка в течение как минимум еще 10 минут с той же скоростью потока. Позже. При анализе полученных изображений оцениваются максимальные интенсивности флуоресценции в интересующей области во время подходящей инфузии.

Затем оцените максимальную интенсивность флуоресценции остаточной флуоресценции после 10-минутного вымывания Изменения проницаемости сосудов были исследованы с помощью инфузии фитзи декстрина после лечения бактериальным липополисахаридом, поскольку это широко используемая модель ЛИ. Остаточная флуоресценция была низкой в микрососудах, обработанных рингерами, но высокой в тех, кто получал ЛПС. Кроме того, по сравнению с инфузией Рингера, инфузия ЛПС привела к значительному снижению индекса проницаемости, что свидетельствует о глобальном увеличении проницаемости во всех сосудах в поле изображения.

Кроме того, по сравнению с инфузией Рингера, инфузия ЛПС привела к значительному снижению индекса проницаемости, что свидетельствует о глобальном увеличении проницаемости во всех сосудах в поле изображения. После просмотра этого видео у него должно быть хорошее понимание того, как подготовить изолированные легкие для профилактики птиц, ввести микрокатетер левого хвоста и определить проницаемость в микро.