Развитие амелогенина-хитозана гидрогеля для

Общая цель данной процедуры заключается в разработке протокола изготовления гидрогеля из AMLO и хитозана для реконструкции поверхностного слоя эмали. Это достигается путем предварительного подготовки травленых срезов зуба. На втором этапе подготавливается свежий гидрогель из AMLO и хитозана.

Затем на поверхность среза зуба наносится гидрогель AMLO и китана. В завершение проводится регенерация зубной эмали с использованием гидрогеля AMLO и хизана в искусственной слюне. В конечном итоге для оценки механической прочности вновь сформированного слоя и его сцепления с естественной эмалью могут быть использованы ультразвуковая обработка и наноиндентирование.

Значение данного метода заключается в разработке технологии, которая при применении к пораженной зубной эмали у взрослых и детей останавливает развитие ранних кариозных поражений, восстанавливает утраченную в результате кариеса эмаль, сохраняет структуру зуба и предотвращает прогрессирование кариеса. Процедуру продемонстрирует доктор Читтар, постдокторант моей лаборатории. Начните с выбора человеческого третьего моляра без пломб и признаков кариеса.

Используйте алмазную пилу с водяным охлаждением и низкой скоростью вращения, чтобы разрезать коронку продольно на срезы толщиной два миллиметра, после чего ультразвуковым методом удалите корневую часть моляра. Очищайте срезы в течение двух минут, а затем трижды промойте их ионизированной водой для имитации эрозивных поражений. Обработайте два среза 30% фосфорной кислотой в течение 30 секунд.

Затем немедленно промойте их ионизированной водой. После этого повторно очистите вытравленные срезы в ультразвуковой ванне в течение двух минут и снова промойте их ионизированной водой.

Повторите процедуру еще трижды. Для приготовления стокового раствора Kazan сначала растворите Kazan в 1% (об./об.) растворе уксусной кислоты (концентрация 1% масс./об.), после чего перемешивайте при 80 °C в течение ночи.

После охлаждения раствора до комнатной температуры профильтруйте esan через фильтр с порами 0,45 мкм, затем добавьте 1 M гидроксид натрия для доведения pH до 5,0. Для приготовления основного раствора кальция и фосфата отвезшайте хлорид кальция и приготовьте 0,1 M раствор. Затем перемешайте раствор на вортексе до полного растворения и доведите значение pH до 11 с помощью 1 M гидроксида натрия.

Затем отвесьте натрия фосфат diba. Приготовьте 0,1 молярный раствор и перемешайте на вортексе до полного растворения. Для приготовления гидрогеля AMLO Genin kaizan добавьте 960 µL свежеприготовленного 1%esan раствора в пробирку, содержащую 200 µg рекомбинантного свиного AMLO genin.

Затем перемешайте раствор на вортексе до полного растворения. Теперь добавьте 25 µL 0,1 М раствора хлорида кальция, а затем 15 µL 0,1 М раствора дигидрофосфата натрия к раствору AMLO, содержащему ozan. Перемешивайте раствор на вортексе в течение пяти минут.

Затем осторожно добавьте одномолярный раствор гидроксида натрия, чтобы довести pH раствора AMLO и ozan до 6.5. При достижении значения pH 6.5 сформируется гидрогель AMLO и ozan, который инициирует регенерацию эмали в AMLO иaz. Сначала доведите pH раствора искусственной слюны до 7.0 с помощью одномолярного раствора гидроксида натрия и храните раствор при температуре 4 °C. Затем с помощью шприца нанесите около 20 µL гидрогеля AMLO и chizen на край среза зуба и поместите его в эксикатор при комнатной температуре.

Через два часа добавьте в раствор слюны фторид натрия в концентрации 300 PPM, затем перенесите срез зуба в стакан, содержащий 30 миллилитров этого раствора. Накройте стакан алюминиевой фольгой и поместите его в термостат при температуре 37 °C. Наконец, через три-семь дней извлеките срез зуба и поместите его в эксикатор при комнатной температуре до высыхания; после восстановления с помощью AMLO и хитозанового гидрогеля в течение семи дней на поверхности протравленной эмали формируется эмалеподобный слой толщиной 15 микрометров.

Вновь выращенный слой состоит из высокоупорядоченных массивов кристаллов диаметром около 50 нанометров, растущих преимущественно вдоль оси c перпендикулярно поверхности. Обратите внимание, что эти иглообразные кристаллы организованы в пучки, подобные основным единицам природной эмали. Изображение дифракции электронов в выбранной области восстановленного слоя демонстрирует дугообразный рисунок, указывающий на иерархическое выравнивание вновь выращенных кристаллов.

Рентгеноструктурный анализ вдоль направления 0 0 2 подтверждает, что новый выращенный слой состоит из апатита, который ориентирован вдоль кристаллографической оси C, что согласуется с данными сканирующей электронной микроскопии и дифракции электронов на выбранной области. На данном изображении показана микроструктура границы раздела между новым выращенным слоем и природной эмалью. Обратите внимание, что новые кристаллы росли не в том же направлении, что и исходные кристаллиты эмали, и что белок-опосредованный рост апатита приводит к перпендикулярной ориентации новых кристаллов относительно кристаллов природной эмали. На границе раздела между новым выращенным слоем и подложкой из эмали явного зазора не наблюдается.

На наноуровне эмаль и повторно выросшие кристаллы слились, образовав бесшовный интерфейс. После 10 минут ультразвуковой обработки новый слой, выращенный в хитозольном гидрогеле AMLO Genin, остается плотно связанным с поверхностью эмали, а организованная структура сохраняется в образце, обработанном гидрогелем tizen без am mologen. При этом наблюдается значительный зазор между эмалью и репарированным слоем, что позволяет четко отличить новый слой от естественной эмали.

В данном эксперименте генин AMLO в новообразованном слое был помечен методом иммунофлуоресценции; наличие генина AMLO затем подтверждалось зеленой флуоресценцией внутри этого слоя. Как показано на графике, после кислотного травления твердость и модуль упругости поверхности эмали снижаются почти на 98% и 88% соответственно. В контрольной группе, где применялся озоновый гидрогель без генина AMLO, наблюдалось лишь ограниченное улучшение как твердости, так и модуля упругости.

Напротив, после минерализации в гидрогеле AMLO и ozan наблюдается почти четырехкратное увеличение модуля упругости и девятикратное увеличение твердости после его разработки. В рамках VI и последующей оценки на моделях данный протокол может быть расширен для разработки технологии лечения дефектов эмали, таких как начальный кариес и эрозия эмали.