В сочетании ДНК-РНК Люминесцентная

27.7K просмотров

Цитируется: 14

15:54 мин.

14 июня 2014 г.

10.3791/51628-v

14 июня 2014 г.

27.7K просмотров

Tahsin Stefan Barakat¹ , Joost Gribnau¹

¹Department of Reproduction and Development, Erasmus MC - University Medical Center

Люминесцентная в гибридизация (FISH) позволяет обнаружить нуклеиновых кислот в их родной среде внутри клетки. Мы здесь опишем протокол для комбинированной, одновременного обнаружения РНК и ДНК с помощью FISH, который может быть использован для изучения инактивации Х-хромосомы в мышиных эмбриональных стволовых клеток.

Больше видео

Комбинированная ДНК-РНК FISH

детекция РНК Xist

мечение ДНК-зондов

ник-трансляция

иммунофлуоресцентная микроскопия

фиксация параформальдегидом

гибридизационный буфер

флуоресцентные антитела

Chapters in this video

0:05

Название

2:57

Индукция дифференцировки эмбриональных стволовых клеток женского пола для инициации инактивации X-хромосомы

4:55

Фиксация дифференцированных ЭСК для последующего анализа методом комбинированного ДНК-РНК FISH

5:33

Маркировка ДНК-зондов для экспериментов FISH

8:02

Пермеабилизация, предварительная обработка и гибридизация фиксированных клеток для комбинированного ДНК-РНК FISH

11:04

Постгибридизационные промывки и антитело-опосредованная детекция зонда

13:21

Результаты: визуализация инактивации X-хромосомы в дифференцирующихся ЭСК женского пола с помощью комбинированного ДНК-РНК FISH

14:57

Заключение