Синтез и очистка Iodoaziridines Вовлечение Количественный Выбор оптимального стационарной фазы для хроматографии

Общая цель данной процедуры заключается в подготовке и очистке конечного иодированного соединения. Это достигается путем предварительного получения диметиллития путем депротонирования диметилметана при низкой температуре и последующего взаимодействия с иммуном. На втором этапе реакционную смесь быстро нагревают для стимулирования циклизации промежуточного дииодида с получением целевого иодуридина.

Далее оценивается стабильность продукта I-о-уридина по отношению к различным неподвижным фазам, используемым для хроматографии, чтобы определить наиболее подходящую для очистки. Заключительным этапом является очистка I-о-йода и проведение протонного ЯМР-анализа. В конечном итоге данный скрининг неподвижных фаз для хроматографии используется для того, чтобы показать, что модифицированная активность четыре от Illumina является наиболее подходящей для очистки IDO-йода.

Идея этого метода возникла у нас, когда мы обнаружили, что новые йодированные продукты IDO нестабильны при хроматографии на силикагеле, и нам потребовался альтернативный способ очистки. На основе этого мы разработали процедуру оценки стабильности йода IO по отношению к различным неподвижным фазам для хроматографии, которую также можно применять к другим потенциально чувствительным соединениям. Эту процедуру продемонстрируют Том и Дом, аспиранты моей исследовательской группы.

Сначала прокалите на огне круглодонную колбу объемом 100 мл с магнитным перемешивателем и септой в потоке аргона. После охлаждения колбы до комнатной температуры с помощью шприца добавьте 5,7 мл безводного тетрагидрофурана и 2,7 мл безводного этилового эфира, а затем с помощью микрошприца добавьте 315 µL свежеперегнанного гексаэтилдилана. Поместите колбу в подходящего размера сосуд, обеспечивающий ее полное погружение.

После включения перемешивания добавьте сухой лед и ацетон в охлаждающую баню, чтобы охладить раствор до −78 °C. Затем накройте баню алюминиевой фольгой, чтобы минимизировать воздействие внешней среды на реакционный сосуд. После этого медленно, по каплям, с помощью шприца в течение двух-трех минут добавьте 0,6 мл 2,5 M раствора н-бутиллития в гексанах.

После перемешивания смеси при -78 °C в течение 30 минут. Для приготовления раствора гексаэтилдилития с помощью шприца добавьте 1 mL безводного тетрагидрофурана в просушенную над пламенем круглодонную колбу объемом 10 mL. Затем с помощью микрошприца добавьте 135 µL диизопропиламида лития в гексаметилдисилазане и осторожно перемешайте содержимое колбы круговыми движениями для обеспечения однородности раствора.

Затем по каплям в течение двух минут добавьте раствор ди-ITOM метана к раствору гексаэтилдилита лития при температуре -78 °C, перемешивая раствор в течение 20 минут. Отвесьте 135 mg амина в другую просушенную в пламени круглодонную колбу объемом 10 mL и растворите его в 2 mL безводного тетрагидрофурана. По истечении 20 минут депротонирования по каплям в течение пяти минут добавьте раствор имина к раствору ди-итометиллития при температуре -78 °C.

Сразу после завершения покапельного добавления извлеките реакционный сосуд из бани с сухим льдом. Оберните колбу алюминиевой фольгой и перенесите ее в ледяную водяную баню при температуре 0 °C. Перемешивайте раствор в течение 15 минут при 0 °C.

После этого остановите реакцию, добавив 30 milliliters насыщенного водного раствора гидрокарбоната натрия. Перенесите смесь в делительную воронку и добавьте 30 milliliters дихлорметана. Встряхните смесь, сбросьте давление из воронки и отделите нижний органический слой.

После двукратного повторения экстракции добавьте сульфат натрия в объединенные органические слои, чтобы удалить воду из раствора. Затем отфильтруйте сульфат натрия методом вакуумного фильтрования, используя стеклянную воронку с ватным тампоном, соберите фильтрат в круглодонную колбу объемом 250 мл и удалите растворитель при пониженном давлении на ротационном испарителе. Таким образом будет получен неочищенный образец целевого продукта — ITO-уридина.

Добавьте 1 3 5 ТРИМЕТоксибензол в качестве внутреннего стандарта в неочищенный дин и растворите образец неочищенного дина в дихлорметане. Убедитесь, что вещество полностью растворилось. Возьмите аликвоту этой смеси, затем удалите растворитель при пониженном давлении.

По завершении проанализируйте образец с помощью протонного ЯМР-спектроскопии. После проведения ЯМР-анализа откройте зарегистрированный протонный ЯМР-спектр в стандартном программном обеспечении для обработки ЯМР-данных, таком как mast nova. Щелкните правой кнопкой мыши по спектру и выберите функцию интегрирования.

Затем выберите ручной режим (manual) для использования инструмента интегрирования. Нажмите и перетащите курсор, чтобы охватить ширину пиков при 6.08 PP m и 4.87 PP M для интегрирования сигналов внутреннего стандарта и сигнала aine CHI соответственно. Щелкните правой кнопкой мыши по интегралу пика при 6.08 PP m, выберите «редактировать интеграл» (edit integral) и измените нормализованное значение на 3.0.

Затем используйте обновленное значение интеграла для сигнала CHI иода, чтобы определить выход иода I OTO. После завершения ЯМР-анализа смешайте 25 граммов следующих неподвижных фаз с 50 миллилитрами 5% раствора этилацетата в гексане в шести отдельных конических колбах объемом 250 миллилитров, содержащих магнитные мешалки. Приготовьте 50 миллилитров 5% раствора этилацетата в гексане для использования в качестве контроля.

Затем перемешайте суспензии на магнитной мешалке. Добавьте по 2 мл аликвот внутреннего стандарта I OTO Azarin в каждую коническую колбу при комнатной температуре. После этого перемешивайте смеси суспензий в течение 30 минут.

Через 30 минут отфильтруйте каждую из суспензий под вакуумом, используя центрированную воронку, собирая каждый фильтрат в круглодонную колбу объемом 250 мл. Дважды промойте осадок в центрированной воронке 30 мл дихлорметана. Удалите растворитель из полученных образцов с помощью роторного испарителя.

После этого проанализируйте образцы методом ПМР-спектроскопии, чтобы рассчитать количество восстановленного иода в каждом случае. Как было описано ранее, запишите выход продукта в лабораторном журнале. Сравните выход I OTO Aine, полученный при использовании каждой протестированной неподвижной фазы, с полученным ранее, чтобы определить образец с наивысшим выходом.

Затем повторите описанный ранее синтез для получения необработанной смеси иода IO, чтобы обеспечить базовую активность Illumina. В-четвертых, добавьте 100 г базовой активности Illumina в круглодонную колбу объемом 500 мл, а затем добавьте в колбу 10 мл воды. Закрыв колбу стеклянной пробкой, интенсивно встряхните ее до полного исчезновения комочков, что будет свидетельствовать о равномерном распределении воды в Illumina.

После того как смесь Illumina остынет до комнатной температуры, очистите сырой иод IO методом колоночной хроматографии, используя базовую активность Illumina четыре. В качестве неподвижной фазы проводите элюирование гексаном с градиентом до 5% этилацетата. Объедините фракции, содержащие продукт, в круглодонной колбе и удалите растворитель с помощью роторного испарителя для получения чистого иода I oto.

Перед очисткой методом протонного ЯМР был рассчитан выход I oto a iodine, составивший 59%. Однако очистка этого I oto a iodine была затруднительна, и соединение подверглось значительному разложению при очистке на силикагеле на базовой Illumina. В результате четвертой стадии продукт был получен с выходом 48%.

Анализ ПМР-спектроскопии позволил определить серию выходов для стационарных фаз относительно внутреннего стандарта; basic Illumina activity four обеспечил самый высокий выход, составивший 53%, что наиболее близко к выходу по данным ЯМР. Следовательно, для окончательной очистки методом ИК-спектроскопии был выбран basic Illumina activity four.

Широкий выбор ITO-аминов может быть получен с высоким выходом. С реакцией совместимы как алифатические, так и ароматические и третичные амины, включая стерически затрудненные трет- и орто-замещенные производные. На основе приведенных примеров предполагается, что реакция протекает через депротонирование с последующим нуклеофильным присоединением.

Для промежуточного амино-гем-дийодида последующее нагревание вызывает высокодиастереоселективную циклизацию с преимущественным образованием цис-йода. Из-за слабых стерических взаимодействий в переходном состоянии циклизации в процессе оптимизации реакции контроль температуры и времени имел решающее значение для результата реакции. Гашение реакции без нагревания приводило к получению конечного IO-йода и амино-гем-дийодида.

Однако продукты подвергаются деградации в условиях реакции, чего можно избежать, нагревая реакционную смесь и сокращая время проведения реакции. После просмотра этого видео вы должны получить четкое представление о том, как синтезировать иридиевый продукт IO и оценить его стабильность по отношению к широкому спектру неподвижных фаз для очистки методом хроматографии. Не забывайте, что работа с н-бутиллитием может быть крайне опасной, поэтому необходимо соблюдать меры предосторожности, такие как работа в атмосфере азота и безопасное гашение избытков.

При выполнении данной процедуры всегда следует использовать реагент.