Трансплантация кожи хвоста изучать Аллогенная лимфоцитов CD4 ответов у мышей

Общей целью данной процедуры является проведение трансплантации кожи хвоста. Для изучения Т-клеточного отторжения или индукции толерантности на мышиной модели это достигается путем предварительного забора кожи хвоста у донорской мыши. На втором этапе на животном-реципиенте подготавливается место трансплантации.

Далее трансплантат пересаживается и фиксируется тканевым клеем и повязкой на заключительном этапе. Повязка снимается на седьмой день после трансплантации, и трансплантат забивается. В конечном счете, может быть изучен аллоиммунный ответ, опосредованный Т-клетками.

Этот метод трансплантации кожи хвоста обеспечивает мощную модель для изучения Т-клеточного зависимого отторжения и индукции толерантности во время аллогенных иммунных реакций у мышей. Перед началом процедуры раскройте бинты на пальцах и нанесите вазелин на подушечки раны ватным тампоном, убедившись, что марля полностью покрыта. Далее продезинфицируйте хвост усыпленной мыши-донора дезинфицирующим раствором.

Затем расположите хвост на чистой пластиковой доске. Верхнюю черную полосу переверните вниз и сделайте продольный поверхностный разрез через кожу по средней линии хвоста. С помощью захватывающих щипцов отклейте кожу, а затем поместите ткань в 10-сантиметровую чашку для клеточной культуры, наполненную 10 миллилитрами HBSS.

Выбрейте тыльный участок мыши-реципиента, находящейся под наркозом, и используйте сухой кусок марли, чтобы удалить любые загрязняющие волоски. Продезинфицировав выбритое место трансплантации асептическим раствором, прищипните кожу щипцами в средней правой части тыльной стороны и с помощью изогнутых ножниц сделайте круглый разрез примерно один на 0,6 сантиметра в диаметре. Затем с помощью скальпеля вырезайте трансплантат из кожи вырезанного донорского хвоста, обрезав углы, чтобы округлить ткань, нагрузите трансплантат на скальпель и промокните излишки HBSS стерильным ватным тампоном.

Затем поместите высушенную ткань на ложе трансплантата мыши-реципиента. Избегайте наложения кожи донора и хозяина, нанося тканевый клей исключительно на контактную зону. Затем оберните пластырем без складок вокруг талии мыши и наложите клейкую неэластичную повязку, чтобы прикрепить пластырь к мыши, чтобы мышь не зацепилась зубами за бинт.

Во время восстановления сделайте трехмиллиметровый разрез в верхней вентральной части материала. После полного выздоровления на утепленной грелке верните пересаженное животное в клетку и оцените его подвижность. Чтобы повязка не была слишком тугой, обрабатывайте мышь сиропом парацетамола в воде животного в течение семи дней.

Через шесть-семь дней используйте стерильные ножницы для артерий, чтобы разрезать и осторожно снять повязки, стараясь не растягивать место трансплантации. Наконец, наблюдайте за трансплантированными мышами на предмет клинических признаков и оценивайте отторжение кожных трансплантатов. В этом эксперименте шести мышам C 57 BL были пересажены аллотрансплантаты IABM 12 и трансплантаты IAB sin.

После снятия повязок трансплантат показал признаки заживления раны без закрытия зоны контакта у шести мышей C 57 BL. Через одну-две недели CD-4-положительное Т-клеточное воспаление привело к появлению некротических участков внутри трансплантата. Отторжение аллотрансплантатов I A BM 12 наблюдалось у шести мышей C 57 BL в течение 13 дней после трансплантации.

В то время как синтрансплантаты переносились до 100 дней. Отторжение кожи с несоответствующими хвостами MHC класса два зависит от наличия аллогенных CD четырех положительных Т-клеток. Например, мыши-нокаут с дефицитом Т-клеток CD с тремя нокаутами E и мышами с дефицитом Т-клеток и мышами с дефицитом В-клеток RAG с двумя нокаутами демонстрируют полное заживление ран и переносят трансплантаты I a BM 12 в течение 100 дней.

Принятие несогласованной кожи хвоста IABM 12 позволяет изучать аллогенные CD четыре положительные Т-клетки и их эффекторные функции на мышиной модели без тяжелых патологий заболевания. Преимущество данной модели трансплантации кожи хвоста заключается в том, что функциональный анализ CD четырех положительных Т-клеток может быть легко выполнен путем адоптивного переноса антигенспецифичных CD четырех положительных Т-клеток В этом репрезентативном эксперименте перенос двух раз по 10 на четвертый антиген специфических трансгенных клеток А КМ был достаточен для того, чтобы индуцировать отторжение графиков IABM 12 у мышей с двумя нокаутами в течение 13 дней. Было обнаружено, что цепь V альфа и бета 8 TCR, экспрессирующая A BM, широко пролиферирует с помощью анализа разведения EFL six 70 и продуцирует ИФН Гамма при стимуляции PMA. Вместе.

Эти данные демонстрируют, что для отторжения одного кожного трансплантата A BM 12 требуется всего несколько аллогенных CD-четырех положительных Т-клеток, что делает их идеальной моделью для анализа аллогенных Т-клеток при отсутствии тяжелой патологии. После просмотра этого видео у вас должно сложиться хорошее понимание того, как проводить пересадку кожи хвоста и успешно контролировать отторжение трансплантата.