Гладких мышц мочевого пузыря Газа Сократимость как метод оценки нижних мочевых путей фармакология

Общей целью данной процедуры является оценка физиологических и фармакологических свойств гладкомышечной ткани мочевого пузыря. Это достигается путем рассечения крысиного пузыря, вскрытия его в плоский лист и разрезания полосок, содержащих гладкую мускулатуру и нервы уротелия. На втором этапе ткань прикрепляется к преобразователю силы, подключенному к усилителям и стимуляторам для измерения сократимости мышц.

На следующем этапе устанавливается исходный тонус и жизнеспособность тканей, а затем полоски подвергаются фармакологической и/или электрической стимуляции. В конечном счете, влияние стимулов на сократительную способность гладкой мышечной ткани мочевого пузыря может быть измерено. Этот метод используется для характеристики воздействия патологических и фармакологических соединений на весь мочевой пузырь, а также на конкретные компоненты ткани мочевого пузыря, такие как гладкомышечные нервы в уротелии, у человека и у животных.

Этот метод широко использовался при разработке методов лечения различных дисфункций мочевого пузыря, поскольку он представляет собой быстрый, простой и воспроизводимый метод скрининга фармакологических агентов в четко определенной и контролируемой среде. После подтверждения анестезии потерей задней конечности изъять рефлекс, побрить живот животного, а затем обнажить органы малого таза через разрез живота по средней линии. Далее определите мочевой пузырь и мочеиспускательный канал, а затем разрежьте шейку мочевого пузыря близко к проксимальному отделу мочеиспускательного канала.

Чтобы удалить мочевой пузырь, немедленно поместите ткань в посуду, покрытую защитой порога, наполненную газированным раствором Creb. Затем, принеся животное в жертву, вставьте тканевые рассекающие штифты через купол мочевого пузыря, шейку и мочеточники, чтобы стабилизировать ткань для дальнейшего рассечения без растяжения ткани. Обрежьте мочевой пузырь от посторонних тканей, а затем откройте ткань от основания к куполу, чтобы создать плоский лист циррозом вниз и просветной стороной вверх.

Поместите рассекающие штифты на каждый угол ткани, а затем удалите мочевой пузырь, шейку и купольную ткань. Затем разрежьте ткань вдоль от основания до купола на полоски примерно два на восемь миллиметров, прикрепив зажим для салфетки к обоим концам каждой полосы. Перенесите полоски в экспериментальные камеры, прикрепив один конец каждой полосы к преобразователю силы, а другой — к неподвижному стержню.

Теперь аккуратно растяните ткани, пока базовое натяжение не достигнет одного грамма. Первоначально ткань имеет тенденцию к расслаблению, что фиксируется как снижение исходного напряжения. Промывайте полоски примерно каждые 15 минут теплыми аэрированными крепами и регулируйте базовое натяжение до одного грамма.

После каждого мытья дайте салфеткам сбалансироваться в течение одного-двух часов, пока они не перестанут расслабляться. Как только исходное напряжение стабилизируется, добавьте хлорид калия непосредственно в ванну на пять минут или до тех пор, пока не будет достигнуто плато, чтобы проверить жизнеспособность тканей. Затем промойте салфетки от трех до пяти раз теплыми аэрированными крепами, чтобы позволить тканям вернуться в состояние, в котором они находились до обработки.

Для фармакологической стимуляции гладкой мускулатуры добавляйте препараты из концентрированных растворов непосредственно в ванну. Например, для стимуляции карбахолем добавьте по 10 микролитров каждой из концентраций стимула в каждую 10 миллилитровую тканевую ванну. Как только отклик от предыдущей концентрации достигает плато.

В параллельные полоски добавьте равное количество средства для нейронной стимуляции гладкой мускулатуры или стимуляции электрическим полем. Установите продолжительность поезда от трех до 10 секунд, а интервал между поездами — интервал не менее одной минуты. После определения частоты импульсов поезда запустите кривую частотной характеристики в диапазоне от 0,5 до 50 герц, чтобы установить интенсивность стимула.

Систематически увеличивайте напряжение до тех пор, пока амплитуда сокращений не достигнет плато, сохраняя частоту постоянной. После того, как параметры стимуляции будут установлены, дайте около 20-30 минут на стимуляцию электрическим полем, вызванные сокращениями, чтобы стабилизироваться перед тестированием препарата. Затем, чтобы проверить влияние альфа-бета-метилена ТП и атропина на стимуляцию электрическим полем, например, выполняют две кривые контрольной частотной характеристики, а затем добавляют 10 микролитров альфа-бета-метилена ТП в тест-полоску и 10 микролитров транспортного средства в контрольные полоски.

Альфа-бета-метилен А ТП непосредственно стимулирует пуриновые рецепторы в гладкой мускулатуре и десенсибилизирует эти рецепторы, вызывая начальное базовое сокращение. После того как отклик вернется к исходному уровню, повторите кривые частотных характеристик во всех полосах. Добавьте в тест-полоску 10 микролитров атропина, а в контрольные полоски – 10 микролитров транспортного средства, а в конце стимуляции электрического поля повторите кривые частотных характеристик.

Проверьте селективность стимуляции электрическим полем путем блокирования нейронной передачи с помощью блокатора натриевых каналов tetra в токсин. Наконец, отсоедините полоски. Аккуратно заблокируйте их на листе папиросной бумаги, чтобы удалить лишнюю жидкость, и измерьте вес каждой полоски на весах, чтобы определить влияние на тонус гладких мышц

Используйте соответствующее программное обеспечение для анализа данных для выбора окна продолжительностью не менее 10-30 секунд до и на пике реакции, вызванной лекарственным препаратом, и измерьте амплитуду сокращения, чтобы определить влияние экспериментальных методов лечения на нервно-вызванные сокращения. Измерьте амплитуду, продолжительность и площадь под кривой не менее трех сокращений до и на пике реакции, вызванной лекарственным препаратом. Наконец, нормализуйте данные, чтобы сравнить результаты по полоскам и фармакологическому лечению.

Спонтанная миогенная активность – это характеристика гладкой мускулатуры, которая изменяется в процессе постнатального развития и патологии. В этом репрезентативном эксперименте полоски от новорожденных крыс демонстрируют большую амплитуду низкочастотных ритмических сокращений, в то время как полоски от взрослых крыс демонстрируют малую амплитуду высокочастотной активности после травмы спинного мозга. Неонатальный паттерн возобновляет отин, A-K-C-N-Q открыватель каналов снижает амплитуду спонтанной активности в полосках от взрослых крыс тонус гладкой мускулатуры и сократительные свойства, на которые может влиять уротелий и слизистая оболочка, являются важными факторами для правильной функции мочевого пузыря во время накопления мочи и мочеиспускания.

Например, на этом графике концентрационная зависимость повышает тонус гладких мышц. Карическим криком проиллюстрирована активация мускариновых рецепторов в полосках мочевого пузыря свиньи. Снижение сократительной способности мышц в ответ на лечение карбахолом наблюдается в присутствии слизистой оболочки.

Как показано на этом графике, пять четырех рецепторов HT экспрессируются в парасимпатических нервах в первую очередь, и их активация повышает уровень ацетилхолина. Эти графики иллюстрируют различную эффективность и потенцию возбуждающего эффекта агониста из пяти HT четырех рецепторов цизаприда на мочевой пузырь человека по сравнению с полосками подвздошной кишки. Видовые различия, которые существуют в ряде рецепторов, могут быть оценены с помощью этого метода полоски мочевого пузыря.

Например, эти данные показывают, что антагонисты рецепторов бомбезина оказывают возбуждающее действие на мочевой пузырь крысы, не оказывая никакого влияния на полоски мочевого пузыря мышей или свиней. Для фармакологической стимуляции важно обращать внимание на концентрацию, время и продолжительность применения препарата. Для того чтобы избежать неспецифического воздействия на другие рецепторы или десенсибилизации целевых рецепторов для нейронной стимуляции важно правильно подобрать параметры для стимуляции электрическим полем в соответствии с целью эксперимента, а также следить за тем, чтобы стимул не активировал гладкую мускулатуру напрямую.